重组Maxadilan的制备与鉴定

为利用基因工程技术获得重组Maxadilan(RMMAX),根据Maxadilan的氨基酸序列,设计并人工合成了在原核表达的基因.克隆到表达载体pKYB,重组质粒pKYB-MAX转化表达宿主菌Escherichia coli strain ER2566,构建表达工程菌.用诱导剂IPTG诱导由目的多肤、内含肽和几丁质结合域(Chitin binding domain,CBD)组成的"三元"融合蛋白表达;用几丁质珠亲和层析纯化了裂解液中的融合蛋白,用β-巯基乙醇切割融合蛋白,获得目的蛋白.所得的多肽经激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符,生物活性分析表明,重组Maxadilan有显著的提升血糖的作用.