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4 步！把「WB」胶板做的又直又漂亮

时间：2023-06-24 来源： 浏览：

4 步！把「WB」胶板做的又直又漂亮

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WB 配胶几乎成了实验室小白的第一道磨练关卡！做得好，就能快速获得师兄师姐的赏识，学习新技能，做得不好不仅影响 WB 实验结果，可能还会浪费蛋白样本！
本篇整理了 4 个步骤手把手教你将 WB 胶板做的又直又漂亮，文末附上全部 WB 标准操作流程。

「进阶」

WB  详解（步骤、问答）

最后，在做好了胶以后，就可以开始进行下一步 电泳以及转膜 了。
电泳
电泳缓冲液为 Tris-Glycine-0.1% SDS 缓冲液。小分子蛋白（<15kD），建议用 Tris-Tricine，可以让条带压得更细。
100V 电泳，并根据实验需求及时终止电泳。一般浓缩胶电流小于分离胶电流。 提前配置转膜缓冲液并预冷备用（赶跑气泡）。 转膜缓冲液为含有20%（v/v）甲醇（或等体积乙醇）的Tris-glycine溶液。
转膜
先从胶板中将胶取出，根据具体实验需要确定是否取出浓缩胶部分，将胶在转膜缓冲液中浸泡 10min；裁剪与胶大小一致的 PVDF 膜和滤纸（统一：PVDF 膜 5.5X8.5 cm，滤纸 7X9 cm），PVDF 膜先用甲醇浸润 1min，再转入转膜缓冲液中浸泡 10min；
  • 转膜时，转膜用的夹子黑色面在下，然后依次放：转膜用海绵垫，湿润的三层薄滤纸，蛋白胶，PVDF 膜，湿润的三层薄滤纸，转膜用的海绵垫；
  • 在放 PVDF 膜之前，先在蛋白胶上加少量的转膜缓冲液，放膜时将膜的一侧边缘与胶对齐后，膜会被溶液慢慢吸到胶上去，这样可以避免产生气泡；
  • 然后将夹子夹紧后放置到转膜槽内，注意夹子的黑色面要靠近转膜槽的黑色面，转膜槽电源接头处的颜色要与外面塑料槽标记的颜色匹配，防止正负电极搞错。
  • 100V，2h，冰浴（大分子蛋白可以增加到 3h）， 转膜完成后，可使用丽春红对膜进行染色，确定转膜是否成功。
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