熊果酸的生产工艺研究

江苏农业科学2006年第4期135熊果酸的生产工艺研究李开泉,刘水玲2(1宜春学院化学与生物工程学院江西宜春336000;2江西省宜春市袁州区疾病控制中心,江西宜春336000)摘要:釆用醇提凝析法提取分离枇杷叶中的熊果酸,用HPLC外标法测定其含量。熊果酸在4.6~23.0g范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为982%,产品纯度在95%以上。仅以乙醇为溶剂,不仅简化了工序,而且提高了产品的安全性,较好地解决了利用枇杷叶为原料生产熊果酸的技术难题,并证明HPLC法是测定熊果酸含量准确可靠的方法,可用于熊果酸及其制品的质量控制关键词:熊果酸;生产技术;工艺;枇杷叶中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1002-1302(2006)04-0135-02熊果酸( Ursolic Acid)为广泛存在于植物界的1材料与方法五环三萜类化合物,除医药上用于抗肝炎、抗肿瘤、抗菌消炎、降血糖血脂、增强免疫功能外,在日用化1.1材料、试剂、仪器与设备工、功能食品等方面也有重要用途-2)。熊果酸在陆英( Sambucus chinensis lindl)、甲醇(色谱纯,植物界分布较广,但其含量较低,目前国内外尚未实上海陆忠试剂厂),95%乙醇(食用级,广西糖厂);现人工合成因而研究熊果酸的制备技术,对开发熊活性炭(分析纯,上海豪申化学试剂有限公司);熊果酸系列产品具有重要意义。果酸对照品,由中国药品生物制品检定所提供Waters-515型双泵高效液相色谱仪,2996光电二收稿日期:006-01-26极管矩阵检测器(美国); Perkin- Elmer傅立叶变换基金项目:国家“863”计划项目(编号:2002AA2Z3217)红外光谱仪(美国);显微熔点测定仪(北京);WZZ作者简介:李开泉(1954-),男,江西丰城人,研究员,教授,硕导1S数字式自动旋光仪(上海)。主要从事天然药物化学与新药研究开发。Te(0795)32019831;1.2试验方法com。1.2.1制备方法与工艺将干燥的枇杷叶粉碎成也q生生qq生q也q也q也想q也也q也q也qq生(上接第134页)以看出,将多种防褐变剂合理复配将获得更好的防考文献褐变效果。[1]陶月良,邱君正,林华,等.板栗果实过氧化物酶与多酚氧化酶特性的研究[J].食品科学,2001(5):6-673小结〔2]顾军,王振斌,林琳,等.板栗罐头加工工艺的研究[冂].食品科技,2003(7):28-30常温反应系中板栗中的PPO在pH值4.0~[(3]段杉孙丽芹,姜爱莉,茶多酚在抑制板果褐变中的应用[6.0的范围内具有很高的活性,壳聚糖对板栗的中国食品添加剂,1998(3):10-12PPO酶活有明显的抑制作用,抑制效果随壳聚糖浓[4] Wayne D, Jenkins,, Raleigh. Investigating the radical based graft度的增加以及脱乙酰度的提高而加强。polymerization of chitosan with Organohalide/Metal Complex RedoxCoinitiating Systems [D]. North Carolina State University, 2001壳聚糖对褐变的抑制与其对金属的螯合性有[5] Marshall M, Kim J, Wei c. Enzymatic browning in f, vegetables关尤其是铜离子壳聚糖整合的C在反应体系 nd seafoods[ R.cnsi: d Science and Human Nutrition中的比例越大,对褐变的抑制效果越好of Florida 2000壳聚糖是很有潜力的天然防褐变剂,但板栗在6]Y中国煤化工Browning [D].Gaines-受热时褐变比较复杂,若将壳聚糖大量应用于板栗CNMHG的加工中还需对温度、时间和酸度等相关工艺条件[7]都意英,赵光,涂若,等果中多酚氧化酶的性质[].食进行进一步的研究。品与生物技术,2003,22(1):7-11136江苏农业科学2006年第4期粗粉(20目),用乙醇回流提取2次,每次1h,合并1.44×10,r=0.9999,表明当熊果酸进样量在46两次提取液,减压回收乙醇得浸膏。浸膏以水沉降~23.0吗之间时,线性关系良好。2次用“YCXY-1号”除杂剂处理除去脂类类脂2结果与分析类及叶绿素等杂质,过滤,不溶物以乙醇溶解,加活性炭脱色,经凝析分离、纯化精制,烘干,得针状结晶2.1样品鉴定结果熊果酸3根据样品的性状鉴定、熔点测定、 Liebermann1.2.2样品鉴定方法Burchard反应阳性、与对照品共薄层层析其Rf值22.1性状鉴定样品为无色针状结晶,不溶于致,鉴定样品为熊果酸。经进一步测定其红外光谱,水和石油醚,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙结果与熊果酸对照品的红外光谱完全一致。综合以醚等有机溶剂。[a]3+65°(c0.095,EOH),上理化性质和光谱数据确定样品为熊果酸3mp285~287℃,与熊果酸对照品混合熔点不下降。2.2含量测定结果2.2.2定性鉴别 Liebermann- Burchard反应:2.2.1样品溶液的配制精密称取熊果酸样品取熊果酸样品约2mg,以1ml95%乙醇溶解,吸取5.25mg,置于5ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至熊果酸乙醇溶液1滴置试管中,加醋酐试剂1ml,刻度,摇匀,溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后作为摇匀,沿试管壁缓缓加入浓硫酸试剂1m,在醋酐与样品溶液。浓硫酸界面上呈现紫红色圆环。2.2.2样品测定取3批熊果酸样品,用微量注射1.22.3薄层层析鉴定取硅胶G,加0.5%的器吸取10μ进样分析,每批重复进样5次。测得cMC-Na制成硬板,晾干后于110℃活化1h备批样品中熊果酸的平均含量分别为99.62%、用。取熊果酸样品约2mg,加1m95%乙醇溶解,99.54%、99.58%。点样,同时用熊果酸对照品作对照,以环己烷:丙酮(3:1)为展开剂,展距10cm,晾干,喷以10%硫酸3讨论乙醇溶液,于110℃加热5-10min。结果在与对照熊果酸在植物界分布虽广,但其含量较低,提取品相应的位置上显相同颜色的紫红色斑点,在365分离难度大。国内外普遍采用Al2O3硅胶等柱层nm紫外光下显相同颜色的金黄色荧光斑点。析法进行微量制备,需使用氯仿、甲醇等有害溶剂,1.2.2.4红外光谱鉴定样品IRmv(cm-1):不仅操作复杂制备量小,而且溶剂消耗大、成本高、3434(-0H)296829272871(C-H)、1694(C安全性差,难以实现批量生产。本制备技术仅以乙=0)、1456、1384(CH3)、1031(C-0)。醇为溶剂,未加用其他有机溶剂,不仅简化了程序,12.3样品熊果酸含量测定方法闻还提高了产品的安全性。醇提凝析法较好地解决了1.2.3.1色谱条件 Symmetry Shield RP-18色谱熊果酸制备过程中有关除杂纯化等技术难题。采柱(39×150 mm column,美国 Waters公司),柱温用自创的“YCXY-1号”除杂剂,不仅能有效去除脂25℃,流动相为甲醇-水(88:12),流速1m/min。类类脂类及叶绿素等杂质,而且有利于熊果酸的富1.2.3.2波长确定熊果酸在流动相中的紫外吸集和纯化,其纯度在99.8%以上。收光谱显示其最大吸收波长为202.2mm,但溶剂甲参考文献:醇在短波长处亦有吸收,为减少干扰,且不至于降低灵敏度,故确定210mm为检测波长。[1]陈武,李开泉,熊筱娟.陆英抗肝炎活性成分的研究[J]南昌1.2.3.3溶液配制对照品溶液精密称取熊果酸大学学报,2001,25(2):165-167对照品575mg,置于5ml容量瓶中,用甲醇溶解并[2]宋京张庆林、熊果酸药理作用研究进展[冂].中草药,199930(增刊):196-19稀释至刻度摇匀制成含熊果酸1.15mg/ml的对[3]李开泉,陈武,叶文峰,等,陆英中乌索酸的分离与鉴定[照品溶液。中国煤化工23.4线性关系用微量注射器分别吸取熊果[4CNMHG应用M,北京:北京医科酸对照品溶液4、8、12、16、20μ,按1.2.3.l色谱条件进样,测定峰面积。以峰面积对样品进样量进行5)邹盛動.陈武,李开泉,等陆英中乌索酸的分离与C测定线性回归,得熊果酸回归方程为Y=1.20×103X+