PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中的条件研究

变性梯度凝胶电泳技术广泛应用于微生物生态学的研究,最近也渗透到食品微生物学领域.为了检测发酵乳制品中乳酸菌的组成及动态变化,本实验对PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中所需要的条件如变性剂梯度、电泳时间进行研究.结果表明,变性剂梯度在30%～55%,电泳时间为200min时,能够有效分离乳酸菌的16S rRNA基因的V3区域.在此基础上,就PCR技术对染色体DNA混合模板的扩增效率进行分析,结果发现,常规PCR技术与降落PCR技术对乳酸菌16S rRNA基因V3区域的扩增没有差异,而细菌通用引物对乳酸菌模板DNA的识别和扩增具有优先和偏爱性,预示PCR-DGGE技术用于微生物群体检测时还应选用乳酸菌引物进行佐证.