蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物对小鼠急性乙醇中毒的保护作用

第16卷第14期中国实验方剂学杂志Vol 16 No. 142010年10月Chinese Jourmal of Experimental Traditional Medical FormulaeOct,2010蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物对小鼠急性乙醇中毒的保护作用于海玲‘,李迎军,张小杰,刘洋,黄铭扬,赵莹(延边大学医学部基础医学院机能学实验中心,吉林延吉133000[摘要]目的:探讨蹄叶囊吾地上部分乙醇提取物对小鼠急性酒精中毒的保护作用。方法:采用一次g给予56度白酒记录小鼠翻正反射消失(醉酒)至恢复(醒酒)所需时间(min)及采用52度白酒ig复制小鼠急性乙醇中毒模型,并检测其血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性及丙二醛(MDA)、甘油三脂(TG)含最和肝组织中ALT、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px)活性及MDA,TG含量,观察蹄叶橐吾对小鼠急性乙醇中毒的保护作用。结果:与模型组相比,蹄叶橐吾组小鼠出现翻正反射消失(醉酒)的潜伏期明显延长(P<0.05),醒酒时间明显缩短(P<0.05);蹄叶囊吾组小鼠血清及肝组织中TC含量及ALT活性均明显降低,CSH-Px活性明显增高。结论:蹄叶棄吾对小鼠急性乙醇中毒有一定预防性的保护作用。[关键词]蹄叶橐吾;乙醇中毒;小鼠;甘油三脂;丙氨酸氨基转移酶;谷胱甘肽过氧化物酶;丙二醛[中图分类号]R285.5[文献标识码]B[文章编号]100590312010)14014703Protective Effect of Ligularia fischeri Ledeb turnagainst Acute Alcohol Intoxication in MiceYU Hai-ling, LI Ying-jun, ZHANG Xiao-jie, LIU Yang, HUANG Ming-yang, ZHAO YingExperimental Center of Fuctional Science, College of Basic Medicine, Yanbian University, Yanji 133000, ChinaAbstract] Objective: To investigate the protective effect of the ethanol extract of Ligularia fischeri LedebTurcz. in mice on acute alcohol intoxication. Method We recorded the duration from disappearance of rightingreflex( drunk) to restore( hangover)in mice, after given a gavage of 56 degrees liquor. In addition, alcoholinduced liver injury model of mice was established by acute gavage of 52 degrees liquor, and serum alanineaminotransferase( ALT)activity, malondialdehyde( MDA), triglyceride (TG ) content were tested. Activity ofglutamic-pyruvic transaminase(ALT), glutathione peroxidase(GSH-Px), malondialdehyde( MDA), triglyceride(TG )in liver tissue was also determined. Result: The ethanol extract of L. fischeri significantly prolonged theincubation period of righting reflex disappeared drunk )(P<0. 05),reduced hangover time (P <0. 05);significantly depressed TG and ALT levels(P<0.05 )in serum and liver tissue; and significantly increased GSHPx activity(P <0. 01) in liver tissue. Conclusion: L. fischeri may have a protective effect on acute alcoholIntoxication In miceI Key words] Ligularia fischeri; alcoholism; mice; triglyceride; alanine aminotransferase; glutathionealondialdehyd蹄叶橐吾 gularia fischeri Turn(Lfe)为菊科橐吾属多年生草本植物,又名肾叶橐吾(中药志)、马蹄叶要产中国煤化工长白山地区为主[收稿日期]20100304(002)茎(名为山紫菀RadixCNMHG通讯作者]·于海玲博士,副教授,研究方向:神经药理学本草依据和相当Tel: 0433-2660559, E-mail hlyue ybu. edu.cn长的用药历史,山紫菀已收入吉林省地方药品标第16卷第14期中国实验方剂学杂志Vol. 16. No 142010年10月Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulaeoct,2010准2。其根和根茎有镇咳祛痰、理气活血等功能。蹄叶囊吾高、中低剂量组(28,14,0.7gkg全草用于丹毒性炎症和关节脓肿,地上部分用于闪d-1)。每天讴给药1次连续8d,其中正常组和模型挫伤和痔疾。吉林省延边地区民间将其叶作为健组给予等体积蒸馏水给药容积均为20mLkg胃、开胃药,化痰药,而且对酒后胃肠不适及头痛有于第7天除正常组外均52度二锅头白酒12mL较好的缓解作用,并作为野菜经多种方法烹饪后为kg;24h后(第8天),重复ig52度二锅头白酒14广大民众食用。本研究室也证实蹄叶橐吾地上部分mLkg,末次给药12h(禁食不禁水)后,小鼠称重,乙醇提取物具有较好的抗炎作用、抗无水乙醇型胃标号摘眼球取血,常规方法分离血清,-80℃保存溃疡作用1,但有关其解酒保肝方面的研究尚未见小鼠脱颈椎处死,剖腹迅速摘取肝脏,切取新鲜肝组报道。本研究将通过药效学研究及机制探讨,观察织200mg,精密称定,在冰生理盐水中漂洗,剪碎按蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物对小鼠急性乙醇中毒质量体积比加入1:9倍的冰生理盐水,用组织匀浆器的保护作用。制成10%肝组织匀浆3000r·min-,离心10min1材料与方法上清液,-80℃保存备用。1.1动物雄性昆明种小鼠,体重22~24g,由延1.5测定指标及方法按试剂盒说明书检测血清边大学医学部实验动物科提供,许可证号SCXK中ALT活性,MDA,TG含量;测定肝组织中ALT(吉)20020005。GSH-Px活性,MDA,TG含量。蛋白含量测定采用考1.2受试药物蹄叶衰吾为7月份采自延边长白马斯亮蓝法。山地区,由延边大学药学院刘永镇教授鉴定。蹄叶L6数据的统计处理采用SPSS12.0进行单因橐吾地上部分乙醇提取物用95%乙醇加热回流提素方差分析,两两比较用LSD方法。P<0.05有统取,滤液加水放置24h,过滤后用石油醚萃取,水层计学意义加热浓缩至浸膏,每克相当于75g生药,实验时用2结果其水溶液2.1踹叶囊吾乙醇提取物预防小鼠醉酒作用由1.3药品与试剂56度红星二锅头白酒,北京红表1可知,与模型组比较药物组醉酒潜伏期明显延星股份有限公司生产,批号20080724;总蛋白定量测长,翻正反射恢复(醒酒)时间明显缩短(P<0.05)。试盒,批号200809152,丙氨酸氨基转移酶(ALT)测1叶囊吾对小鼠醉酒溜伏期及酯酒时间的影响(x士3n=12)定试剂盒,批号200809112,丙二醛(MDA)试剂盒,组别醉酒潜伏期醒酒时间·批号200809102,甘油三脂(TG)试剂盒,批号/g·kg1d1/min20080982,谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px)测试盒,機型21.4±3.5153.6±11.4蹄叶橐吾5.6116.3±10.81)批号20080932,购自南京建成生物工程研究所;其余117.0±11.7)试剂为国产分析纯。注:与模型组比较P<0.05,2)P<0.01(表2~3同)。1.4动物及分组22蹄叶棄吾乙醇提取物对小鼠急性酒精中毒的14.1蹄叶素吾对小鼠醉酒潜伏期及醒酒时间的保护作用影响36只小鼠随机分为3组,模型组,蹄叶囊吾22.1血清学检查表2结果显示,与模型组相高剂量组(5.6g·kg2·d),蹄叶豪吾低剂量组比,蹄叶橐吾组TG及ALT含量均明显降低(P<(28g“kgd);每天g给药2次连续4d其中0.05);MDA含量则无显著性差异。正常组和模型组ig给予等体积蒸馏水(含吐温囊2踏叶膏吾对小鼠血清中TG,MDA,GPT80),给药容积均为20mL·kg。第4天下午诏给含量的影晌(x,n=12)予相应药物或等体积蒸馏水后30min,均讴I次56°二锅头白酒14mL·kg,然后观察小鼠的活动情组况,记录各组小鼠翻正反射消失(醉酒潜伏期)时间正常中国煤化工43235.14137及翻正反射恢复(醒酒)所用时间。模型CNMHG36642.56±5.702±0.3514.19±3.7035.89±7.031.4.2蹄叶橐吾乙醇提取物对小鼠急性酒精中毒的1.41.54±0.41)14.41±5.3736.10±7,09)保护作用60只小鼠随机分为5组,正常组,模型组,第16卷第14期中国实验方剂学杂志Vol 16. No 142010年10月Chinese Journal of Experimental Traditional Medical FormulaeOet.2010表3蹄叶囊吾对小鼠肝组织中TG,MDA,ALT, GSH-PX含量的影响(x±,n=12)MDAALTGSH-Px组别/ mmol L“l/μumol·g“1U·mU·mg0.83±0.182)15.88±2.67142.75±2.912)132.6±14.61)模型1.57±0.4520.59±12.0447.28±3.4883.5±l1.9蹄叶橐吾16.47±2.6644.40±2.37113.4±15,920.99±0.252)16.68±3.8544.42±1.561)110.3±13.420.1.11±0.361)8±18.62)2.22肝组织中生化指标检测表3结果显示,与明蹄叶囊吾地上部分乙醇提取物降低酒精对肝脏的模型组相比,蹄叶豪吾组TG及ALT含量均明显降低损伤作用的机制,可能与提高机体抗氧化能力有关(P<0.05);MDA含量与模型组相比无显著性差异。另外,该实验结果表明,蹄叶毫吾地上部分乙醇3讨论提取物可以延长小鼠醉酒时间(潜伏期),缩短翻正该研究参照赵敏等的实验方法并略加改进,反射恢复(醒酒)时间。说明蹄叶囊吾乙醇提取物成功的复制出小鼠乙醇性肝损伤动物模型。乙醇所对小鼠醉酒实验有一定的预防性保护作用,也间接致肝损伤的重要机制之一是激活氧分子产生氧自由提示了蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物对小鼠急性乙基导致肝细胞膜的脂质过氧化。MDA是氧自由基醇中毒起到一定保护作用。攻击生物膜中的不饱和脂肪酸而形成的脂质过氧化物MDA含量的高低可反应氧自由基水平和脂质过[參考文献]氧化的强度与速率。因此对MDA的检测可反映出[1]李丽波,王玉祥孙连平等.蹄叶橐吾乙醇提取物抗机体内脂质过氧化和机体细胞受自由基攻击的损伤炎作用的实验研究[J].中国中医药科技,2004,11程度。正常时转氨酶主要存在于细胞内,血清中(5):285的活性很低组织器官中心肝活性最高。当某种原2吉林省卫生局吉林省药品标准M97:3[3]曲香芝,于海玲.蹄叶囊吾乙醇提取物抗溃疡作用研因使细胞膜通透性增高或细胞破坏时,转氨酶大量究[冂]J.时珍国医国药,2006,17(7):1190释放入血,造成血清中转氨酶活性明显升高因此测[4]赵敏,池莉平,王凤岩,等,小鼠急性酒楠性肝损伤模量血清及肝组织中ALT含量,可以反映出肝脏受损型的建立及应用[]华南预防医学,2005,31(1)程度6。肝脏是合成TG的主要场所,肝细胞能合成脂肪,但不能储存脂肪。TG在肝内质网合成后与[5]孙玉芹高天芸周姆等川芎嗪对小鼠急性肝损伤载脂蛋白及磷脂、胆固醇结合生成极低密度脂蛋白性脂肪肝保护作用的研究[J]中国临床药理学与治(VLDL),由肝细胞分泌入血而运输至肝外组织。如疗学,2007,5(6):540[6 Muller A, Sies H. Inhibition of ethanol-and aldehyde因中毒等原因TG不能形成LVDL分泌人血时,则聚induced release of ethane from isolated perfused rat liver集在肝细胞浆中,形成脂肪肝。因此,测量血清及肝by pargyline and disulfiram [J]. Pharmacol Biochem脏中TG含量可以反映肝脏受损情况切。本实验中Bhav,1983,18(1):429蹄叶橐吾地上部分乙醇提取物可以降低小鼠血清及[7] Strubelt o, Younes M, Pentz F. Enhancement by肝组织中TG含量及ALT活性,说明蹄叶橐吾地上glutthione depletion of ethanol-induced acute部分乙醇提取物对小鼠急性乙醇中毒可能具有一定hepatotoxicity in vitro and in vioo[ J ]. Toxicology, 1987的保护作用。45(2):213GSH-Px是体内一种重要抗氧化酶,具有清除体[8] PAN Lu-qing, REN Jia-yun, ZHENG De-bin, et al.Effects of benzo( a)pyrene exposure on the antioxidant内脂质过氧化物,保护细胞膜及生物大分子结构的enzyme activity of scallop Chlamysfarreni [ J]. Chin J生物学功能,它能特异性催化还原型谷胱甘肽Oceanol Limnol, 2009, 27(1):43(GSH)转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG),将有毒害作[9]YnwP.JmB.LmCH.ctal. Antioxidant activity用的脂质过氧化物(RoOH)还原成无毒害作用的羟中国煤化工基化合物(ROH),使H2O2分解,而且还能防止这些CNMHG rats[J].World J过氧化物的自由基重新发挥过氧化作用。因为Gastroenterology, 2009, 15(11): 1339蹄叶橐吾可升高小鼠肝脏组织中CSH-Px活性,表[责任编辑聂淑琴]