【收藏】气相色谱峰拖尾的原因终于找到了

每个实验员的实验生涯中，总会遇到那么N次色谱峰拖尾。 那么色谱峰为什么会拖尾呢？ 是柱子坏了？ 还是操作失误？ 主要原因有以下3种，我们今天具体看看都是哪3种原因。

气相色谱仪（GC）和气相色谱质谱联用仪分析化合物时，有时候会遇到色谱峰拖尾的问题，根据拖尾的现象，可以分为：

（1）低浓度的组分正常，高浓度的组分拖尾；

（2）极性化合物拖尾；

（3）早流出的组分拖尾；

（4）晚流出的组分拖尾；

（5）所有组分拖尾；

如果气相色谱峰拖尾，一般是气相色谱仪的原因，与质谱仪或气相色谱仪检测器的关系不大，主要从以下几个方面分析：样品、进样口和色谱柱三个问题，下面我们具体分析一下。

01

样品的问题

1、样品浓度太高

样品浓度太高时，样品的色谱峰就会有明显的拖尾，这种情况下可以稀释样品，或者把样品进样的模式由不分流进样改为分流进样，或者把分流进样的分流比调高一些，例如之前设置进样分流比为10:1，根据样品的实际浓度可以设置为100:1等。

2、样品的性质问题

①化合物极性太强

分析极性化合物或活性化合物时，其活性位点容易与流经途中的位点吸附而呈现出拖尾，这种情况下要求样品分析系统具有良好的惰性，例如使用超惰的衬管、干净的分流平板和惰性好的低流失色谱柱。

②化合物的沸点太低

早流出的组分一般是挥发性强、沸点低的组分，这类化合物拖尾严重时，主要原因在于化合物的沸点太低，可能在于溶剂聚焦效应不够，溶剂没有完全冷凝、有部分气化时，样品就进入了色谱柱，这样沸点低的化合物也就先进入色谱柱进行分析了，导致色谱峰拖尾。这种情况下可以降低进样口的温度、调整程序升温的初始温度在溶剂沸点10-25℃以下，让所有的化合物都在冷凝的情况下，整齐划一地进入色谱柱。

③化合物的沸点太高

晚流出的色谱峰一般是低挥发性、沸点高的组分，这类化合物的拖尾现象随着保留时间的增加而严重，主要原因在于化合物的沸点太高，在进样口气化不完全，或者色谱柱和传输线的温度偏低，引起样品在分析的过程中有部分冷凝，进而导致色谱峰拖尾。这种情况下，应该注意化合物的沸点，可以适当地提高进样口、色谱柱、传输线等处的温度可以改善拖尾现象。

02

进样口的问题

1、进样口的温度不合适

样品使用气相色谱仪分离时，首先进入进样口，在里面进行气化，所以要求进样口的温度要高于待测化合物的沸点，使化合物在进样口处充分气化。如果进样口的温度低于待测化合物的沸点，那么化合物就会气化不充分，也会导致色谱峰拖尾。并且，没有气化的化合物就会残留在进样口，污染进样隔垫和衬管，也可能响到其它化合物的峰形。高温有利用样品的气化，同时，也要考虑到样品的热稳定性，要保证样品在高温下不改变化学性质。

使用气相色谱仪分离化合物，利用新的隔垫、衬管和柱子时，化合物的分离度和峰形都很好。 使用一段时间后，化合物的峰形明显拖尾，这种情况下的主要原因就是进样口和色谱柱有污染。

2、隔垫和衬管被污染

进样口很容易被污染的两个部位就是隔垫和衬管。隔垫和衬管被污染后，化合物有可能与污染物结合或者发生反应，也会导致峰拖尾。这时候更换新的隔垫和衬管就会解决峰拖尾的问题。针对很容易拖尾的化合物，可以选择使用超惰性的衬管，不容易与化合物发生反应，有利于化合物的分离分析。 必要时，还可以清洗一下衬管下面的分流平板。

03

色谱柱的问题

1、色谱柱的类型问题

所使用的气相色谱柱不适合样品的分析，如果样品是极性的，使用了非极性或者弱极性的色谱柱，这种情况下色谱峰拖尾会很严重，这时候需要把色谱柱换成极性或者强极性的色谱柱就可以了。

2、色谱柱没有安装到位

色谱柱安装在进样口端是有长度要求的，一般安捷伦的色谱仪要求色谱柱露出进样口的柱螺母4-6mm，使用EI源要求露出质谱端1-2mm，使用CI源要求露出质谱端0-1mm；另外，不同的衬管对色谱柱的露出长度也会有不同的要求。如果色谱柱露出柱螺母太长，会阻碍样品迅速进入色谱柱，因而导致峰拖尾。毛细管柱伸入到气相色谱仪检测器FID/NFD/FPD等喷嘴距离太短，也有可能导致峰拖尾。

3、色谱柱的温度

色谱柱的温度是通过设置柱温箱的温度来控制的，合适的温度可以得到良好的分离度和峰形图。气相色谱仪一般都采用程序升温的方法来分离化合物，程序升温的起始温度要求低于最早流出的化合物沸点，对于低沸点的化合物可以设置程序升温的初始温度在溶剂沸点10-25℃以下。高沸点的化合物出现拖尾，可以适当提高该化合物出峰时的温度。

4、色谱柱有污染

如果一根色谱柱最开始分析样品的色谱峰都是正常的，使用一段时间后，发现色谱峰明显拖尾，这种情况下有可能就是色谱柱有污染。色谱柱被污染后，柱效就会下降，就会导致色谱峰拖尾。

解决方法：

第一步：清洗色谱柱

可以使用极性的有机溶剂甲醇和非极性的有机溶剂正己烷，交替进入气相色谱仪中，不运行质谱检测器，让有机溶剂清洗色谱柱。

第二步：老化色谱柱

设置柱温箱的温度高于色谱方法中的最高温度，低于色谱柱的最高耐受温度，保持3-4小时，然后再次检测样品，观察色谱峰是否有改善。

第三步：截掉色谱柱

再使用了第一步和第二步后，色谱峰拖尾的问题改善不是很明显的情况下，可以把接在进样口端的色谱柱截掉至少20厘米。色谱柱被污染，大部分的污染物会集中在进样口端，所以可以把进样口端的色谱柱截掉至少20里面；如果污染严重的话，截掉长度可以更长一些。

相信通过如此剥丝抽茧的分析排出，一定可以找到色谱峰拖尾的问题并完美地解决。

2023基于中美药典与ICH指导原则的分析方法开发项目管理、验证及分析评价中统计学工具应用培训班

时间：02 月24日-26日

地点：上海

课程概述

    质量研究是质量标准制订的基础，质量标准是质量保证体系的重要组成部分，对保证新原料药及制剂放行时和货架寿命期间的质量起到重要作用。质量标准中关键项目指标的识别与限度确定，脱离不开分析方法，分析方法的建立、验证、转移或确认又是通过对分析数据评价来实现的，药品检验及其结果判定更要以分析数据为依据，为帮助企科学地运用统计学知识分析评估、解释和处理所获得的分析数据，我们定于 2023 年 02 月 24 日 -26 日 在 上海 举办 “ 2023 基于中美药典与 ICH 指导原则的分析方法开发项目管理、验证及分析评价中统计学工具应用培训班 ”

课程时间安排

02月25日

9:00-12:00  

基于 ICHQ14 及 USP1220 分析方法生命周期的分析方法项目管理与关键技术

1. 药物分析人员的日常培训与实验室有序高效管理

（法规、记录、培训、 COA 报告）

2. 基于 QbD 理念开展关键质量指标的把控实例分析

（晶型、残留溶剂、有关物质、基因毒性杂质、 pKa/logP 、纯度标化）

3. 以样品物料平衡为主线的集约化分析项目管理

主讲人：陈老师   中国科学院上海药物研究所研究员   一直在做创新药物和仿制药物的质量研究与标准制订。经历过十几个创新药研发到获批的过程，她已经形成独特的思考方式、项目把控模式。考虑科研以外的管理、人员培训、实验室项目监控等并把法规参透，于是陈博士可以把分析做成一个药品研发整个链条中的一个强势学科去推动整个新药项目的开展。

02月25日

13:30-16:30

基于中美欧最新版药典与 ICHQ14 指导原则的分析方法开发与建立

1 ）方法建立前的准备和文献查询；

2 ）不同来源分析方法的比较研究（主要针对杂质检测）；

3 ）如何验证所建立的分析方法适用于自研产品（系统适用性研究）；

4 ）建立质量标准时，哪些杂质应采用准确法检测、哪些杂质可采用限度法检测。

5 ）分析方法的稳健性和操作设计空间研究（杂质会漏检吗？）；

6 ）方法的变更管理内容研究（变更时“做减法”很难获得批准）；

主讲人：谢老师   上海市食品药品检验所   曾发表多篇溶出度和有关物质研究的文章，引起业内瞩目。

02月26日

9:00-12:00    13:30-16:30

一、方法验证基本要求

1   分析方法验证适用范围   2. 分析方法的生命周期管理

3   可报告范围确定     4   稳定性指示方法

5   多变量分析方法

二、分析方法验证的主要内容及关键要点

1 专属性评估，多种方法验证方法的专属性

2 准确度实验设计原则和可接受标准

3 精密度实验设计原则和可接受标准

4   工作范围确定

4.1   校准模型建立 线性或非线性和范围设计的基本原则

4.2   低范围限的验证，检测限和定量限的评估

5 方法耐用性的设计和评价

6   系统适用性试验的选择

三、分析方法评价和使用中的统计学工具

1 、测量不确定度及其应用

2 、异常值的检验与剔除（ USP<1010> ）

3 、精密度和准确度评价（ USP<1210> ）

3.1   准确度和精密度分别验证

3.2   准确度和精密度综合验证

4 、检测限和定量限的评估（ USP<1210> ）

主讲人： 王老师 药典委员会委员、原省药检验院副院长、主任药师 中国药科大学兼职教授，博士生导师，国家药典委员会理化专业委员会委员，还是多家药学杂志的编委。2011年获中国药学发展奖奖励工作委员会和长江药学发展基金会颁发的"2011年度中国药学发展奖-食品药品质量检测技术奖的突出成就奖"。已在国内外相关杂志发表论文160余篇，主编出版《药品检验》等专著多部，参与《中国药品检验操作规程》等和多部专著的编写，是《中国药典分析检测技术指南》副主编，还参与中国药典二部部分品种和四部的部分通则的英文版编审工作。

会务费

会务费 : 2500 元 / 人 （会务费包括：发票、培训、答疑、资料等） （参加朋友圈积攒活动最高可优惠 5 00元/人） 

培训报名联系人 ： 王老师 

微信/手机：15506140531

增值服务

报名参加此培训课程单位可免费观看以下 回放视频（任选其一）！

地点	时间	会议主题（如需了解详情请点击文字链接查看）
线上	2 月23-24日	【线上】药企合规性自检内审专管人员内部检查技巧实战应用
上海	2 月23-24日	【上海】2023基于中美药典与ICH指导原则的分析方法开发项目管理、验证及分析评价中统计学工具应用培训班
线上	2 月25-26日	【线上】中美欧生物制品注册递交全流程及资料准备与案例分析
线上	2 月25-26日	【线上】抗肿瘤双抗开发及申报要点
线上	2 月25-26日	【线上】双抗类药物安全性评价与药代动力学研究
线上	2 月25-26日	【线上】AAV基因治疗产品非临床评价研究策略
线上	2 月25-26日	【线上】稳定细胞株构建与上游工艺技术及实现
线上	2 月25-26日	【线上】从研发到临床GMP实施要点培训班
线上	2 月25-26日	【线上】药品研发项目管理全流程实施
线上	2 月25-26日	【线上】药品注册事务体系构建及实战申报执行策略实操
线上	2 月25-26日	【线上】中美欧药物警戒体系搭建实施要点应用实操
线上	3 月05-07日	【线上】药品注册电子申报实操演练及CTD撰写
线上	3 月10-12日	【线上】细胞治疗产品开发全流程及申报审评要点
线上	3 月17-19日	【线上】新建生物制品厂房全流程管理
线上	3 月25-26日	【线上】抗体药物工艺验证及转移、病毒灭活验证、下游工艺性能确认策略实施

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