桂产藿香蓟乙醇提取物镇痛作用研究

论著中国医药导报2014年1月第11卷第2期桂产藿香蓟乙醇提取物镇痛作用研究唐秀能韦红棉▲陆翠林周至品李建哲刘冠达广西中医药大学附属瑞康医院,广西南宁530011摘要]目的观察桂产藿香蓟乙醇提取物的镇痛作用,探讨其作用机制。方法各自分别取60只合格昆明小鼠随机分为空白对照组阿司匹林组(04gkg)桂产藿香蓟乙醇提取物高、中、低剂量组,每组各12只。采用热板法、扭体法和甩尾法来观察桂产藿香蓟乙醇提取物的镇痛作用,并测定热板法小鼠血清丙二醛(MDA)、前列腺素E2(PGE2)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果①与空白对照组比较,桂产藿香蓟乙醇提取物能显著提高热板法小鼠热刺激痛阈,在给药后3060、90、120min均能显著延长小鼠舔足反应的潜伏期,差异均有统计学意义(P<0.05或P<001),显著降低小鼠血清MDA和PGE2含量,提高SOD活性,差异有统计学意义(P<0.05或P<001)。②与空白对照组比较桂产褴香蓟乙醇提取物均可显著减少醋酸致痛时小鼠扭体反应的次数,差异有统计学意义(P<005或P<001),其中桂产藿香蓟乙醇提取物高、中和低剂量组(6.0、30、15gkg)扭体抑制率分别为4545%、3565%和15.66%。③无论是与空白对照组比较还是与本组给药前比较,桂产霍香蓟乙醇提取物在给药后3060、90、120min能显著延长小鼠甩尾反应潜伏期,差异有统计学意义(P<0.05或P<001)。结论桂产藿香蓟乙醇提取物具有显著的镇痛作用,其机制之一可能与减少炎症介质释放、清除氧自由基有关。关键词]桂产藿香蓟乙醇提取物;镇痛;机制[中图分类号]R285(文献标识码]A[文章编号]1673-7210(201401(b)-0020Study on analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides. Lfrom guangxiTANG Xiuneng WEl Hongmian LU Cuilin ZHOU Zhipin LI Jianzhe LIU GuandaRuikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning530011. China[Abstract] Objective To observe analgesic effects of ethanol extract of A geratum conyzoides L. from Guangxi and toexplore its analgesic mechanisms. Methods 60 Kunming mice were selected individually in hot-plate method, bodytorsion method and swinging-tail method, all of them were divided into blank control group, Aspirin group (0. 4 g/kg, Agera-tum conyzoides. L. low dosage group, medium dosage group, high dosage group with 12 rats in each group Hot-platemethod, body-torsion method and swinging-tail method were used respectively to investigate the analgesic effects ofethanol extract of A geratum conyzoides L from Guangxi, and then, the contents of malondialdehyde(MAD)and prostaglandinE2(PGE) and the activity of superoxide dismutase (SOD)in hot-plate mice serum were measured. Results COmparedwith blank control group, thermal stimulation threshold in hot-plate mice was enhanced by the ethanol extract of A ger-atum conyzoides. L. from Guangxi, the latency time of the mice's licking at 30, 60, 90, 120 min respectively were pro-longed, the differences were statistically significant(P< 0.05 or P<0.01). Meanwhile, MDA and PGE2 productions wenreduced and SOD level in mice serum enhanced, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P<0.01)2 Compared with model control group, mouse twisting munbers were remarkably reduced by Ageratum conyzoides. L.from Guangxi, the differences were statistically significant(P< 0.05 or P<0.01). Body twisting inhibition rate in highmedium and low dosage group (6.0, 3.0, 1.5 g/kg) were 45.45%, 35.65% and 15.66% respectively. @3 Not only cepared with blank control group but also compared with former dose in each group, the latency of the tail flick responsein the mice at 30, 60, 90, 120 min were prolonged respectively after given the ethanol extract of A geratum conyzoidesL. from Guangx the differences were statistically significant(P < 0.05 or P< 0.01). Conclusion The ethanol extract ofAgeratum conyzoides. L. from Guangxi has significantly基金项目]广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(编号 analgesic effects, one of its analgesic mechanisms mayZ2011251)be relate to its ability of scavenging oxygen free radicals[作者简介唐秀能(19714-),男,壮族,硕士,副主任药师, and reducing the release of inflammatory cytokines硕士研究生导师;研究方向:生化药理学及临床药学。[Key words] Ethanol extract of A geratum conyzoides Li,▲通讯作者Analgesic; MechanismVE CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014中国医药导报2014年1月第11卷第2期论著藿香蓟属于菊科植物藿香蓟,又名胜红蓟、白花有痛阈值测定结束后,立即行小鼠眼球取血,3500rmin草、白花臭草、消炎草等,属一年生草本植物,多以全离心15min,弃下层沉淀,留上清液。将上清液置草或叶及嫩茎入药,传统药用功效为清热解毒、止血、于-20℃冰箱保存,随后按照试剂盒说明书的方法测止痛等,在亚洲、非洲、南美洲等地均广泛使用2我定前列腺素E2(PGE2)MDA的含量和SOD活性。国多分布于广东、广西、云南、贵州、四川、江西、福建1.22对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响另取一批小等地,民间常用于治感冒发热、咽喉肿痛、疗疮湿疹、鼠60只,体重(20±2)g,雌雄各半,分组及给药同外伤出血烧烫伤等。本研究采用野生于广西田间荒“12.”项下。末次给药后1h,每只小鼠腹部注射地的桂产藿香蓟进行镇痛作用研究,旨在探讨其镇痛0.6%醋酸溶液0.2mL,立即记录注射后15min内各作用及机制组小鼠的扭体反应次数,并计算扭体抑制率67。扭体1材料与方法抑制率(%)=[(空白对照组小鼠扭体均数-给药组小1.1材料鼠扭体均数)空白对照组小鼠扭体均数]×100%。111实验动物健康昆明种小鼠:体重(20±2)g;SPF123对甩尾法实验的影响另取一批小鼠,将小鼠尾尖级。动物许可证号:SCXK桂2009-0002,广西医科大3cm渗入(48.0±0.5)℃恒温水中,以小鼠第1次甩尾学医学实验动物中心提供。反应时间作为痛阈指标,所有小鼠在给药之前均进行L.1.2桂产藿香蓟乙醇提取物的制备桂产藿香蓟地测痛,以痛阈值10-30s为合格鼠,共6只。随后分上部分阴干后粉碎,精确称取2kg,加20倍量95%乙组及给药同“1.1项下"。末次给药后Ih,测定小鼠痛醇浸泡Ⅰh后加热回流提取Ih,置冷后过滤,留置第阈值,当痛阈值大于60s时停止测试,按60s记痛阈1次滤液;药渣加10倍量95%乙醇加热回流提取1h,值置冷后过滤,留置第2次滤液。合并2次滤液减压回1.3统计学方法收乙醇,提取液减压浓缩,再分别配成实验所需的相采用统计软件SPSS13.0对数据进行分析,正态应浓度的桂产藿香蓟乙醇提取物向。分布计量资料以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较1.1.3药物、试剂及仪器阿司匹林肠溶片,湖南新汇采用方差分析,两两比较采用ISD-检验。以P<制药股份有限公司,批号121104;盐酸吗啡片,青海005为差异有统计学意义。制药厂,批号20130317;冰醋酸、甲醇、氢氧化钾均为2结果分析纯;超氧化物歧化酶(SoOD)试剂盒、丙二醛21桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠热板实验的影响(MDA)试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙GJ-8402型热板测痛仪,浙江宁海白石电子医药仪器醇提取物高剂量组、中剂量组在给药后30、60、90120min均能显著延长小鼠舔足反应的潜伏期(P<0.051.2方法或P<0.01),桂产藿香蓟乙醇提取物低剂量组有延1.21对小鼠热板实验的影响将雌性小鼠放在水温长的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。本组给药调节到5℃的恒温水浴热板上,以小鼠舔后足的时间前后比较,桂产藿香蓟乙醇提取物高剂量组、中剂量为痛阈指标。所有小鼠在给药之前均进行测痛,以痛组在给药后306090、120min均能显著延长小鼠舔阈值10~30s为合格鼠。将合格小鼠60只随机分为足反应的潜伏期(P<0.05或P<0.01),桂产藿香蓟5组:空白对照组阿司匹林组(04gkg)桂产藿香蓟乙醇提取物低剂量组有延长的趋势,但差异无统计学乙醇提取物高、中、低剂量组(分别相当于生药60、意义(P>0.05)。见表1。30、15gkg),每组各12只。1次a,连续灌胃给药7d,22桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠血清PGE2MDA末次给药后0.5、1、1.5、2h各重复测定小鼠痛阈值,含量及SOD活性的影响当痛阈值大于60s时停止测试,按60s记痛阈值。所与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙表1桂产看香蓟乙醇提取物对小鼠热板实验痛阈值的影响(s,)组别只数剂量(gkg)给药前给药后30给药后60给药后90min给药后120min空白对照组1219.21±4.0819.76±5.392108±7.051907±6.2519.36±5.9阿司匹林组2236±5.5640.15±】1.67”40.58±14.22“▲30.27±11.2825.73±9.05桂产藿香蓟醇提物高剂量组21.12±63131.28±11.60°▲37.59±1207“▲3603±9.34“35.85±10.03·桂产截香蓟醇提物中剂量组1222.25±5.2333.11±12.7219±1266437.36±11.08▲桂产藿香蓟醇提物低剂量组122242±6.8824.24±6.69注:与空白对照组比较,P<005"P<001;与同组给药前比较,P<005,P<001;“-”表示未给药CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014论著中国医药导报2014年1月第11卷第2期醇提取物对小鼠血清PGE2、MDA含量及SOD活性具醇提取物高剂量组、中剂量组均可显著减少醋酸致痛有显著的影响。阿司匹林组、桂产藿香蓟乙醇提取物时小鼠扭体反应的次数(P<0.05或P<0.01),桂产高剂量组、中剂量组均能显著降低小鼠血清PGE2、藿香蓟乙醇提取物低剂量组有减少醋酸致痛时小鼠MDA含量,明显提高小鼠血清SOD活性(P<0.05或扭体反应的次数的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)P<0.01)。见表2。见表323桂产藿香蓟乙醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应2.4桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠甩尾反应的影响的影响与空白对照组比较,阿司匹林组、桂产藿香蓟乙与空白对照组比较阿司匹林组桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠甩尾反应具有显著影响。阿司匹林表2桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠血清PGE、MDA含量及SOD活性的影响(x土s)组别只数剂量(g/kgPGE,(ng/mMDA(nmol/mL)SOD(U/ml空白对照组0824±0.2154.16±03528.62±277阿司匹林组22220426±0.187205±0.264245±3.97桂产藿香蓟醇提物高计量组0.528±0.179264±0.28桂产香蓟醇提物中剂量组0.596±0.1952.79±0.3137.11±3.06桂产藿香蓟醇提物低计量组0642±0.119°3.52±03830.51±299注:与空白对照组比较,P<0.05,"P<001;“-表示未给药;PGF2:前列腺素E2;MDA:丙二醛;SOD:超氧化物歧化酶表3桂产着香蓟乙醇提取物对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响005)。组内给药前后比较桂产藿香蓟乙醇提取物高组别只数剂量15mn内扭体扭体抑制率剂量组、中剂量组在给药后3060、90、120min均能显著延长小鼠甩尾反应潜伏期(P<0.05或P<0.01),桂空白对照组396±928阿司匹林组1204173±5.36产藿香蓟乙醇提取物低剂量组有延长的趋势,但差异桂产藿香蓟醇提物高剂量组126021.6±6784545无统计学意义(P>0.05)。见表4。桂产藿香蓟醇提物中剂量组123.0251±71336653讨论桂产蕃香蓟醇提物低剂量组121.5334±8.0615.66注:与空白对照组比较,"P<001;“-“表示未给药及无数据热板法和甩尾法是两种较为典型的物理刺激致痛模型,扭体法致痛模型中较为典型的化学刺激模组、桂产藿香蓟乙醇提取物高剂量组、中剂量组在给型。本实验采用物理刺激致痛模型和化学刺激致痛模药后30、60、90、120min均能显著延长小鼠甩尾反应型的方法来观察桂产藿香蓟乙醇提取物对实验小鼠潜伏期(P<005或P<0.01),桂产藿香蓟乙醇提取的镇痛作用,结果显示,桂产藿香蓟乙醇提取物能显物低剂量组有延长的趋势,但差异无统计学意义(P>著提高热板法小鼠热刺激痛阔,在给药后30、60、90、表4桂产藿香蓟乙醇提取物对小鼠甩尾潜伏期的影响(s,x组别只数剂量(gkg)给药前给药后30mn给药后60mn给药后90min给药后120m空白对照组122346±4.3724.36±5.282465±6.1724.56±7.232464±6.25阿司匹林组122568±5924389±10.2441.26±13.213923+946·300±955桂产藿香蓟醇提物高剂量组24.21±6023561±90143648±11.8242.15±10.36-▲40.27±11.364▲桂产香蓟醇提物中剂量组302561±5873348±9.6234.21±1224394068±12.58°桂产藿香蓟醇提物低剂量组122532±4.962553+682867±8.103136±8.8930.33±841注:与空白对照组比较,P<0.05,"P<001;与本组给药前比较,P<0.05,P<0.01;“-”表示未给药120min均能显著延长小鼠舔足反应的潜伏期和小鼠他炎症疼痛介质的协同作用。MDA是自由基引甩尾反应潜伏期,能显著减少醋酸致痛时小鼠扭体反发的脂质过氧化反应的产物,在外周和中枢氧自由基应的次数,统计学结果比较具有显著性差异。说明桂均有致痛作用。SOD是自由基有力的清除剂,可通过产藿香蓟乙醇具有明显的镇痛作用。减少自由基的大量产生而达到镇痛作用。本研究结果产生疼痛的主要原因大多由PGE2、白三烯和氧显示桂产藿香蓟乙醇提取物能降低实验小鼠血清中自由基过多引起。PGE2是一种非常重要致痛介质,PGE2和MDA含量,提高小鼠血清SOD活性,提示桂可直接作用于神经末梢引起疼痛,下调痛觉感受器的产藿香蓟乙醇提取物镇痛作用可能与减少炎症介质痛阈值,提高其对其他致痛因子的敏感性,也可启动释放、清除氧自由基有关。疼痛所介导的信号转导通路,在外周和中枢都有重要有文献报道,小鼠热板法实验的舔足底反应不仅仅的作用,同时能增强组胺、5-羟色胺、缓激肽等其是脊髓反应,而且可能和高级中枢有关,而对冰醋January 2014中国医药导报2014年1月第11卷第2期论著酸引起小鼠疼痛的扭体法实验可能外周镇痛有关,endothelial interaclions by teactive metabolites of oxygen本实验显示桂产藿香蓟乙醇提取物对热板法和扭体and nitrogen relevance to ischemic heart disease [J]. Free法实验小鼠均有明显的镇痛作用,可以推测桂产藿香Radic bio med,1998,25(4-5):404-433蓟乙醇提取物的镇痛作用与中枢和外周均有关系。[10 Flodgren GM, Crenshaw AG, Alfredson h,eta. imamate[参考文献〕and prostagland in E2 in the trapezium uscle of female[1] Okunade AL Ageratum conyzoides L (Asteraceae)[]. Fisubjects with chronicm uscle pain and controls deter-mined by microdialysis [J]. Eur J Pain, 2005, 9(5): 511[2] Chah KF, Eze CA, Emuelosi CE, et aL Antibacterial and wound[11] Heinricher MM, Neubert MJ, Martenson ME. Prostaglandinhealing properties of methanolic extracts of some NigerianE2 in the midbrain periaqueductal gray produces hypermedicinal plants [] J Ethnopharmacol, 2006, 104(2): 164algesia and activates pain-modulating circuitry in therostral ventromedial medulla [J). 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