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内含福利丨制药行业液相分析的普遍适用梯度方法

时间：2022-08-23 来源：浏览：

原创 Michael W. Dong 色谱学堂

色谱学堂

微信号 chromclass

功能介绍简明、有趣的教程，帮你学习更多科学仪器的原理、操作和维护知识。我们拒绝无趣、拒绝无聊：）发送"目录"，获取更多色谱学堂文章列表。

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液相色谱的方法开发（Method Develpment）不是一件容易的事情。该用什么流动相，什么色谱柱，梯度怎么设置，用什么温度，什么波长等等，对于刚入行的同学，是一件非常令人头疼的事情。

那么，有没有对于大多数小分子有机化合物都通用的液相方法（Generic HPLC Method）呢?

理想是丰满的，但这一次现实却不是骨感的。

虽然我们找不到一个百分百放之四海皆可的液相方法，但是我们却找到了一个对于 制药行业绝大多数小分子分析 都可以作为起始条件的 “通用”方法 ，在此基础上根据实际出峰情况做一些小调整，方法开始基本在一两个小时内就可以搞定。

该方法是由Michael W. Dong 2016年LCGC杂志上发表，我们得到作者的授权，把文章的内容作了摘要分享给大家。

色谱条件

色谱柱：

Waters Cortecs C18+ or Agilent Poroshell HPH-C18 (2.7 μm, 50 x 3.0 mm)

流动相：

A通道：0.05%甲酸

B通道：乙腈

梯度条件：

5-60%B in 2 min, 60-95% B in 0.5 min

流速： 1.0 mL/min

色谱柱温度： 40 ℃

检测器： UV at 220 or 254 nm and MS ESI+.

那么，这些色谱条件是如何被选择出来的呢，我们一条条来看。

为什么选取这款色谱柱？

选择 表面多孔颗粒柱 （superficially porous particles，SPP）的原因，是它能够提供相比其他同类色谱柱 更高的柱效 ，以及对于 碱性化合物更小的拖尾 。
同时选择 2.7um的粒径 和 3mm的内径 能够更好地兼顾HPLC和UPLC的方法转移的需要，在流速和进样量上更接近最常规的4.6mm内径的色谱柱。

在相同流动相条件下，不同色谱柱对NCEs混合物分析得到的色谱图的对比

（a）色谱柱：Waters Cortecs C18+, 2.7 μm, 50 x 3.0 mm;

（b）色谱柱：Waters BEH C18 column ,1.7 μm, 50 x 3.0 mm，显示出更严重的峰拖尾
选用 50mm的柱长 可以获得在 速度和峰容量之间平衡的灵活性 。在梯度时间（Time of Gradient）从一分钟增加到十分钟，峰容量（Peak Capacity）很容易就从100增加到了300，如下图：