被污染的细胞，真的还有救吗？

会养细胞真的太重要了，做为实验室的资深大师兄，每天都要被刚开始养细胞的师弟追问三连：

｜师兄，我的细胞漂了

｜师兄！我的细胞形状怪怪的

｜师兄？我的细胞里怎么有小黑点？

细胞间的操作台并不是一个细菌都没有，所以在操作的时候还是要尽量 规范迅速地完成操作，尽量减少进入培养体系的细菌数量。

先检查一下自己的实验步骤是否规范：

点此查看贴壁细胞培养 protocol

点此查看悬浮细胞培养 protocol

点此查看传代细胞培养 protocol

点此查看初代细胞培养 protocol

但不一定所有的「状态差、有黑点、形状怪」都是污染。如果细胞形态异常，不要慌，先拍个照鉴定一下！

怎么确定

细胞是否被污染？

关于如何鉴定正在培养的细胞有无污染，很多新手朋友没缺少经验，在此师兄分享下自己的经验。

第一步——看细胞， 用肉眼观察。

先看细胞瓶身，如果瓶身上没有裂缝，正常；如果瓶身上有裂缝，则污染几率非常大。

再看培养基颜色，如果培养基颜色是红色或者粉色，正常； 如果是橙色，则可能是污染或者细胞过密；如果是黄色，则污染几率非常非常大。

最后，如果培养基澄清，正常；如果有少许漂浮物，则可能是污染或者有细胞凋亡；如果培养基 很浑浊，甚至出现絮状物，则污染几率非常大。

第二步——静置细胞 1～2 h，使用显微镜观察。

菌类污染通常分为杆菌、球菌和霉菌，为了方便大家分辨，师兄特地找了之前收到有典型污染的细胞照片，希望能帮助大家判断。

以上污染菌类为杆菌

常见的有大肠杆菌， 2-5 um 左右

 点此进入细胞污染专题

以上污染菌类为球菌

常见的有葡萄球菌，直径通常在 1～2 um 左右

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以上污染菌类为霉菌

常见的有毛霉，菌丝宽 2～10um左右

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需要提醒的是，因为运输过程中细胞离开了其正常生长所需要的环境，部分细胞会出现凋亡或产生细胞碎片，容易误认为是细菌污染。

另外培养基中的杂质纤维也容易误认为是霉菌污染，具体区分方法如下：

细胞碎片&杆菌

细胞碎片只会随着细胞状态的变差而变多，通常增长不快；杆菌则增殖非常快，以常见的大肠杆菌为例，常温 25℃ 增殖 1 倍需要 40min 左右（此数据可查阅相关文献验证），培养基很快变黄且浑浊。

凋亡细胞&球菌

凋亡细胞通常只比正常细胞小一点，只会随着细胞状态的变差而变多，通常增长不快；球菌则要小很多，且成串或成团，培养基很快变黄且浑浊。

杂质纤维&霉菌

杂质纤维通常是过滤时残留的滤纸纤维，或者是酒精棉球上的棉纤维，在不开瓶处理的情况下其数量不会增长；霉菌的话虽然增殖速度没有杆菌和球菌快，但还是会有明显增殖。

  关注细胞污染专题，防止污染！

细胞被污染

还能洗洗重新用吗？

扔掉吧！

一般处理细菌污染的重要原则是——无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量。

当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，还是建议你把污染的扔掉，再复苏新细胞，以免影响实验数据，干扰判断。

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策划｜Olaf

题图｜站酷海洛