羊胎酶的水解工艺条件

●科研开发食品与机械2002年第1期总第87期羊胎酶的水解工艺条件The enzymatic hydrolysate conditions of sheep placentas and embryos口苏晔魏泓蒋作明敬璞Wei Hong Jiang Zuoming Jing Pu摘要研究了适用于羊胎水解的蛋白酶及其木瓜蛋白酶( Papain),Merk公司进酶最适作用条件,8如表1所示。最适的酶解条件研究结果如下:以水解度和口分装活力15×104u/g;氮收率为指标通过中性蛋白酶、胃蛋白酶胃蛋白酶( Pepsin),无锡酶制剂厂→胰酶%胰酶和木瓜蛋白酶4种蛋白酶对羊胎蛋白质30·木瓜蛋白酶%活力10×104u/g中性蛋白酶%水解效率的比较,选择胰酶为水解羊胎的最1.2方法胃蛋白酶%关键词羊胎蛋白酶水解工艺蛋白质含量(总氮量)的测定:Abstract An optimum technology of enzymaticFim酚法。3drolysate of sheep placentas and embryos was游离氨基酸含量的测定:中性甲醛studied through uniform desi. The optimum滴定法。水解度(DH)的测定:以水解前后过to the DH% and receival of nitrogen degree,the滤液中氨态氮量和反应体系中总氮量的时间/has selected as the optimal enzyme百分比(%)表示。(5图1不同蛋白酶对羊胎的水解度一时from the neutral protease, pepsin, papain andDH%=氨基氮含量/总氮×100%间曲线pancreatin氮收率的测定:以水解过滤液中总90量和反应体系中总氮量的百分比(%)80tease Hydrolysis Conditions表示。59胚胎和胎盘统称为羊胎。胎盘俗氨基酸组成和含量的测定:氨基酸称紫河车,具有滋阴养肾生精补血之功自动分析仪木瓜蛋白酶%效常用于妇女产后虚弱失血过多。也1.3水解工艺流程一中性蛋白酶胰酶%常被人们用来食补。已有的研究表明胚原料→加热煮沸(10~15min)→适胃蛋白酶%胎及胎盘蛋白酶水解液中含有丰富的当冷却→调时为酶最适叫加酶术基酸、多肽及其它生物活性成分能明显解→灭酶(90℃,10mn)→调pH至70地增强机体免疫机能,是当前该类保健离心(8000r/min,离心15mn)→酶图2不同蛋白酶氮收率一时间曲线补品中的主要成分之一0.2水解液从图1、图2及表2可以看出,胰酶羊胎经蛋白酶不完全水解,生成多2结果与分析的水解速度最快,胃蛋白酶的水解度最肽及氨基酸的混合物其消化吸收率大2.1酶的选择慢。对于氮收率来讲,不同蛋白酶催化水解时蛋白质回收率也是以胰酶最高大提高,利用价值提高。因此我们进行分别选用胰了此方面的研究,以在保证氮收率的前酶、胃蛋白酶、木瓜表1不同蛋白酶水解羊胎的条件提下,尽可能提高蛋白质的水解度。蛋白酶、中性蛋白蛋白酶种类酶用量底物含量温度反应时间1材料与方法酶,在各酶的最适6000451.1材料条件下水解羊胎蛋中性蛋白酶6000羊胎,市售白质,以水解度及木瓜蛋白酶6001557.0胰酶( Pancreat,sgm公司进口氮收率作为评价指围蛋白酶6000545255分装活力10×10u/g;标做出水解度一+为每g底物中酶活力单位U1398中性蛋白酶( neutral protease)),时间曲线和氮收率无锡酶制剂厂,活力10×104u/g一时间曲线,如图表2不同蛋白酶对羊胎水解产物的感官评定1和图2所示,同中国煤化工(蛋白酶胃蛋白酶重庆市2001年重点技术创新项目№o,147时兼顾水解液的感水解液〗和国家自然科学基金No.30070120官性状。表2对不评定CNMHG腥味重什第三军医大学实验动物中心博士,同蛋白酶水解羊胎水解液苦味5水解液外观淡黄色浑浊淡黄色较清淡黄色浑浊淡黄色浑浊400038四川重庆所得水解液的感官评定6收稿日期2001-12-17性质作了比较。各20FOOD& MACHINERY总第87期苏晔等:羊胎酶的水解工艺条件●科研开发达8135%,木瓜蛋白酶次之。从水解以蛋白质的水解度为指标对水解结果2.3水解液游离氨基本酸组成及含量液感观评定结果来看,以中性蛋白酶效利用“SAS"进行回归分析及寻优计算的分析果最好。虽然胰酶本身有一种不愉快的找出水解的最优条件。所得试验结果见从表5中可以看出,水解液中含有味道,且水解液腥味较重,但这些在其后表3。19种组成蛋白质的氨基酸游离氨基酸的工艺过程中都可以除去。从水解效率根据试验结果求出回归方程总量为4537mg/ml,其中包括人体所来讲胰酶水解度和氮回收率均最高,从8.3632-461441-必需的8种氨基酸。与酸水解相比,其原料来源及成本出发,与其它几种酶相0.1451X2+0.2709X1X2+0.99602X4氨基酸组成中增加了色氨酸和y氨基比胰酶国内生产厂家较多价格也相对0.0732X2X3丁酸,提高了营养价值较便宜,因此选择其作为水解羊胎蛋白复相关系数RC=0.93923结论质的工具酶方程的F值检验F=3.087>(1)以水解度和氮收率为指标,通F(0.05)=0.过中性蛋白酶、胃蛋白酶胰酶和木瓜蛋表3均匀设计试验实施方案U(7+)及结果4061白酶4种蛋白酶对羊胎蛋白质水解效率试验号量底物浓度水解温度水解时间水解度方程的复相关的比较选择肤酶为水解羊胎的最适酶系数较高,表明回(2)通过均匀设计法选得羊胎水解10.59.0505.026.32归方程与试验点拟的最适条件为酶用量25%(100g原料1.015.0354.527.98合情况较好,各方加胰酶2.5g),底物浓度509%100ml程的F值检验值水中加原料5.0g),反应温度40℃,反453.5均大于各自的F应时间3h,此时水解度为3928%567552.532.48分布临界值,说明(3)羊胎水解液中含有19种组成蛋2.02.8F值检验通过,回白质的氨基酸包括人体所必需的8种氨归方程有意义基酸其游离氨基酸总量为45.37mg/ml表4回归方程及最优解的验证结果对实验中最好参考文献实验号X1X2X3X的4号进行预报预报值实验值报值:X1,1谢鹭姚开秦.人胚作为实验材料的应用3.05.039.2838.3423.05.0403039283105X,x,X=2.0及其伦理学争议,医学与哲学,1997,182.55.5403.537.33,03110,4.5,3.543.05.5403.538.043.13Y=37.742李宝才,闻克威,盛国英,等,羊胎水解液类脂化学组成的研究,食品科学,2000,实测值:X1X2,X3,X4=2.0,表5水解液中游离氨基酸组成和含量3 Bradford MM. A rapid and sensitive method for11.0,4.5,3.5Y含量he quantitation o microgram quantities o pro-1=38.25tein utilizing the principle of proten dye binding缬氨酸val180半胱氨酸Cys2,01二者相差很Anal bachem,1976(72):248-2551.32酪氨酸Tyr1.06小,且该试验点在4GBI09.399赖氨酸L242组氨酸Hs2.31各因变量的考察区5熊善柏,王启明,赵山,乌鸡肉蛋白质分色氨酸Tp0.58精氨酸Arg85域内,因此在此号步酶解工艺与水解液澄清方法研究,食甘氨酸Gy6,48脯氨酸Pro试验点的附近区品工业科技,200021(4):56~58苯丙氨酸Phe甲硫氨酸Met2,05域,求各因变量最熊明民,徐幸莲陈伯样,乌骨鸡肉酶解条0.91丙氨酸Aa异亮氨酸le优解为:件的研究,肉类研究197(3):16-19黄文涛胡学智.酶应用手册,上海:科亮氨酸Leu3.49氨基丁酸1.89学技术出版社,1989天冬氨酸Ap273游离氨基酸总和45.37403.08王璋.食品酶学.北京:轻工业出版社Y=39.28%22酶作用最适条件的选择1990在综合因变量最优解附近对回归方9熊燕飞,王惠平,陈怀新,等.酶法水解蚕水解反应的温度、起始叫值、酶用程的预测值及最优解进行验证,结果见蛋白制备多肽的工艺研究,胡北大学量底物浓度和反应时间都是影响蛋白表4,表4结果与预测值基本相符说明学报,192(3:18-20酶水解反应的重要工艺参数。因蛋白酶回归方程具有一定的预见性最优解也10方开秦,均匀设计与均匀设计表M在其最适作用值范围内,值的变是可靠的因此得出肤酶飞化对酶促速度的影响不大1,.因此选择白质的最优条件为酶用量中国煤化工国平,等.酶促水解酶用量(ES)%(100g净蛋白质所加酶原料加胰酶2.5g),底物CNMHG究,食品工业与发酵的克数)底物浓度S%(100ml水中所(100ml水中加原料50g),反应温度1994(5):7-10加原料的克数)水解温度(T)C℃、水解0℃,反应时间3h时间(t)h四因素,通过均匀设计法0FoOD& MACHINERY