qPCR 曲线「丑」到拿不出手！除了引物，这些问题也要注意
qPCR 曲线「丑」到拿不出手！除了引物，这些问题也要注意
ShengWuXueBa
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师弟： 师兄，我太难了！辛苦一周的 qPCR 溶解曲线被老师嫌弃「丑」爆了! 我该怎么办？
师兄： 溶解曲线异常见现象有出现双峰、杂峰以及 NCT 起峰等等，先看看你的数据和曲线特征，针对问题，对症下药！
除了熔解曲线，RNA 降解、扩增曲线杂乱、扩增无法到达平台期、复孔重复性差、CT 值异常 等问题也是层出不穷，但种种问题都不能一概而论，对症下药最重要。
如果你也有以上 qPCR 实验问题，别慌！为了让大家少走弯路， 11 月 15 日 19:00 赛默飞联合丁香园开展 qPCR 专题直播课程， 围绕「从入门到精通，qPCR 疑难、技巧轻松搞定」 ，全方位剖析 qPCR 实验技巧、并有常见问题解析和案例分享，帮助大家实现实验进阶，得到理想曲线和数据。
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直播内容抢先看：
1. 如何设计「好」引物？qPCR 引物设计原则及注意点：
引物设计跨内含子（防止非特异性扩增），注意不同转录本之间的差异，扩增效率在 90～110% 之间，引物特异性验证（Primer-Blast 序列比对及溶解曲线分析）；
2. CT 值异常分析：
Ct 值过大：可能是模板浓度低，扩增效率低或者体系存在 PCR 抑制物。应注意提高模板浓度，降低退火温度等优化反应程序。
Ct 值过低：可能是模板浓度高，引物设计不合适。因此应减少模板量或稀释 cDNA，优化程序避免非特异性扩增。
CT 值重复性差：仪器、试剂、耗材、实验操作细节等众多因素，具体问题具体分析。
3. qPCR 扩增曲线异常：正常扩增曲线应呈平滑 S 型。
常见异常包括扩增曲线锯齿状（RNA 浓度低或体系含有杂质）；
无法到达平台期（模板浓度太低，循环数太少或扩增效率低）；
除了 CT 值、扩增曲线异常，我们还常遇到 RNA 降解、引物特异性差等各种问题！报名本次直播，带你从实验流程出发，聚焦 qPCR 疑难问题、实验技巧分享。 现场还有一对一答疑、有机会赢取美的暖风机、膳魔师不锈钢真空保温杯、小米电吹风、不锈钢指甲套装、帆布包等 120 份好礼！
内容策划：邹礼平 内容审核：钟可可
题图来源：图虫创意
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