流动相配比对峰高峰面积的影响

这是一个涉及到色谱分离时的色谱扩散问题。由于色谱填料的不规整以及色谱柱的直 径等因素，目标化合物在色谱柱中分配分离时，会存在纵向扩散和横向扩散的现象，导致同时进入色谱柱的目标化合物依次流出色谱柱，从而在色谱图上呈现一个具有良好的对称性，呈高斯分布的色谱峰。目标化合物在色谱柱中分配分离过程的周期越长，其扩散程度 越严重，则色谱峰越宽。因此在等度洗脱条件下，我们会看见保留时间长的化合物色谱峰 宽大于保留时间短的化合物色谱峰宽。两个化合物的色谱峰保留时间差异越大，则两峰峰宽的差异也越大。色谱峰宽随着保留时间的增大而变宽，当到达一定程度上时，必然会造成色谱峰变得与基线无法分辨。 

通过调节流动相组成来改善色谱峰的分离是优化色谱分离条件的主要手段之一。在日 常工作中，优化流动相中有机相的比例时，可以按 5%-10%的梯度有机相的比例去优化洗脱 条件，也可以采用梯度洗脱的方式去优化洗脱条件。