一图搞定！PCR 引物设计、酶、dNTP

• 如何设置循环参数？

• PCR 反应体系如何设置最标准？

1、 酶的选择

建议综合考虑保真性、扩增速度、操作简便性、价格等衡量因素选择合适的 DNA 聚合酶。此外，过高的温度以及过长的时间对 DNA 聚合酶的活性都有影响。

2、变性温度不能过高

会影响酶的活性，变性温度低，解链不完全，导致引物不能结合，得不到扩增产物；

3、退火温度

建议与引物的 Tm 值有关，退火温度一般设置为 Tm-5；

4、循环参数

依据实验目的而定，一般的检测质粒构建是否成功，20~24 个循环就可以；而对于构建过程获得 PCR 产物来说一般 28~34 个循环左右。循环数太小，获得的产物不够，循环数太多浪费时间，产物的特异性也不一定好，不是循环数越多越好。