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盘点!3 种样本蛋白质提取方式

时间:2023-05-18 来源: 浏览:

盘点!3 种样本蛋白质提取方式

生物学霸
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收录于合集
蛋白质是生命体中最重要的基本组成部分之一,它们在细胞的结构和功能中起着至关重要的作用。 蛋白质提取的原理是利用蛋白质的物理和化学性质进行分离和提取。 不同的蛋白质提取方法适用于不同类型的蛋白质。
丁香实验邀请有 3 年以上蛋白质经验的硕博实验高手 ,替大家答疑解惑。 「蛋白质提取」的实验步骤到保存,带你手把手完善蛋白质提取实验。

(本专题合作专家)

各组织提蛋白

经验总结

接下来推荐 3 个丁香实验合作专家投稿的实验 protocol,经过多年验证,可操作性强。

蛋白质保存

经验总结

在辛辛苦苦提取到蛋白后,不免会面临另一个问题:如何储存蛋白呢?

首先,储存方法的选择取决于蛋白质的稳定性,以及后续实验使用蛋白质的时间和用途。储存时需要避免接近蛋白质稳定极限的储存条件(例如极端 pH 或者接近蛋白质等电点的 pH)。

保存方法:

1. 短期保存(24 小时内):大多数的蛋白质可以保存在 4°C。

2. 在 4°C 超过 24 小时需要考虑对蛋白样品灭菌过滤(使用 0.22 µm 过滤器),或者加入抑菌剂(例如 0.1% 叠氮化钠)以避免细菌生长。值得注意的是,并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。

3. 长期保存(一周以上)需要将蛋白样品冻存。使用液氮或者干冰/乙醇混合物将其快速冷冻避免蛋白质变性。可以将样品分装至多个管子中,来避免反复冻融可能造成的活性降低或影响结构。

4. 保存几个月:可以将其保存在-20°C,并加入 50% 甘油避免冻住。

5. 保存几个月至几年:此时应把样品在-80°C 或液氮中冷冻。在这种温度下,加甘油就没那么有必要了,但加 5~50% 的甘油可以帮助保持蛋白质的稳定性。

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