JB/T 6857-1993 液相色谱仪试验方法

JB中华人民共和国机械行业标准JB/ T 6857- 93液相色谱仪试验方法1993-07-09发布1994一01-01实施中华人民共和国机械丁业部发布中华人民共和国机械行业标准JB/ T 6857-93液相色谱仪试验方法↑主题内容和适用范園标准规定了液相色谱仪的试验方法。本标准适用于液相色谱仪(以下商称仪器)。不适用于专用液相色谱仪。2引用标准GB 4793电子测量仪器安全要求GB 6587.7电子测量仪器基本安全试验ZB Y002仪器仪表运输、运输贮存基本环境茶件及试验方法2BN52001液相色谱圆定波长(254nm)紫外吸收检测器试验方法3术语下列术语仅适用于本标准:仪器的启动时间:系指在正常试验条件下，当仪器达到稳定性、是敏度或敏感度要求后。关机停8h以上.再次启动(仪器.在试验条件下.戴新达到稳它生.灵敏度或敏感度要求时所需要的时间。4环境要求仪器应在以下所规定的正常条件下试验:a.环境温度:10-35T :b相对显要:不大于80%:c.供电电源:电压220 :22V ,顿率50 : 0.5Hz:d.室内应避免易燃、易爆和强腐浊性气体及强烈的机械振动，电磁干扰和空气对流等:e. 接地电阻小于10:5试验顺序本标准的条款顺字.不作为试验时规定顺甲。试验时可根据具体情况灵活安排，但应以后--试验不受前一试验的影响为原则。6输液 系统和色谱柱6.1以下 听用试剂规格均为分所纯级。所用流动相均应脱气处理:6.2 液路密封性连接输液系统、进祥装置及色谱柱，由输液系统输送甲醇--水溶液经色谱柱至废液瓶，调节流量，使压力达到或接近上限值,压力显示稳定后保持15min,用漶纸检查各接头处,应无湿润现象。6.3流量稳定生6.3.1试验设备.分度为0. 0lml.0.02ml的吸量管各一支:分度为1%的秒表一只。机械工业部1993 -07 - 09批佳1994 -01- 01实施JB/ T 6857-936.3.2试玉多件流量:0.2.0.5, 1.2ml / min;流动相:二次蒸馏水;色谱柱:反相柱[C18.5(10)μ]温度:室温上2C。6.3.3试验步骤柱出口接吸量管,启动输液泵，用秒表计时，分别记录流动相通过各设定流量值相对应的容积所经历的时间。每种流量重复11次.各流量一次测量的体积见下表:设定布量0.2.0.52ml/ min .体织1m53.4计算流量稳定生用变异系数表示按(1]式计算:Cr=(OX)*x 100% .................x:N”-1同式中:Cr-- -变异系数:AX--每次刺量的X值与n次测量的算术平均值的偏差:X--第i次测量的值:i---测量次数序号:n一测量总次数:6↓梯度准确度6.4.1溶夜甲溶液:2%异丙醇的二次蒸馏水溶液:乙溶液:0.13%丙酮的甲容液。员4.2 试验条件紫外吸收检测器波长:254nm;流量:4 -6ml / min;梯度范围:0~ 100%乙溶液，变化范围不小于25% ;记录仪纸速:4~ 5mm / min,8.4.3试验步濠在输液系统和恒测器样品池进口之间连接一根不锈钢管(内径0.4 -0.6mm,长200~ 300mm).通过主机设置溶液梯度程序，便乙溶液的比例在规定的范围内以每分钟百分之一的速率均匀增加，在记录仅上得到梯度由线如图I(该曲线应超过记录纸幅面的50%)。时间响应|浓室)国1雄音曲线JB/ T 6857-93644计算在曲线两侧绘制垂直距离最短的一对平行线，按(2)式计算:Ge==￥......................式中:Ge一-梯度准确度:X-一两平行线间垂直距离.mm;Y---梯度变化两端基线间垂直距离，mm;n-一实际梯度变化范围。6.5色谱柱6.5.1 吸附型硅胶柱试验条件紫外吸收检测器波长:254nm;流量:1ml / min;流动相:正己院(经干课处理):进详方式:阀进样( 10μl定量管):记录仪纸速:不小于16mm / min;试样:喜的正已院溶液.8x10°g/ ml;温度:室温:2t,65.2 烷基键台相柱试验条件直动相:甲醇85%.二次肅馏水15%;试样:葱的甲醇溶波.8x 10*g/ ml;紫外吸收整测器波长,流量、进样方式、记录仪纸速同6.5.1.日5.3试验步骤仅器在正常工作条件下.分别对两种柱进行试验。用平头微量注射器抽取定量管体织2 -3倍的试性16.5.1或6.52)注入进样阀定最音.快速转动进样阀手柄逆样,同时用秒表或数据处理赛置记录保留时间.在记录纹上记录谱图。间隔10min进样- -次. 重复3次，取算术平均值。6.5.4 计算6.5↓1性欲:按13式计算:式中:N一被测柱性饮， 1/ m;tn一一保留时间.s;War--半峰宽，5。6.5.4.2不对称因子(As)从峰顶作基线的重线为峰高h.在1/ 10h处作基线的平行线。该线被峰的两边线及峰高线分割成a、b两线段如图2:按|4)式计算:As=量时间国。止笛面升路田乙二面圈JB/T 6857-936.6重复性6.6.1试验条件流动相:甲醇;色谱柱:反相柱[C18.5(10)μ];记录仪纸速:4~ 5mm / min;紫外吸收检测器波长、流量、进样方式、试样同6.5.2。6.6.2试验方法仪器在正常工作条件下，流量稳定后.用平头微量注射器抽取定量管体积2~3倍的试样注入进样阀定量音，快速转动进样阀手柄进样，同时用秒表或数据处理装置记录保留时间，在记录仪上记录谱图。间渴5min进样一次，共11次。6.6.3计算定性与定量重复性用变异系數表示，用蔥蜂的保留时间及其峰高或峰面积分别作为定性和定量测量值,并按(1)式计算。6.7温度控制5.7.1试验设备任选下列一种:铂电阻测温计或分度值不低于0. IT的测温计。57.2试验条件最低可控温度和性加热器最高工作温度的90%两个温度点为试验温度。6.7.3试验步骤和计算将试验设备探头置柱加热器中的柱安装位置，选定的试验温度从低到高顺序升温，温度显示值稳定亏，隔5min记录一次，共6次，按()6(7)武计算:T.=干- r, - ..................... .T=iT- .........................式中:T一-6次测量的平均值:T,一第i次测量的值:i一-测量次数序号;T.- -试验温度;T,- - 温度控制准确度;Tp一温度 控制精密度。6.8绝缘电阻6.8.1试验设备500V兆欧表1只。6.8.2试验方法仪器在不工作状态下,测量仪器的相、中连线和机壳之间的绝缘电阻。6.9绝缘强度6.9.1试验设备0.25~2kVA高压试验台1台。6.9.2试验方法仪器在不工作状态下，仪器的相、中连线和机壳之间施以频率为50Hz的交流电压1500V.历时1min。ein岩凿由省JB/ T 6857-93按GB 6587.7中3.3条及图1进行。6.11受期预处理按GB 4793中9.7 条进行。6.12仪器的外观用目视和手感检查。7检测器7.1以下所用试剂规格均为分析纯级。7.2固定波长紫外吸收检测器7.2.1吸光度校准7.2.1.1校准用紫外一可见 分光光度计波长范围:200 - 700nm;波长精密度:优于土0.5nm:吸光度测量精密度:优于土1%。7.2.1.2溶液同6.4.1。7.213试验步骤在校准用分光北度计上，以甲溶液为空白，在254nm波长处测量乙溶液的吸光度Ae将甲、乙溶液交替充入检测池。在记录仪上得到以甲溶液为基线的乙溶液的响应值At,单位Au.重复3次取算术平门值。7.2.1.4计算AcaAj.b”bo8=A一A x 100% ...................Ac式中A---吃准值，Au:8-相对误 整;bo---校准用分光光度计测量池液层厚度. cm;b,-被测检测器样品池液层厚度cm。7.2.2稳定性7.2.21试验条件流量:1ml/ min:流动相:甲醇:色谱柱:反相柱[C18.5t0μ];温度:室温:1C。7.2.2.2试脸步骤:在检测器吸光度校准合格条件下，待达到检测器启动时间后，连续运行h,然后变动电源电压从220V到242V和198V.各试验0.5h.检验其基线漂移和噪声。7.2.3 启动时间7.2.3.1试验条件同7.2.2.1。7.2.3.2试验步骤在检测器吸光度校准合格条件下，用时钟渎出检测器从启动至达到基线漂移指标时所经历的时间。7.2.4线性范围.7.2.4.1溶液甲溶液:2%异丙醇的二次蒸馏水溶液;JB T 6857- 937 2 4.2试验步豫以甲溶液为基线，乙溶液按依度从低到高依次与甲溶液交替充人检测器样品池，在记录仪上得到不同乙溶液的吸光度。每种乙溶液重复3次取算术平均值。.7.2.4.3计算根据实测短期噪声按( 10)式计算:Ca =2N, . C/ ......................1.式中---检测器最小检测浓度。%;N,--实测短期噪專. Au;C.--乙溶液的丙酮浓复;H一乙海液 对应的吸光度, Au。在对数坐标纸上,作吸光度与乙溶液浓度的关系曲线,按ZB N52001中3.5.3.2茶.求出保持线性有应所允许的乙溶液的最大浓度Ch.Ch/Cmin即为检测器的线性范围s7.3可变波长素外及收检們器7.3.1波长准确度校准7.3.1.1试验设备权准用紫外一-可 见分光光度计同7.2. 1.1;逮光片:钬玻璃(厚度2mm.波长445nm时遗过率小于5. 0%)。7.3.1.2德光片标定在校准用分光光度计上制出滤光片在200~ 700nm范围内的吸光度谱图。确定各挣征波长:7.3.1.3试验步翼和计算在光路中加入标定过的德光片，在特征波长= 2nm岂围内单方向改变波长设置，在记录仪上记录其洞应，漠取最大响应值所对它的波长。重夏3次，在各特征波长处取3次的算术平均值，该值与特征波长的算术整为各特正波长的准确度。取其中的最大售作为检测器的波长准确度注:光路中不能加入逮电片的定型产品，可参照有关标准。7.3.2吸光度校准检测器波长置254nm.其它同7.2.1.7.3.3基线漂移7.3.3.1试验条件检测器波长:240nm.流量:0.5ml / min:流动相:甲醇:温度:室温t1T。7.3.3.2试验步骤在输液系统和检测器样品池进口之间连接一根不锈钢管(内径0. 4~0.6mm.长200~ 300mm).在检测器吸光度校准合格条件下，待达到检测器启动时间旨，连续运行lh.然后变动电源电压从220V到242V和198V,各试验0. 5h,检验其基线漂移。7.3.4基线噪声7.3.4.1试验条件色谱柱:反相柱[C18, 50μ];流量: 1ml/ min;检改器波长.流动相温度同73 3 173.4.2试验步骤经酒获姑地先迪比雨埃的测辑详丑铀进口左龄幽华竭业廊坊黼凸奴笑性下些法 副检制北a动时J9/ T 5857- -93间后，连续运行05h,任敢其中10min噪声,然后变动电源电压从220V到242V和198V,各试验0. 5 h,检验其基线噪声,7.3.5 启动时间7.3.5.1试验条件同7.3.3.17.3.5.2试验步骤在险测器吸光度校准合格杀件下，用时钟读出检测器从启动至达到基线漂移指标时所经历的时间。7.3.6线性范围检测器波长置254nm,其它同7.2.4。7.↓荧光检测器74.1最小检测浓度74.11溶液甲溶液:0.05mol/ I疏酸的二次燕馏水溶液:乙海液:1x10^"g/ ml硫酸重宁的甲溶液。7.4 1.2试验茶件激发波长:360nm或365nm;发射波长: 460nm; .7.4.1.3试验步豫将甲、乙溶液交普充入检测器样品池，在记录仅上得到以甲溶液为基线的乙溶液的响应值。重复3次取算术平均值。74-14计算Ca = 2Ns .C/ ......................1.式中:C..-一检测器最小检测浓度，g / ml;Ns一实测 短期矚声,mV;C-- -乙溶液浓度,g/ ml:，H一-乙溶液在度对甲溶液的响应值.mV;7.4.2稳定性7↑21试验条件发时波长:460nm,流量:1ml / min.流动相:甲醇:色谱性:反相栏[C18.5a0μ];温度:室温:1C,7.4.2.2 试验步骤.输液系统接色谱柱再接检测器样品池。在枪测器最小检测浓度合格条件下，待达到检测器启动时间后，连续运行1h,然后变动电源电压从220V到242V和198V.各试验0. 5 h.检验其基线漂移和噪声。7.4.3启动时间7.43.1 试验条件同7.4.2.17.4.3.2试验步骤在检测器最小检测浓度合格条件下，用时钟读出检测器从启动至达到基线谍移指标时所经历的时间。7↓4线性范團74↓↓溶液甲溶液:0 05mol /1硫酸的二次蒸馏水溶液:B T 6857-93乙海重:汽般奎宁和甲溶液的混合液.硫酸奎宁的旅变分别为:1x10*.1x10*.1x10".1x10~g/ ml。7.4.4.2试验步骤以甲溶液为基线，乙溶液按浓度从低到高依次与甲溶液交替充入检测器样品池，在记录仅上得到不司乙溶液的响应值.每种乙溶液重复3次取算术平均值。7.4.4.3计算根据实测短期唚声按0)式计算检测器最小检测浓度Cmin.在对數坐标紙上，作乙溶液的响应与浓度的关系曲线，按ZB N52001中3.5.3. 2条，职出保持线性响应所允许的乙溶液的最大浓度Ch. (h/Cmin即为检测器的线性范围。7.5示差折光检测器7.5.1灵敏度校准7.5.1.1溶液甲溶液:脱气蒸馏水:乙溶液:0.442%6(重量百分比)丙三群的甲溶液。7.5.12试验步理将甲溶液充人参比池:将甲，乙溶液交替气人检测器样品泡。在记录仅上得到以甲溶液为基线的乙溶液的响应值，用RI单位表示，重复3次取算术平均值。7.5.2稳定性7.5.21试验条件检测器折光指数范围:1.30-1.45;流量:Imi / min;流动相:甲醇:色谱柱:反相柱[(C18.51 l0)y]:昌变:室温二1t :7.522试验步障将样品池和参比池串接后接入输液系统，在检测器灵敏度合格条件下。恃达到检测器启动时间后.连续运行th,然后变动电源电压从220V到242V和198V.各试验0.5h.检验其基线漂移和唤声:注:检测器样品池出口不能接反压器，7.5.3启动时间7.5.3.1试验条件間7.5.2.1.7.5.3.2试验步瞿在检测器灵敏复校准合格条件F.用时钟读出检洲器从启动至达到基线漂移指标时所经历的时阁8仪器的运输、运输贮存试验按ZB Y002的要求进行，其中高温+ 55C;低温- 40t ;跌落高度250mm,附加说明:本标准由机械工业部北京分析仪器研究所提出并归口。本际准由北京分析仪器厂负责起草:本标准主要起草人吴车。