金属螯合亲和色谱中固定金属与蛋白质的作用

在不同pH NaCl的磷酸缓冲体系,比较了牛血清蛋白(BSA)、核糖核酸酶(RNase)、细胞色素C(Cyt-C)和溶菌酶(Lys)在IDA裸柱和一些金属螯合柱上的保留特性,考察了固定金属对蛋白质保留行为的影响.指出蛋白质在强结合IDA-Cu柱上的保留主要受固定金属和蛋白质间配位作用支配.在弱亲和的IDA-Ni、IDA-Co和IDA-Zn柱上的保留主要受静电作用控制,配位作用为辅.讨论了金属螯合亲和色谱中影响蛋白质和金属配位的主要因素:金属离子的电荷和半径、配位原子对中心离子外层d轨道的影响,以及蛋白质表面配位的组氨酸数目、离解常数和取向.影响金属螯合配体和蛋白质静电作用的主要因素为溶液的pH和蛋白质的等电点pI.