大鼠尿中的重组水蛭素分光光度法的研究

建立用分光光度法测定重组水蛭素(rH)在大鼠尿中含量的方法,并用该法研究静脉给药后,rH在大鼠尿中的排泄.以甲苯磺酰基-氨基乙酰基-脯氨酰基-精氨酰-对-硝基苯胺(Chromozym TH)为底物,凝血酶能水解Chromozym TH释放出对-硝基苯胺(pNA),pNA在405 nm波长处有特异性吸收,通过测定反应体系中未被rH抑制的凝血酶的量,间接测定rH的含量.结果表明,分光光度法能有效的测定大鼠尿中rH的含量,rH的浓度在6.25～75 ng·mL-1范围内呈线性关系(R2 =0.999 6)；日间和日内精密度RSD均＜10％,方法回收率＞95％,稀释回收率＞93％.应用上述方法测定大鼠iv0.5,1.0及2.0 mg·kg-1 rH后尿药浓度及排泄动力学,0～12 h累计排量分别为(116.850±57.160),(235.544±39.375)和(474.986±85.426) μg·kg-1,与给药剂量成正比；三种剂量的累计排泄率均为给药量的23％左右,与剂量无关,说明rH在大鼠体内的消除方式为一级线性动力学.本方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可用于尿中rH的测定.