医学检验职称考试知识点速记（七）

免疫原及抗血清制备

鞭毛抗原 用 0.3~0.5% 甲醛 处理

半抗原  ~ 具有抗原性、 无免疫原性

半抗原载体  ~ 以 牛血清清蛋白 最常用  

佐剂  ~ 增强机体对 抗原免疫应答、改变免疫反应 类型 的 辅助物质

具有 免疫原性：卡介苗、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子

非免疫原性：液体石蜡、羊毛脂、胞壁肽、多聚核苷酸

最常用  ~ 福氏佐剂、细胞因子佐剂

免疫动物与接种抗原 种属差距越远越好

类激素用家兔 、 酶类 用 豚鼠

按抗血清要求  ~  R 类 是家兔代表 小型动物 、 H 类 是马为代表 大型动物

抗原量少且宝贵  ~ 淋巴结内微量注射法

半抗原  ~ 皮内多点注射接种

抗体 特异性 及 效价 鉴定：   双向琼脂扩散法

抗血清保存：   4 ℃（不超过 1 年）

单克隆抗体（ McAb ）

一个 B 细胞克隆、只能与一种抗原结合的 完全均一 （血清型、理化性质、抗原结合）的 Ig

杂交瘤技术

小鼠 脾细胞与小鼠骨髓瘤 细胞通过细胞膜融合形成多倍体细胞 ~  B 细胞杂交瘤细胞

胸腺与 T 淋巴细胞瘤            T 细胞杂交瘤细胞

骨髓瘤细胞 不能合成分泌 Ig 及细胞因子、缺乏 HGPRT ， 稳定易培养、无限传代，易于脾 /            胸腺细胞融合

B 杂交瘤细胞具有合成分泌特异性（具有 次黄嘌呤 - 鸟嘌呤磷酸核苷转化酶 HGPRT ）、在体              外无限传代能力  ~ 一株 2B 杂交细胞合成分泌均一同源抗体即使单克隆抗体

B  细胞杂交瘤技术

选择性培养基～ ＨＡＴ培养液   （ H~ 次黄嘌呤、 A 氨基蝶呤、 T 胸腺嘧啶核酸）

细胞 融合   ~ 在 聚乙二醇作用下 （ PEG ）

克隆化培养  ~ 阳性杂交瘤细胞即使冻存   — 196 ℃液氮 中

单克隆抗体的产生 3 原则

   淋巴细胞产生抗体克隆选择学说 、 杂交瘤细胞兼有双方亲代细胞特性 、 人工培养无限传代

制备方法： 小鼠体内诱生、体外细胞培养

纯化     ： 除盐析法、凝胶过滤法外，还有 离子交换层析、辛酸提取法

鉴定      ： 免疫标记技术 ~ELISA 、先定性 ~ 阳性定量

凝集反应           一方是颗粒，     特异性结合阶段和出现肉眼可见颗粒聚集现象

直接凝集   ~ 为颗粒性抗原

细菌种属鉴定、人 AB 血象鉴定  ~ 属于 直接凝集 中的 玻片 凝集反应

肥达反应、外斐试验、交叉配血  ~  属于              试管 凝集反应

间接凝集反应   ~ 可溶性抗原吸附微小颗粒载体表面，称为 抗原致敏颗粒

抗体 Fc 段吸附 颗粒载体表面 ~  称为 抗体性致敏颗粒

致敏颗粒与相应抗体（或抗原）特异结合后出现凝集  ~  称为间接凝集反应

分为 正向、反向、抑制、协同

常用颗粒载体 ： 红细胞、胶乳颗粒、明胶颗粒、 SPA* 金黄色葡萄球菌等

      正向 间接凝集反应  ~ 诊断试剂为   抗原致敏 颗粒

      反向                           抗体 致敏颗粒

       间接凝集抑制反应  ~ 不出现凝集为阳性反应

乳胶凝集试验  ~ 属于 间接凝集 、载体为 聚苯乙烯胶乳颗粒  ~  检测 RF 和 HCG 抗原

明胶凝集实验  ~ 可溶性抗原吸附 粉红色明胶颗粒   

抗人球蛋白试验（ Coombs ）  ~ 用于检测 抗红细胞不完全抗体（ 缺损 IgG ） ， 只能与 红细胞结                              合， 不能 交叉链接红细胞 出现凝集现象

     直接 Coombs 检测 红细胞膜上结合 不完全抗体

     间接               血清中 游离 不完全抗体

Coombs 试验 用于 交叉配血、血型抗原抗体检查、新生儿溶血性贫血诊断、对细菌不完全抗体检查

协同凝集试验 ~ 诊断试剂 为 抗体致敏的 SPA* 金 黄色葡萄球菌

沉淀反应

          可溶性抗原与相应抗体 结合，出现肉眼可见免疫复合物

液相内沉淀 反应

      絮状沉淀、环状沉淀、免疫浊度试验

凝胶内沉淀反应     

单向琼脂扩散   ~ 在琼脂内混入抗体，在分子比例合适处形成沉淀环

试管法 ：抗体混入 50 ℃ 0.7% 琼脂糖

平板发 ：            0.9% 琼脂糖 ，沉淀环直径与 ag 浓度呈正且根据标准曲线测 ag 浓度

双向琼脂扩散

   吻合 ~ 同一

   弧度 弯向 分子量大的蛋白质 一方

   沉淀线靠近抗原孔提示抗体量大、靠近抗体孔提示抗原量大

免疫浊度法

分子 比例合适 的 可溶性抗原与相应抗体 形成免疫复合物（ IC ），是反应 出现浑浊

免疫电泳  ~ 凝胶沉淀反应 与 蛋白电泳 结合

其 实质 在直流电场  ~ 定性扩散

带电荷 多 、颗粒 小   ~ 泳动越 快

影响 :  抗原与抗体特性、电场因素（强度、溶液 PH 、离子强度、电渗现象）

免疫电泳技术

        对流 免疫电泳  ~ 双向 琼脂、 电泳

        火箭 免疫电泳  ~ 单向 扩散、 电泳

             免疫电泳  ~ 区带 电泳、 双向 琼脂扩散

         免疫 固定 电泳  ~ 区带 电泳、 免疫沉淀 反应       ( 常用于 M 蛋白鉴定 )

放射免疫分析和免疫放射分析

放射免疫（ RIA ） ~ 利用放射性核素为 示踪剂

                  灵敏度高 ~10* — 9 ~~ — 12 g/L 、相当于 ng~pg

原理：一 定量 放射性核素标记 Ag 、标记的 Ag 与待测 Ag 竞争结合限量 A b ， 以测待测 Ag         性质和含量

B 值为 标记抗原 与抗体 结合沉淀物 、 F 值为 游离态的标记抗原

       B 值与待测抗原   ~ 反比

       F 值与待测抗原   ~ 正比  

       B/F 或 B/(B+F) 与待测抗原   ~ 反比

反应曲线  ~ B/F 为纵坐标   、 标准抗原 浓度为 横坐标

免疫放射分析

用 过量 放射性核素标记 抗体（ Ab ） , 与待测抗原进行 非竞争 结合

Ag+Ab*=Ag-Ab*+Ab*

放射免疫分析常用核素：   产生 γ射线 的 I~125 、 I~131 、 Cr~51      常用 I~125

                        产生 β射线 的 H~3 、 C~14 、 P~32     常用 H~3

尿β 2 微球蛋白 含量极少 ， 目前多采用 放射免疫法 测定

荧光免疫技术

        激发态 到 基态 ，以电磁辐射释放过量能量（荧光）     荧光波长＞激发光波长

荧光物质

异硫氰酸荧光素（ FITC ） 发 黄绿 色 、应用最广

四乙基罗丹明 (RB200)    呈 橘 红色

四甲基异硫氰酸罗丹明（ TRITC ）呈 橙 红色

藻红蛋白（ PE ）   呈明亮的 橙 色

其他荧光物质

3 价 Eu 螯合物  ~ 激发光波长 宽 、发射光波长 窄 、衰变 时间长 ~ 适用 分辨荧光免疫测定

荧光抗体技术

蛋白荧光标记 方法： 搅拌法、透析法

标记抗体纯化： 去除 游离 荧光素  ~ 透析法、凝胶柱层析法

                     结合 荧光素  ~ 离子交换层析法

荧光抗体鉴定

抗体效价 用 双向琼脂扩散 滴定 ，   效价 ＞ 1:16 为理想

荧光素与蛋白质集合比率（ F/P ）

F/P= 1.5  ~ 固定标本

F/P= 2.4  ~ 活细胞染色

酶免疫技术

特点：   底物常用 辣根过氧化酶（ HRP ） 、其次 碱性磷酸酶（ AP ）

HRP 供氢体底物 有 邻苯二胺 (OPD) 、 四甲基联苯胺（ TMB ）、 ABTS ，邻苯二胺常用、呈 棕黄色

酶标记抗原或抗体

      酶标记的抗原或抗体为结合物， 制备方法常用 戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法

      标记抗体的 最佳用量： 棋盘滴定法

三类固相载体

       最常用固相载体 ~ 聚苯乙烯 ，其次还有 聚氯乙烯、微孔滤膜、含铁磁性微粒

免疫吸附剂

      抗原或抗体 固相化的过程  ~ 包被

      被固相化 的抗原或抗体称为  ~ 免疫吸附剂

酶免疫技术分类：   酶免疫组化技术

酶免疫测定： 均相 ~   竞争结合

异相 ~   分为液相酶免疫、 固相酶免疫（ ELISA ）

酶联免疫吸附试验（ ELISA ）

原理：   将抗原 / 抗体吸附 聚苯乙烯 后加入酶标抗体与相应抗原结合，使酶也结合到载体上，           洗去游离酶标抗体，加底物显色

必要：   固相抗原（或抗体） 、 酶标记抗原（或抗体） 、 底物

膜载体 的酶免疫 测定

斑点 -ELISA ：   硝酸纤维素膜 为 固相 载体，在膜点加样品抗原

免疫印迹法 ：   三步 ~ 样品蛋白 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 、电转移、酶免疫定位

生物素 - 亲和素放大技术    

       以 非共价键 结合、 稳定（ 1 万倍） 、 不影响彼此生物学活性 ，还可同时与抗体或抗原         结合， 不影响 抗体抗原特异结合， 放大 抗体抗原反应信号 ~ 大大提高检测灵敏度

生物素 又称 维生素 H 或辅酶 R 、存在于 蛋黄中

       有 2 个环状结构 :   咪唑酮环   ~ 与 亲和素 结合（对戊酸羧基修饰制成活性化学基团 ~                                                  活化生物素）

                          噻吩环    ~ 与 蛋白质 结合

生物素的标记

活化生物素、示踪物结合 ~ 标记生物素

标记 氨基   ~N- 羟基丁二酰亚胺酯（ BNHS ） ~ 标记 抗体 常用

巯基   ~  3 - （ N- 马来酰亚胺 - 丙酰） - 生物胞素

醛基   ~ 生物素酰肼 （ BHZ ）   ~ 标记 偏酸性抗原 多用

亲和素  

         分为 亲和素、链霉亲和素

      亲和素  ~ 抗生物素 或 卵白亲和素 ，从 蛋清中 提取

      亲和素（链霉亲和素）与 生物素 咪唑酮环 结合的活性基团都是  ~ 色氨酸

生物素 - 亲和素系统应用：

      以 游离亲和素 为中间物分别连接生物素化抗体（抗原）和标记生物素，检查待测

生物素 - 亲和素系统应用与 酶免疫 测定、 荧光免疫 测定方法中

免疫组织化学技术

      在组织细胞 原位 特异性反应，对相应抗原（抗体）进行 定性、定量、定位

      最常用切片：   冷冻切片法 （ 保留细胞表面抗原的免疫活性 ）

      常用固定剂： 醛类 固定剂 、丙酮、醇类 固定剂 、冰醋酸 等

      设立对照原则：   必须设立对照、通常针对第一抗体设对照，有阳性对照和阴性对照

酶标记抗体免疫组化染色

按 标记部位 分直接法（一步法）、间接法（二步法）、 桥联法（多步法）

直接法  ~ 酶标记 第一抗体

间接法  ~ 酶标记第二抗体（应用较广）

非标记抗体 免疫酶组化染色：   酶桥法、过氧化物酶抗过氧化物酶法（ PAP 法）

荧光免疫组织化学技术

    直接法   ~ 荧光 标记抗体（抗原 ）

    间接法   ~ 荧光标记 抗 IgG-Ab （第二抗体）

    补体法

    双标记荧光免疫法

免疫胶体金技术

特点： 胶体金 具有胶体多种特性， 尤其对电解质敏感性

       胶体金有一个基础金核，外围有 双离子层 ， 内层是 负离子 AuCI 、 外层是 H* 离子层

H* 离子层 维持胶体金的溶胶状态

       光吸收波长以及各自颜色 ~ 由颗粒大小决定：

            5~20nm 胶体金吸收波长 520nm  ~ 呈 葡萄糖红色

            20~40nm 胶体金吸收波长 530nm  ~ 呈 深红色

               60nm 胶体金吸收波长 600nm  ~ 呈 紫色

免疫细胞分离检测

外周血单个核细胞分离

单个核细胞（ 单核、淋巴 ） 1.075~1.090     粒细胞与红细胞 1.092    血小板 1.030~1.035

利用比重 1.075~1.092 的溶液进行 密度梯度离心

细胞分离分层试剂： Ficoll 与 Percoll

        Ficoll 分层液法： 单次密度 梯度离心分离法

                       血浆层、单个核细胞层、粒细胞层和红细胞层

       Percoll 分层液法： 连续密度 梯度离心分离法

                       死 细胞层、富含 单核 细胞层、富含 淋巴 细胞层、红细胞和粒细胞层

淋巴细胞分离    （粘附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法）

               37 ℃ 和 Ca* 存在时 ， 单核细胞 主动粘附 ， 而 淋巴细胞 无粘附性

T 细胞亚群 分离原则

      阳性 选择：根据细胞特性和标志 选择纯化所需细胞 （ E 花环、亲和板结合分离法 ）          阴性选择： 选择性 去除不要细胞 ， 仅留下所需细胞 （ 尼龙柱分离、磁性微球分离 ）

分离细胞保存 ：   长期  ~  加入 二甲基亚砜 为保护剂、 液氮— 196 保存

活力测定： 台盼蓝染色法 （ 活细胞 不着色 ）

淋巴细胞表面标志检测

T 细胞表面标志      成熟 T 细胞表面： TCR 、 CD3 、 CD4 、 CD8 、 CD2 等

        抗原检测 ：标记 抗体染色法 、 花环试验法 （ CD3-McAb 致敏红细胞与 T 细胞结合 ）

     表面受体检测：

     T 细胞与绵羊红细胞混合 ， T 细胞的 E 受体（ CD2 ） 可结合 SRBC 形成玫瑰花环     

B 细胞表面标志     有 BCR （ mIg ）、 CD79 、 CD5 、 CD19 、 CD21 、 CD23 等

      抗原检测：   间接荧光免疫法、酶免疫组化法、 ABC 法

NK 细胞表面标志       没有 NK 细胞 特有 的 CD 抗原标志、 一般检测 NK 细胞活性

淋巴细胞功能检测

T 细胞功能检测

T 细胞转化实验 ： 形态学检测、核素法 。

T 细胞介导的细胞毒实验 ： T 细胞被抗原致敏后， 再次接触 相应抗原靶细胞可杀伤破坏

                           （评价 机体细胞免疫水平 常用指标）

B 细胞功能

     溶血空斑实验 ： 补体 参与下导致 绵羊红细胞（ SRBC ） 溶解 透明溶血空斑 （ 每个空斑表                    示一个抗体形成细胞 、大小与细胞产生抗体量多少 成正比 ）

B 细胞增殖能力试验 ： 细菌 LPS 、 SPA 、 抗 IgM 抗体 均能刺激 B 细胞增殖  ~ 检 查促有                          丝分裂原对淋巴细胞刺激指数 脂多糖 ( LPS )/ 葡萄球菌 A 蛋白 ( SPA

NK 细胞功能检测

K562 细胞株作为靶细胞测定 人 NK 细胞 活性

YAC 细胞株               小鼠 NK 细胞活性

吞噬细胞功能检测

中性粒细胞功能

运动形式： 随机运动（类似布朗运动）

           定向运动（趋化运动 ）：体 内 试验（ 皮肤窗法 ）

                               体 外 试验（ 滤膜小室法、琼脂糖凝胶平板法 ）

吞噬、杀菌功能：受检细胞 + 白念珠菌（保温加 亚甲蓝做活体染色 ）计 200 个吞噬细胞

                 吞噬 率 = 吞有菌体中性粒 /200

                  杀菌 率 = 胞内有 蓝色菌体 中性粒 /200

                 吞噬指数 = 中性粒内 菌细胞数 /200

硝基 四氮唑蓝（ NBT ） 还原试验 ： 检测中性粒细胞 杀菌能力

化学发光：吞噬 金黄色葡萄球菌 、加入 鲁米若 增其发光效应

巨噬细胞功能

炭粒廓清 试验    廓清速度 ~ 判断巨噬细胞吞噬功能

巨噬细胞 溶酶体酶 测定： 检测 酸性磷酸酶 、 非特异性酯酶 和 溶菌酶 等活性， 评价杀菌功能

细胞因子测定及应用

是由 免疫细胞产生 的一大类能在细胞间 传递信息 、 免疫调节 、 效应功能 的 蛋白或小分子多肽

特性：   大都为 糖蛋白     旁分泌、自分泌、内分泌

类型：   白细胞介素 IL ： IL-1  ~ 所以有核细胞都产生 、以 巨噬细胞为主、局部免疫调节 作用

                       IL-2 ~ 主要由 T 细胞（ CD4 ） 受抗原或丝裂原刺激合成

IL-2  ~ 刺激 T 细胞 生长、促进 B 细胞 生长分化，诱导 细胞毒 作用、增强巨噬细胞抗原递呈能力、杀菌力及细胞毒性

        干扰素 IFN  ：抗病毒、抗肿瘤、免疫调节

                     1 型 干扰素  ~ 抗病毒 干扰素

                     2 型 干扰素  ~ 免疫干扰素 或 IFN- γ ， T 细胞产生重要免疫调节因子   

        肿瘤坏死因子 TNF ：   TNF-a  ~ 脂多糖 活化的 单核巨噬细胞 产生 ，引起 肿瘤出血坏死

                                 也称 恶病质素

                          TNF- β  ~ 抗原或丝裂原 刺激淋巴 产生 ， 具有肿瘤杀伤及免疫调                                     节               TNF 增加 T 细胞产生以 IL-2 为主的淋巴因子 ，促进 T 、 B 细胞增殖

       造血生长因子：   红细胞生成素  ~ 肾小管内皮细胞合成 、 干细胞、巨噬细胞产生

细胞因子测定

IL- 2 ~ 刺激 T 细胞 生长

IL- 3 ~ 刺激肥大细胞生长

IL- 6 ~ 刺激 浆细胞 生长

免疫学检测法 ： 仅测定 细胞因子抗原性

分子生物学方法：核酸探针

细胞粘附分子测定

荧光免疫 检测法 ~  除间接免疫荧光法外， FCM 可检测两种及以上细胞粘附因子

酶免疫 测定法  ~  双抗体夹心法 ELISA 最广

ELISA 研究最多的是 选择素 家族、 免疫球蛋白 超家族

选择素家族有 E 、 L 、 P 三型选择素 均可见于 血液

 P 增高 2~3 倍——见于 溶血性尿毒症、血小板减少性紫癜

  L 增高   —— 败血症、 HIV 感染、艾滋病 患者血

血中存在 E 选择素   ——是 内皮细胞激活 证据、 糖尿病 患者   ~E 增高

   肝硬化病人血液中 I 水平增高、与肝功能损伤有关

免疫球蛋白测定

Ig~ 具有 抗体活性 、抗 体样结构 的 球蛋白

结构： 4 条肽链、借二硫键 连接组成      IgG 、 IgE  、 IgD 、血清型 IgA 为单体

                                     分泌型  IgA  为双体 、  IgM 为五聚体

        同种型 抗原决定簇位于 Ig 恒定区 、各类 Ig 可分为 k 和入 两型

Ig 测定

方法： 单向琼脂扩散 、 速率散射比浊法 ，   特异性 IgM 常用捕获法

IG 增高：

多克隆性增高  ~ 慢性 感染、 慢性 肝病、 系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合症

单克隆 性增高  ~ 又称 M 蛋白增高 、见于免疫增殖性疾病（ 多发性骨髓瘤 、 重链 病、 轻链 病、               原发性巨球蛋白血症 ）       

IgD 增高  ~ 见多发性骨髓瘤

IgE 增高  ~ 见多发性骨髓瘤、特征性哮喘、皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、 SLE 、 RA 及             某些真菌病

M 蛋白  ~ 单克隆免疫球蛋白 又称 M 蛋白， B 细胞或浆细胞单克隆异常产生十 分均已 的异常           免疫球蛋白

方法：血清蛋白 区带电泳  ~ M 区带

       免疫电泳   为 区带电泳、免疫扩散结合 ~  鉴别 免疫球蛋白类别 和 轻链型 鉴定

免疫 固定 电泳    判断 单克隆免疫球蛋白 重链、轻链类型

M 蛋白增高  ~ 免疫增殖 性疾病

冷球蛋白

异常免疫球蛋白、降至 4 ℃发生沉淀

冷球蛋白 阳性 ~  见于 骨髓瘤 、原发性 巨球蛋白血症 、 慢性淋 巴细胞白血病、 类风湿关节炎、                 SLE 等、 传染性单 核细胞增多症、 恶性肿 瘤

循环免疫复合物（ CIC ）     已知的称抗原特异性 免疫复合物

                         未知的为非抗原 特异性免疫复合物

单特异循环 免疫复合物  ~ 胰蛋白酶解离法

双 特异性循环免疫复合物  ~ 捕获法 ELISA 、 包被抗 C3 抗体法

补体 检测及应用

组成： 固有成分、调节蛋白、受体

具有 酶活性的其符号划一横线

灭活的 在英文字母 i 表示

理化性质： 都是β球蛋白、糖蛋白、血清中 C3 最多、 C2 最低、不稳定

生物学功能：   溶细胞、清除免疫复合物、炎症介质、中和与溶解病毒

经典 途径  ~ 以结合抗原后的 IgG 和 IgM 为激活剂

旁路 途径  ~ 激活物为 细胞壁 成分

甘露聚糖结合 凝集素 MBL   ~ 开始于 急性期蛋白与病原体结合 （ 不是抗原复合物 形成）

CH50 测定

特异性抗体与红细胞结合激活补体，形成膜攻击复合体，溶解红细胞  ~ 其程度与补体活性相关   （呈 S 形曲线）

30~70% 最陡、以 50% 溶血作为终点比 100% 更敏感  ~ 补体 50% 溶血试验 (CH50)

CH50 试验 ~  测定经典途径总补体溶血活性、反应补体 9 种成分总和水平

补体结合试验     反应中无游离的补体而不出现溶血，为补体结合试验阳性 +

反应系统（抗原与抗体）与指示系统（绵羊红细胞、溶血素）竞争补体系统

单个补体成分测定

免疫溶血法     抗原为 SRBC 、抗体为兔或马抗 SRBC 抗体（溶血素）

             溶血程度与待测补体活性有关 ~ 仍以 50% 为终点

补体测定应用

免疫学疾病：  C1 、 C2 、 C3 、 C4 缺陷 ~ 自身免疫病、

             C3a 、 C5a 过敏毒素，  C567 趋化因子作用导致组织损伤

遗传性疾病：  C3 缺陷导致严重感染、 C1 抑制物缺陷 ~ 遗传性血管性水肿、细胞表面 CR1          缺陷  ~CIC 清除障碍（ SLE ）、 I 因子与 H 因子缺陷 ~ 肾小球肾炎、 DAF 缺陷 ~ 阵发性          血红蛋白尿

补体含量降低的疾病：

      补体消耗增多  ~SLE 、自身免疫溶血、类风湿关节炎、移植排斥、细菌感染（ G+ ）             大量丧失  ~ 大面积烧伤、大出血、肾病综合征

          合成不足  ~ 急慢性肝炎、肝硬化、肝癌、营养不良

高补体血症  ~ 感染恢复期、。

自身抗体检测

类风湿因子（ RF)  以变性 IgG 为靶抗原的自身抗体、不与正常 IgG 反应

                 包括 IgM 、 IgG 、 IgA 、 IgE ，以 IgM 为主

方法：乳胶凝集、速率散射比浊法、 ELISA

抗核抗体（ ANA ）

以自身真核细胞成分为靶抗原、性质主要是 IgG

包括：抗 DNA 抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体

方法：间接免疫荧光法  ~ANA 筛选方法

       免疫印迹法

荧光图形及意义

              均质形  ~ 抗 DNP 抗体引起、主要见于 SLE 、药物性狼疮

              斑点型  ~ 抗 ENA 抗体引起、主要见 SLE 、 MCTD 、高滴度见于 MCTD

              周边形  ~ 抗 dsDNA 抗体引起、主要见 SLE

              核膜型  ~ 抗核膜抗体引起

              核仁型  ~ 主要见于硬皮病

            着丝点型  ~ 局限性硬皮病、 CREST 综合征

        抗 dsDNA 抗体是 SLE 的特征性标记抗体

抗 ENA 抗体

ENA 是可提起性核抗原总称

    抗 Sm 抗体  ~ 是 SLE 的血清标志抗体

抗核 RNP 抗体  ~ 是 MCTD 诊断重要依据

抗 SSA 抗 SSB  ~ 是干燥综合征（ SS ）

    抗 Jo-1 抗体  ~ 常见多发性肌炎

  抗 Sc1-70 抗体  ~ 仅见进行性系统性硬化病（ PSS ）

抗中性粒细胞包浆抗体   ~ 与临床多种小雪糕炎症性疾病密切相关的自身抗体、是系统性血                          管炎的血清标志抗体

抗线粒体抗体（ AMA ）  ~ 长期持续性肝阻塞、慢性获得性肝炎、不明原因肝硬化呈阳性 +

抗乙酰胆碱受体 (AchR ）  ~ 重症肌无力的标志抗体

MHC 与 HLA 检测

组织相容性复合体（ MHC ）  ~ 是存在于脊椎动物染色体特定区域的一组基因群，其编码产物为主要组织相容性抗原（ MHA ）

HLA  ~ 人类 MHC 即 HLA 复合体， 6 号染色体短臂

     特点：单倍型遗传、共显性遗传、连锁不平衡

MHC-1 类分子：   广泛存在有核细胞表面。外周血白血病和淋巴结、脾淋巴细胞表达最高

                成熟红细胞、神经细胞及滋养层细胞不表达 MHC-1 类分子

MHC-2 类分子：主要表达 B 细胞、单核 - 巨噬细胞、 DC 、活化的 T 细胞等表面

                前列腺素、糖皮质激素可抑制其表达

HLA 分型

HLA 与器官移植     ~ 成败很大程度取决于供、受者间 JLA 型别的差异

HLA 与自身免疫病   ~1 型糖尿病：华人为 DR9 、白人 DR4

                     强直脊柱炎为 B27 、 SLE 为 DR3

流式细胞分选仪

流式细胞术：借助 荧光激活细胞分选器 对免疫细胞及其他细胞进行监督和分类

散射光 不依赖任何细胞样品制备技术  ~ 细胞的物理参数 （固有参数）

流式细胞的分选是 ~  通过分离含有单细胞的悬液实现

分选指标：分选速度、分选纯度、分选收获率

散射光信号分为 前向 散射光  ~ 反映颗粒 大小

               侧向 散射光  ~ 反映颗粒 内部结构 、表面 光滑程度

                 荧光反映  ~ 被测细胞表面 抗原的强度

流式细胞仪双参数直方图：二维点图、假三维图

淋巴细胞及其亚群分析： T 细胞亚群（ CD4/CD8 ）、 B 细胞及其亚群和 NK 细胞分析

                 对人体免疫功能评估以及各种血液病及肿瘤的诊断和治疗有作用

淋巴细胞功能分析：   细胞介导 细胞毒性试验、细胞内因子 测定

免疫自动分析仪

采用 磁性微球 做固相载体，增加反应面积

自动化免疫比浊分析技术   

液相内 的沉淀 试验与现代光学仪器和自动化分析结合

            分为散射比浊分析

                透射比浊分析

化学发光免疫分析

       直接参与发光 标记物  ~ 吖啶脂 （产生发光的特殊基团）

      催化反应或能量传递参与发光的酶标记物： 辣根过氧化酶（ HRP ）、碱性磷酸酶

      能量传递产于氧化的 非酶标记物 ：   三联吡啶钌

优点： 敏感度高、甚至超过 RIA 、精确度与准确度可以与 RIA 相比、试剂稳定无害、测定耗时短、项目多

荧光免疫自动化分析

时间分辨荧光免疫测定  ~ 通过 镧系元素 标记抗体或抗原、稀土金属以 Eu 最常用

应用：甲状腺激素、病毒性肝炎标志物、肿瘤相关抗原、药物、多肽等

荧光偏振 免疫分析  ~ 用于 药物浓度的检测及分析 （叶酸、维生素 B12 、可卡因）

荧光酶免疫 分析  ~ 用于 过敏原检测以及特异性 IgE 检测

免疫学检验质量管理

分析前  ~ 送检标本 质量 是核心

方法选择  ~ 实用性 和 可靠性 进行 方法学选择

标准品国际单位（ U ）：   国家标准品 溯源至国际标准品为 二级标准

                      使用的 厂家为三级

超敏反应性疾病

再次接触 相应抗原时发生的生理功能紊乱和组织损伤分 4 型

1 型超敏（速发型）

变应原刺激 B 淋巴细胞转变浆细胞 产生 IgE 、其 FC 段与肥大细胞核嗜碱性粒细胞结合

特点 : 发生迅速、消退迅速； IgE 介导；病变在小动脉、毛细血管扩张、平滑肌收缩、 补体不        参与

常见：过敏性 ***** 、荨麻疹

2 型超敏反应（ 细胞毒型 超敏反应）由 IgG 或 IgM 与靶细胞表面抗原结合在 补体、巨噬细胞                和 NK 细胞 参与下引起 细胞溶解和组织损伤

特点：抗体或抗原抗体复合物存在于细胞膜上、参与的抗体是 IgG 与 IgM 、有补体、吞噬细          胞、 NK 细胞参与、后果是靶细胞被破坏

常见： 输血反应、新生儿溶血、 自身免疫性溶血性贫血 、药物过敏性血细胞减少、链球菌感        染后肾小球肾炎、急性风湿热、 Graves 病、重症肌无力、胰岛素抗性糖尿病

3 型超敏反应（ 免疫复合物型 ）沉积于 毛细血管基底膜 ，通过激活 补体 以及在 血小板、肥大               细胞、嗜碱性粒细胞 参与下引起  ~ 充血性水肿、中性粒细胞浸润、组织坏死                为特征的 炎症反应和组织损伤

常见： 局部 免疫复合物病   ~Arthus 反应及类 Arthus 反应

       全身 免疫复合物病  ~ 血清病 、链球菌感染后肾小球肾炎、慢性免疫复合物病、 过敏                           样休克

4 型超敏反应（ 迟发型 ）由 效应 T 细胞 再次接触相同抗原引起以 单个核细胞 （ 巨噬细胞、淋                         巴细胞 ） 浸润为主的炎症性病理损伤

特点：迟缓、再次接触抗原后 24~72 小时发生， 与抗体、补体无关 、而与效应 T 细胞核吞         噬细胞及其产生的细胞因子和细胞毒性介质有关；个体差异小、 抗感染免疫清除抗原         同时损伤组织

常见： 传染性迟发型超敏反应 （ 结核 杆菌、 麻风 杆菌、 病毒、真菌 引起的感染）

        接触性皮炎

       移植排斥反应

超敏反应免疫学检测

1 型检测  ~ 过敏原、 IgE

2 型      ~ 抗血细胞抗体

3 型      ~ 循环免疫复合物

4 型      ~ 皮肤试验检测

皮肤试验：    皮内试验

             挑刺 试验   ~ 1 型 超敏

              斑贴 试验   ~ 4 型 超敏

血清 IgE 测定

总 IgE 测定：放射免疫吸附、酶联免疫测定、间接血凝试验、化学发光法

总 IgE 升高   ~ 过敏性 ***** 、 药物性间质肺炎 、 支气管肺曲菌病 、 麻风、寄生虫感染

特异性 IgE 是体外检测 变应原 重要手段、 1 型超敏反应

抗血清抗体

对 2 型有意义（ Rh 抗体、抗红细胞、抗血小板、抗白细胞抗体）

循环免疫复合物

帮助分析疾病 的进程和转归

免疫复合物病：  SLE 、类风湿关节炎、部分肾小球肾炎、血管炎

嗜酸性粒细胞参与 1 型超敏反应（白细胞分类计数或直接计数）

嗜碱性粒细胞     1  型超敏      （直接计数法）

自身免疫性疾病

      一般 不对 自身组织成分产生免疫应答或 仅产生微弱 免疫应答  ~ 自身耐受

致敏 T 细胞对自身抗原应答损伤

      CD4*Th1 细胞

      通过释放 细胞因子 、 趋化因子 产生以 单核细胞及淋巴细胞浸润为主 的炎症损伤

      CD8*CTL 细胞

      释放穿孔素、颗粒酶或通过 FAS/FAS 诱导靶细胞凋亡

常见的自身免疫病

     自身免疫性溶血  ~ 抗血细胞自身抗体、 Coombs 阳性；多见中年女性

抗红细胞抗体：     温抗体 IgG 型   ~37 ℃与 RBC 结合、 不聚集 RBC

                 冷凝集素 IgM 型   ~ 低温与 RBC 结合使其凝集，引起冷凝集素综合症

              D-L 抗体 为 IgG 型    ~ 阵发性冷性血红蛋白尿症

免疫性血小板减少性紫癜

     患者有抗血小板抗体、血小板寿命缩短

SLE 、类风湿关节炎、干燥综合征

系统性红斑狼疮 (SLE) 检查

     可见   IgG 、 IgA 、 IgM 增高且以 IgG 为主 、血清出现多种自身抗体（抗核抗体系列）和       免疫复合物、活动期 补体水平下降

     抗 dsDNA 和 Sm 抗体 是 SLE 特征性标志

    SLE 试验诊断检测抗核抗体、抗 DNA 抗体 ( 分为 dsDNA 、 ssDNA)     

      dsDNA 抗体测定：间接免疫荧光法、间接酶标抗体法、补体结合抗体法、酶联免疫                          吸附、放射免疫分析（ farr 法 )

                          放射免疫分析 检测双链 DNA 特异性最高 为公认标准方法

      抗可提取性核抗原（ ENA ）抗体： 双向免疫扩散、对流免疫电泳、免疫印迹、 ELISA

( 类风湿关节炎 )RA

可见   IgG 、 IgA 、 IgM 增高 、类风湿因子、自身抗体（ 抗角蛋白、抗 RA33 、抗环瓜氨酸肽 ）

补体检测意义：  2 、 3 型变态 反应中活动期补体消耗 、含量下降， 疾病缓解可正常

                自身反应性 T 淋巴细胞引起 的自身免疫病 补体无明显变化                 淋巴细胞检测意义：  SLE 活动期 CD4/CD8*T 细胞导致，细胞毒性 T 细胞升高

细胞因子检测意义：

    自身免疫疾病调节紊乱表现 Th1 和 Th2 失调   TH1 细胞活化分泌大量 IFN- γ、 IL-2 、       TNF-a 抑制 Th2      Th2 细胞活化分泌大量 IL-4 、 IL-5 、 IL-10 促进 B 细胞活化抑制 Th1

自身免疫疾病   首选检测 ANA 、  IgG 、 IgA 、 IgM 、补体 RF 等

免疫增殖性疾病

      T 细胞多为血液疾病 、 B 细胞（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、淀粉样病变）

常见免疫球蛋白增殖

单克隆免疫球蛋白增殖病  ~ 异常增多（又称 丙种球蛋白 ）

单克隆细胞增生： 理化性质单一、无活性和正常免疫功能（又称 副蛋白、 M 蛋白 ）

M 蛋白通过肾小球滤过从尿排出 轻链  ~ 尿本周蛋白

多发性骨髓瘤（ MM ） ~ 单株浆细胞异常增生

特征： 骨质破坏 （骨痛、骨折）、 贫血 （粒细胞、血小板减少）、 感染、肾功能损害、预后不        良 （ 感染、肾功能损害 常为此病死因）

免疫学特征：血清中大量 M 蛋白 或有 本周蛋白尿 、骨髓中有大量 不成熟浆细胞 （ ＞ 15% ）、               组织活检有浆细胞瘤、正常 Ig 水平升高（ IgG 最常见＞ 50% 、 IgA 次之、

             IgD 最少、 E 和 M 罕见 ）

巨球蛋白血症  ~ 分泌 IgM 的浆细胞恶性增值为病理基础

特征：肝、脾、淋巴结肿大、不明原因贫血、 有中枢 / 周围神经系统症状 、有 雷诺现象、视               力障碍               

  免疫学特征：   血清中单克隆 IgM 增加、＞ 10g/L 、红细胞 正色素贫血 （白细胞、血小板减               少）、骨髓有淋巴细胞样浆细胞浸润、血粘度增加、本周蛋白尿（常为 k 链）  

免疫球蛋白异常增生免疫检测                       

血清区带电泳     是 M 蛋白 的一种 定性试验 （ 乙酸纤维素膜、琼脂糖电泳 两种方法）

M 区带见于γ区或β区

IgG  ~ γ 区 为主

IgA  ~ γ 1 与β区 为主

IgM  ~ β 2 或 γ区

IgD   ~ β 或 γ区

尿中 轻链 蛋白检测

本周蛋白在 PH5.0 、加热至 40~60 ℃ 出现沉淀、继续加热至 90~100 ℃溶解 —— 凝溶蛋白

免疫缺陷病

原发性免疫缺陷病分为  ~B 细胞免疫缺陷、 T 细胞免疫缺陷、联合细胞免疫缺陷、吞噬细胞                         免疫缺陷、补体免疫缺陷（遗传因素、先天性免疫系统发育不良）

  特点： 反复、严重。持续感染

原发性 B 细胞免疫缺陷病

     常见： 性联无丙种球蛋白血症 、 IgA 、 IgG 缺陷、 IgM 增多的免疫球蛋白缺陷病

原发性 T 细胞免疫缺陷病

常见： 先天性胸腺发育不全、特发性 CD4* 减少症

获得性免疫缺陷综合征（ AIDS ）    又称艾滋病

             由人类免疫缺陷病毒 HIV 引起  ~ 侵犯和破坏 CD4*T 细胞使机体免疫功能损

            HIV 属 反转录病毒科 慢病毒属

发病机制： HIV 直接 / 间接损害、 CD4*T 细胞，导致细胞免疫缺陷，最后 B 细胞免疫同时受             损，其他免疫也受损，免疫功能低下、促发并发感和肿瘤发生

免疫学特点： CD4*T 细胞受 HIV 感染、 CD4*T 细胞受损、破坏、进行性细胞免疫缺损 ~ 进             而体液缺损

HIV 感染 并发症 ： 卡氏肺孢子虫肺炎 和 卡波西肉瘤

AIDS 实验室检测

AIDS 免疫检测：病毒标志、免疫标志、相关标志

免疫标志主要是检测 HIV 抗体、 T 细胞亚群（ CD4 、 CD8 ） 为常用 ，先用 ELISA 初筛试验（连续查 3 次） ，阳性者再用 免疫印迹法做确诊试验

肿瘤免疫及其免疫检测

AFP  ~ 胚胎期重要血清成分（肝癌、 生殖系统胚胎瘤 、消化道肿瘤肝转移、 妊娠 ）

         ＞ 400 对原发性肝癌有诊断价值

CEA  ~ 糖蛋白 、 广谱肿瘤标志物

PSA  ~ 糖蛋白 、＞ 4 作为前列腺癌诊断标准

CA125 ~ 卵巢癌、子宫内膜癌

CA199 ~ 消化道 相关抗原、 胰腺癌 与 结、直肠癌 的标志物

CA153 ~ 正常＜ 28  、 30~50% 乳腺患者升高   ；检测 乳腺癌患者术后复发最佳指标

移植免疫及其检测

引起排斥反应的靶抗原   ~ 为 移植抗原 或 组织相容性抗原

MHC1 类和 MHC2 类与移植免疫的关系较密切（ HLA-DR 对移植排斥最重要 、 HLA-C 无明显作用 ）

排斥反应的类型

     超急性排斥反应   ~ABO 血型不符、受者体内由 HLA 抗体、移植物保存 / 处理不当

      急性排斥反应     ~ 同种 排斥最常见 （多发生移植后 数周 ~1 年内 ）

     慢性排斥反应      ~ 影响移植器官长期存活

免疫学检测             

体液 免疫水平检测： ABO 血型、 HLA 抗体、抗组织细胞抗体、血管内皮细胞抗体、冷凝集                     素

细胞 免疫水平检测： T 细胞、 CD4 细胞亚群、 CD8 细胞亚群、 CD4/CD8 、 T 细胞转化试验                     检测致敏 T 细胞、 NK 细胞活性测定、细胞因子检测

       血清肌酐 、 IL-2R 同时增高  ~ 对 急性移植排斥反应 具有诊断意义

      骨髓移植时发生 移植物抗宿主反应 （ GVHR ）是移植排斥反应的 特殊类型

补体水平检测： 排斥发生时，补体消耗增加、含量减少。