地黄提取工艺的优化

第12卷第1期中国实验方剂学杂志Vol. 12,No.12006年1月Chinese Jourmal of Experimental Traditional Medical FormulaeJan. ,2006地黄提取工艺的优化宋子荣'* ,谭梓骏”,陈西松’,白海波'(1.江西中医学院,江西南昌330006; 2. 浙江养生堂药物研究所,浙江杭州~ 310007;3.浙江中医学院,浙江杭州310053)[摘要]目的 :研兖地黄中有效成分梓醇以及地黄抗氧化能力的最佳提取条件。方法:以HPLC为含量测定方法,采用重复正交实验法,以乙醇浓度(A)、溶剂量(B)、提取时间(C)和提取次数(D)4个因素,每个因素选取3个水平进行实验,同时利用化学发光法进行体外抗氧化能力研究,最后确定提取工艺。结果:因素A.B、C、D对梓醇的含量均有显著影响。其抗氧化能.力以醇提2次为佳。结论:60%乙醇8倍量,回流提取2次,每次1.5h为梓醇及地黄抗氧化能力的较佳提取条件。[关键词]地黄;梓醇 ;正交实验;抗氧化能力;HPLC;化学发光法[中图分类号] R283.6[文献标识码] B [文章编号] 105-9302006010008-02地黄为玄参科植物Rehma,nnia glutinosa Libosch.作,注入发光仪进行测定,以Ve为对照品进行计算。的块茎,其化学成分研究表明,有效成分含有梓醇等3结果环烯醚萜甙类，极性较大,为更好发挥地黄的药用功3.1梓醇为指标效,本研究以梓醇为检测指标,采用HPLC方法,考3.1.1提取溶剂的确定 取10g地黄药材两份,一察了提取溶媒、提取方法、提取次数和溶媒用量等因份用10倍水提取1h,提取4次,每次100mL 定容;素,同时采用化学发光法,以地黄抗氧化能力为指标- 份用10倍70%乙醇提取1小时，提取4次,每次对提取条件进行探讨,确定了最佳工艺条件。100mL定容,10倍稀释后HPLC法测定梓醇含量。1仪器与试剂检测结果:水提得率为1.28%, 第一次提取出66%，Angilent1100高效液相色谱仪，DAD检测器;70%乙醇提取得率为1.96%,第一次提取出75%。Photochem发光仪(德耶拿仪器公司),梓醇(0808~所 以选择醇提法提取,梓醇提取得率更高。9803,中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯);化3.1.2正交实验设计及结果 为确定 地黄醇提的学发光试剂盒(德耶拿仪器公司);地黄药材(华东医提取工艺，以梓醇为指标,采用L,(3^ )正交实验进行药股份有限公司)经鉴定为玄参科植物地黄优选,正交因素,水平见表1。Rehmannia glutinosa Libosch. 的块茎。表1正交试验因素 、冰平裹2实验方法因素2.1梓醇含量测定 采用 HPLC法测定,色谱柱为4.6x 150mm C18;流动相为乙腈-水(2:98);检测波乙醇依度(%)溶剂量(倍)提取时间(h) 提取次数(次)长212nm;柱温28C;流量0.6mL/min;经方法学考0.5察合格,回归方程为Y = 0.0002X - 0.0016, r =21.50.9999。(Y:浓度,X:峰面积)2.2地黄抗氧化能力测定 地黄 提取液(0.1g生药提取工艺过程为称取地黄10g左右,以不同浓/mL)作1:50稀释,精密吸取20puL,按试剂盒说明操度中国煤化工,分别按L,(3* )正交MHCNMHG液,加水稀释定容至1000mL,得1 ~9号样品液,做2次重复。精密量取[收稿日期] 204-11-.10[遁讯作者]宋子荣 , (0571)86669211上述样品溶液1mL,高速离心,注入色谱仪进行测●8..第12卷第1期中国实验方剂学杂志Vol.12,No. 12006年1月Chinese Jounal of Experimneatal Traditional Medical ForoulaeJan. ,2006定,以外标法计算梓醇含量。计算结果及方差分析3.2地黄抗氧化能力为指标 地黄醇提 、水提工艺见表2,表3。在抗氧化能力方面是否有差别，对此进行了研究。由表3、表4可见，以地黄梓醇提取量为指标,则精密称取地黄10g,分别以80mL60%乙醇和水为溶以A,B,CD,,即60%的乙醇溶液8倍量提取2次,每剂,平行操作条件下，回流提取2次,每次1.5h。醇次1.5h为较佳方案。提液60减压回收乙醇,以水稀释定容100mL,得样表2关于地黄药材梓醉提取的正交实验表品液,测定样品液抗氧化能力,各做6个样本,结果试验号B梓醇含量(%)见表4。0.489 0.5220.633 0.6584讨论0.544 0.468有文献以薄层扫描法测定梓醇,考察了水提10.613 0.487~5h和95%醇提2~4h梓醇含量,认为地黄水提10.652 0.728~ 2h为宜",刘明等以HPLC测定梓醇,通过正交试0.729 0.654验表明甲醇3倍量,加热回流提取2次,为梓醇较佳0.806 0.802提取条件(2]。本实验采用有重复的正交实验,以梓0.295 0. 3010.569 0. 549醇和抗氧化能力为指标,评价了地黄提取工艺,在选3.314 3.719 2.990 3. 509定的条件下,梓醇和抗氧化能力均达到理想效果,因[3.863 3.267 3.509 4 .282此,结果较为可靠,为工业生产提供有意义的参考。3..322 3.513 4.000 2.708为了考察梓醇的热稳定性,做了60%乙醇连续(I2+ U2+ m2)/9-CT 0.033 0.017 0.0B5 0.2068h提取的实验,在0.5.1.5.3.5.8h提取液中梓醇的离均差平方和含量逐渐上升,未见有下降。在浓缩于燥时发现,误差平方和0.0176105C烘于和60C真空烘于对样品中梓醇的含量影褒3影响地黄药材梓醇提取因囊的方整分析响较大。105气烘干后,梓醇的含量降为原来的来源离均差平方和自 由度方差F值显著性0.0330.01658.435p<0.0t10% ;60C真空烘干,梓醇的含量为原来的90%。表.0.00854.362P< 0.05明梓醇在溶剂中提取时比较稳定,但是在依缩干燥0.0850.042521.729P<0.0I时需注意,温度不宜过高。.0.2060.103252. 764P<0.01误差0.01760.0019 .[参考文献]查方差分析表,Fo.oua.0) = 8.06, F.or2.0 =4.26表4地黄药材抗氧化能力实驗结果(&xs)[1] 张玲,徐新刚,时延增, 等.地黄提取工艺研究[J].中草提取次敷醇提(ma)木提(mol)显蓍性(T-test)药,1998 ,29(5) :308-310.第一次1.453 +0.3831.075 +0.137P <0.05[2] 刘明, 李更生.鲜地黄中梓醇提取工艺[].时珍国医国第二次0.707 * 0.2380.585士0.078P>0.05药,00011<4):301-302.中国中医研究院更名为中国中国煤化工2005年11月19日,中国中医研究院成立50周年暨更名中国中医科YHCNMHG堂隆重举行。中共中央政治局委员、国务院副总理吴仪到会祝贺并作重要讲话。曹洪欣院长在以时中说,中国十达研尤既史名为中国中医科学院是几代中国中医研究院人乃至中医药人的夙愿.也是提高中医科学地位的重大举措,充分体现了党和政府对中医药发展的高度重视。(秦秋)