芍药苷的水解动力学研究

LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL. 21 NO. 3时珍国医国药2010年第21卷第3期芍药苷的水解动力学研究刘倩,刘永刚,李继安°,喇万英1.华北煤炭医学院河北唐山063000;2.北京中医药大学中药学院,北京100102)摘要:目的考察芍药苷在不同pH条件下的水解情况。方法 Diamonsil-C1色谱柱(250mmx4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液(15:85);检测波长为230m;进样量为10μ;柱温为室温,流速为1.0ml·min'。结果芍药菩对照品在0.0215-0.215范围内,进样量与峰面积间呈良好的线性关系,r=0.99,并得到不同pH条件下的水解动力方程。结论芍药苷的水解符合一级动力学模型。在不同pH条件下,芍药苷的水解速度不同。关键词:芍药苷;水解动力学;高效液相色谱中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:10080805(2010)03054301Study on Hydrolysis Kinetics of Paeoniflorinian, LIU Yong-gang, LI Ji-an, LA Wan-ying(1. North China Coal Medical University, Tangshan 063000, China; 2. College of Traditional Chinese Pharma-cology, Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100102, China)Abstract: Objective To investigate the hydrolysis kinetics of Paeoniflorin in different pH values. Methods Diamonsil-Cus column(250mm x 4.6mm, Sum)was used with the use of the acetonitriler-O. 1% formic acid(15: 85)as the mobile phase, theflow rate was 1. 0 ml min" and the detection wavelength was set at 230 nm. Results Paeoniflorin was well separated, the linearrange of paeoniflorin was 0. 021 5-0. 215 ug(r=0.999 9). Hydrolysis kinetics equations in different ph values was obtainedConclusion The degradation follows pseudofirst-order kinetics. Hydrolysis rate is different in various pH values.Key words: Paeoniflorin; Hydrolysis Kinetics; HPLC白芍为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根,有20.0m,置100ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取平肝止痛养血调经,敛阴止汗的功能。其主要成分芍药苷上述供试品溶液各10山分别注入液相色谱仪记录色谱图,得( Paeoniflorin),具有免疫调节抑制肿瘤舒张平滑肌细胞促进回归方程为Y=297478X+6.892,r=0.9999。结果表明,芍药造血细胞增殖等方面的作用2,而且能明显降低链脲霉素诱发苷在0.0215-0.215g范围内呈良好的线性关系。芍药苷标准的糖尿病小鼠的血糖。对芍药苷的药理作用及其化学性质已品HPLC图谱见图1。有较多研究但芍药苷的水解动力学和不同pH下,其水解动力学的变化未见报道。本实验对芍药苷的水解动力学及不同pH值对水解的影响进行了研究,为含有芍药苷的中药及复方的合理提取方法的选择提供依据。1仪器与试剂仪器岛津20A系统,含在线真空脱气机、低压四元梯度泵自动进样器柱温箱、二极管阵列检测器、 DIsolution色谱工作站。芍药苷(中国药品生物制品检定所110753-200212)。乙腈(美国 Fisher公司),甲酸(分析纯),水为二蒸水,醋酸盐、磷酸盐缓图1芍药苷标准品HPLC图谱冲溶液,临用现配25精密度分别取芍药苷样品液10ml6份,按照实验方法测2方法与结果定峰面积。其RSD为0.28%。2.1液相色谱条件色谱柱为 Diamonsil-C1柱(250mm×4.62.6穗定性在常温下取芍药苷样品液在不同时间点(1,2,4,6mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液(15:85);流速8h)取样,测定峰面积其RSD为0%%。为1ml·min“,检测波长230mm2.7不同pH下芍药苷的水解动力学方程求算称取一定量的2.2标准品溶液的制备精密称取一定量的芍药苷,用甲醇配置芍药苷4份,按“23”项下方法水解,于0.5,1,2,4,6,8h取样,测成每毫升含0.1mg的溶液,即得定芍药苷的峰面积结果发现不同pH下,ln(AUSO/AUS)对t呈2.3供试品溶液的制备精密称取对照品,少量甲醇溶解后分别线性关系,相关系数均大于095,可以推测芍药苷的水解符合准加人pH3.0,50,7.0,9.0的缓冲溶液至刻度恒温加热回流,并一级动力学模型对不同p下的芍药苷的水解动力学方程进行在不同的时间点(0.5,1,2,4,6,8h)取样,0.45μm的滤膜过滤,求算。结果见表1。芍药苷水解的HPC图谱见图2。24线性关系的考察精密量取对照品溶液2.0,4.0,8.0,10.0,收稿日期:20090420;修订日期:2000802基金项目:科技部国际科技合作项目(No.2008DFA3105作者简介:刘倩(1978-),女(汉族),吉林桦甸人,现任华北煤炭医学院中国煤化工讲师,博士学位,主要从事中药化学研究工作CNMHG通讯作者简介:李继安(1962-),男(汉族),河北廊坊人,现任华北煤炭医学院教授,博士学位,主要从事中西医结合临床工作图2芍药苷水解HPLC图请543时珍国医国药2010年第21卷第3期LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL 21 NO. 3表1芍药苷在不同pH下的水解动力学方程外一个方面证明了炮制可改变中药的性质InAUSo/AUS=0. 082t参考文献InAUSo/AUS =0.01831[1]国家药典委员会中国药典,I部[S].北京:化学工业出版社InAUS/AUS =0.0192005:68[2]胡南许惠玉陈志伟等.芍药苷的药理学研究进展[冂齐齐3讨论哈尔医学院学报,2007,28(9):lo93不同pH值对芍药苷水解的影响,在实验过程中,设置4[3]HsuL,Licw, Cheng JT. Antihyperglycemic effects of paeoniflorin个不同的pH(3,5,7,9),结果发现,芍药苷水解在酸性条件下水解更快,该结果对于含有芍药苷的中药及复方的提取有ctifora[ J]. Planta Med, 1997, 63(4): 323定的指导意义。[4]时维静储明明,谭志静,不问炮制方法对白芍中芍药苷含氳的影该实验结果与白芍炮制的相关试验结果相吻合,本实验从另响[刀]中国中医药信息杂志,2008,15(12):49纤维素酶在提取长春花碱中的应用何际婵,董志超,王建荣,晏小霞中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室,海南儋州571737)摘要:目的研究纤维素酶在提取长春花生物碱中的应用。方法采用酸水浸提法和酶浸提法提取长春花中的长春碱、长春质碱、文多林,高效液相色谱(HPLC)法测定其含量。结果酸水浸提法和酶浸提法提取的长春碱、长春质碱、文多林含量分别为0.0158和0.0052mg/ml:0.0456和0.0204mg/ml;0.0898和0.0421mg/ml。结论在单位时间内酶提法可显著提高长春碱、长春质碱、文多林的收率,可考虑将酶解法用于工业上长春花生物碱的提取中。关键词:长春花;长春碱;长春质碱;文多灵;纤维素酶中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:10080805(2010)03054402Extraction of Alkaloid from Catharanthus roseus by Enzymatic MethoHE Ji- chan, DONG Zhi-chao, WANG Jian-rong, YAN Xiao-xiaGermplasm Research Institute of Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agri-cultural Sciences, Key Laboratory of Tropical Crops Germplasm Utilization, Ministry of Agriculture P. R. of China, danzhou, Hainan 571737)Abstract: Objective To study the effect of cellulose enzyme on extraction of alkaloid from Catharanthus roseus. Methods HPLOmethod was used to determine the contents of vinblastine, catharanthine and vindoline from C. roseus. Results Compared with thetraditional acidic water extraction, the enzymatic method extraction yield of vinblastine, catharanthine and vindoline was increaserespectively. Conclusion The yield of vinblastine, catharanthine and vindoline from C. roseus can be effectivelIt is available to use enzyme in extraction alkaloid from C. roseus.Key words: Catharanthus roseus: Vinblastine; Catharanthine; Vindoline; Cellulose enzyme长春花 Catharanthus roseus( Linnaeus)G.Don是夹竹桃科纤维素酶的应用日益广泛,特别是在提取天然产物中的有效成( Apocynaceae)长春花属一种重要的药用植物。长春花植株中含分,纤维素酶可将植物细胞壁破坏并将纤维素软化,能使细胞内有极其复杂的萜类吲哚生物碱家族,其中的长春碱( Vinblastine)的有效物质充分释放出来较大幅度提高天然植物中有效成分的为目前应用最广泛的天然植物抗肿瘤药物之一,可用于治疗何杰提取率。本实验用纤维素酶浸提长春花粉末提取长春花生物金氏病恶性淋巴肿瘤等疾病2。而长春质碱( Catharanthine)、碱,显著提高了长春碱、长春质碱、文多林的提取率,缩短了提取文多林( Vindoline)是半合成另一癌症治疗一线药物长春瑞滨的时间,且用纤维索酶提取长春花生物碱尚无同类报道。原料引。目前工业上长春花生物碱的提取方法主要为酸水浸提1仪器与试药法该方法存在着有效成分提取率低耗时较长的问题。近年来,1.1仪器 Waters1525型高效液相色谐仪2487型紫外检测器;电子天平BT2202(日本岛津);PB20型精密pH计(上海雷磁仪收稿日期:20090428;修订日期:20008-21器厂)。基金项目:“中央級公益性科研院所基本科研业务费专项资金和“农业部1.2试药纤维素酶(天津奥凯实业有限公司);长春碱、长春质热带作物种质资源利用重点开发实验室开发基金”资助(No.碱、文多林(纯度≥98%),均为自制;长春花采于中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所南药种质圃:甲醇、乙腈为色谱作者简介:何际(196),女(汉族),广西玉林人现任中国热带农#纯氨水学院热带作物品种資源勳理研究员,硕士学位,主要从事南药化季成分的磷酸*公坏她也二吹燕馏水;所有试剂在使用前中国煤化工农业科学院热带作物品种资源研究所研沱贾,博士学位主要从事南药化1/2通讯作者简介:黄志超(196),男(汉族),澌江嵊县人,现任中国热番2CNMHGC1(4.6mm×250mm,学威分的研究与开发工作5μm)柱;流动相为380m水-二乙胺(986:14,用磷酸调pH