介孔SiO2固定化溶菌酶在柴油泄漏循环水系统中的缓蚀性能

石油学报(石油加工)2015年10月ACTA PETROLEI SINICA (PET ROLEU M PROCESSING SECTION )第31卷第5期文章编号: 1001-8719(2015 )05-1136-08介孔SiO2固定化溶菌酶在柴油泄漏循环水系统中的缓蚀性能仲慧赞，刘芳，吕玉翠陆津津，杨伟(中国石油大学化学工程学院，山东青岛266580 )摘要:采用溶胶凝胶法合成了介孔SiO2微球,并采用TEM、BET及FT-IR谱对其进行表征。以介孔SiOz微球为载体，利用物理吸附法制备固定化溶菌酶，优化了制备条件,并将在优化条件下制备的固定化溶菌酶投加于柴油泄漏循环水中，考察其对碳钢的缓蚀效果。结果表明，制备固定化溶菌酶的最佳条件为溶菌酶质量浓度0.8 g/L、固定化时间10h、pH值6.5、缓冲溶液摩尔浓度50 mmol/L。在柴油质量浓度为80 mg/L的冷却循环水中，固定化溶菌酶对碳钢的缓蚀率最高可达78. 21%，且稳定性比游离溶菌酶有显著提高。关键词:介孔SiO2微球;固定化;溶菌酶;柴油泄漏;循环冷却水;缓蚀中图分类号: TQ085; Q71文献标识码: Adoi: 10. 3969/j- issn. 1001-8719. 2015. 05. 018Corrosion Inhibition of Lysozyme Immobilized on Mesoporous SiOz inCirculating Cooling Water System With Diesel LeakageZHONG Huiyun, LIU Fang, LU Yucui, LU Jinjin, YANG Wei(College of Chemical Engineering, China Universily of Petroleum ，Qing dao 266580, China)Abstract: M esoporous SiO2 microspheres were synthesized by usingsol-gel method, andcharacterized by TEM，BET and FT-IR. Lysozyme w as immobilized on mesoporous SiOz throughphy sical adsorption and the conditions of immobilization w ere optimized . The immobilized ly sozy meprepared under optimal conditions was used as corrosion inhibitor in cooling circulating water withdiesel leakage . The results show ed that the optimal preparation conditions for immobilized ly sozy mew ere lysozy me mass concentration of 0. 8 g/L , immobilization timeof 10 h, thepH value of 6. 5 andthe buffer molar concentration of 50 mmol/L. In the cooling circulating water containing diesel of80 mg/L and with immobilized lysozy me as corrosion inhibitor , the highest corrosion inhibition ratefor carbon steel was 78. 21%，and the stability of immobilized lysozyme had increased obviouslycompared to free ly sozyme .Key words : mesoporous SiO2 microspheres ; immobilization; lysozy me; diesel leakage; circulatingcooling water ; corrosion inhibition在我国石油炼化企业中，由于密封技术落后、普遍存在着油品泄漏问题”。油品附着于管壁上，换热器质量差、管线老化、操作不当等原因，形 成中国煤化工严重的点蚀。油品泄YHCNMHG.收稿日期: 2014-06-06基金项目:国家自然科学基金项目(21077133)和中国石油大学研究生创新工程项目(CX2013039)资助第一作者:仲慧资，女，硕士研究生，从事水污染控制与资源化利用方面的研究; E- mail: huiy un0102@ 126. com通讯联系人:刘芳，女，教授，从事高浓度有机废水的深度处理及回用技术方面的研究; E- mail : liufangfw@ 163. com第5期介孔SiO2固定化溶菌酶在柴油泄漏循环水系统中的缓蚀性能1137漏下,投加常规的缓蚀剂不能达到高效的缓蚀效2. 38 pug/g 和0.91 μg/g。果，因此，需要筛选适用于油品泄漏情况下的新.实验用循环水，取自青岛某炼化企业的循环冷型缓蚀剂。却水系统。溶菌酶(Lysozyme, EC 3.2. 1.17)是一种专门1.2介孔 SiO2微球的制备及表征作用于微生物细胞壁的水解酶523]，是一种有效的抗采用溶胶凝胶法制备介孔SiO2微球1-1212。菌剂，能引起细菌裂解(5]，又称胞壁质酶或N-乙25°C下，1.5 g CTAB溶于300 mL蒸馏水中，磁力酰胞壁质聚糖水解酶。根据来源不同可将溶菌酶分搅拌至澄清，加入75 mL无水乙醇搅拌10 min;逐为动物源溶菌酶、植物源溶菌酶和微生物源溶菌酶滴滴加13mL氨水，搅拌15min;逐滴加入5mL3类"。Fleming 等在1922 年发现了溶菌酶°]，TEOS,持续搅拌2h。将得到的乳白色浑浊液陈1965年，英国的菲利普弄清了溶菌酶完全的立体结化，过夜;抽滤，先水洗后乙醇洗，用AgNO3检构”。谯康全等8研究了硫酸介质中溶菌酶对Q235验滤液直至没有沉淀为止。将得到的白色沉淀于钢的缓蚀作用，结果表明，在酸性条件下溶菌酶对90°C干燥、研磨、550°C 下焙烧5 h，即得到介孔Q235钢有显著的缓蚀作用。然而，游离的溶菌酶SiO2微球样品。稳定性较差，易受环境条件影响而失活，且难以实分别采用日本日立公司JEM2100型透射电子显现重复利用。因此，对溶菌酶进行固定化是实现其微镜、美国ASAP2020 型比表面测试仪、美国.广泛利用的有效途径。Thermo Nicolet 公司N EXUS型傅里叶变换红外光介孔材料不仅具有较大的孔径，同时还具有高谱仪表征所制备的介孔SiO2微球样品。比表面积和大吸附容量，与传统的微孔材料相比，1.3 溶菌酶的固定化更有利于分子的快速扩散，使之能为大分子(如石油采用物理吸附法固定化溶菌酶。将- -定量的介化工中重油有机分子、生物酶分子等)的反应、酶的孔Si02微球样品加至含有一定浓度溶菌酶的固定化提供适宜的空间，在催化、吸附、光、电、Naz HPO4-KH2P0+缓冲溶液中，30°C下振荡一定磁等许多领域有着广泛的应用价值9-101。时间;抽滤，洗去多余的溶菌酶，得到白色沉淀;笔者以十六烷基三甲基溴化铵为模板剂，采用在30C-下烘干白色沉淀，即得到固定化溶菌酶溶胶凝胶法合成介孔SiO2微球;以此为载体，制样品。备固定化溶菌酶，优化了固定化条件，并初步考察1.4溶菌 酶的相对活性测定其在柴油泄漏循环水中对碳钢的缓蚀效果，为溶菌溶菌酶可以内切的方式作用于壳聚糖，断开酶的工业化利用提供理论和技术支持。壳聚糖上的p1,4-糖苷键，因此，通过测定溶液中还原糖的浓度，就可间接求出溶菌酶的活1实验部分力13141。取6 mLpH值为4.5、质量浓度为1.1 原料和试剂1.2 g/L的羧甲基壳聚糖溶液与0.1 g固定化溶菌溶菌酶，生化试剂，M= 14400，酶活力大于酶在55C反应60 min后，抽滤;取5 mL上清液于10000 U/mg，山东苏柯汉生物工程股份有限公司产具塞试管中，加入1 mL碱性铁氰化钾溶液，混合品;十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、正硅酸乙酯摇匀，在沸水中煮沸10 min;冷却，以试剂空白(TEOS)、羧甲基壳聚糖、铁氰化钾、无水乙醇、作参比，420 nm波长处测其吸光度A，用以计算磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等，均为分析纯，国药集固定化溶菌酶的相对活性，简称相对酶活(Relative团化学试剂有限公司产品。activity )。直馏柴油，购于江苏新海石化有限公司，20C在同组宜验中以I晶士吸光度(A际)的固定化密度为0. 8392 g/em’，属于轻质柴油。35°C 下黏度溶菌MH中国煤化工其余样品的相对酶活较小，为3.26mm2/s，因此当其泄漏到循环水中，为其. C NMH G百分數表示。经过曝气循环后，能够与水很好地混合，并有一部1.5 循环水水质分析方法分溶解于水。柴油中Zn和Fe的质量分数分别为循环水水质分析方法列于表1。1138石油学报(石油加工)第31卷表1循环冷却水水质分析方法Table 1 Water quality analysis method for cooling circulating waterWater quality parameterEx perimental met hod and standardsTurbidity/NTUPortable turbidity plan method (LP2000-11)pH valuepH indicator electrodep(Ca2+ )/(mg. L 1)EDTA titration (GB/T 15452-95 )pρ(Mg2+ )/(mg. L-1)EDTA titration (GB/T 15452-95 ) .p(CI~ >/(mg. L-1)Nitrate radical titration method (GB/T 15453-95)p(SOf )/(mg.L 1)Gravimetric analysis (GB/T 15893. 3-1995 )ρ(Total iron)/(mg. L-1)Spectrophotometrie o phenanthrolineTotal hardness in CaC03/(mg. L 1)Total alkalinity in CaC03/(mg. L- 1 )Indicator method (GB/T 15451-95 )1.6 生物酶缓蚀性能测定式(1)、(2)中， m为试片质量损失，g; m为空白实.参考GB/T18175-2000旋转挂片法测定生物酶验试片的质量损失平均值，g; s为试片的表面积，的缓蚀性能。选用A3碳钢挂片(50 mmX25 mmXcm2 ; ρ为试片的密度，g/cm^; l为实验时间，h;2mm)作为腐蚀对象，利用RCC-I型旋转挂片腐蚀8760为与1 a相当的小时数，h/a; 10为与1 cm相试验仪进行腐蚀实验。以含柴油质量浓度为当的毫米数，mm/cm; Xo和Xi分别为空白实验和80mg/L的循环水模拟循环水系统介质泄漏。在该加剂实验中试片的腐蚀速率，mm/a。系统中加人不同质量的固定化溶菌酶，置于哈尔滨2结果与讨论东联电子技术开发有限公司立体恒温振荡器中，在2.1所制备的介孔SiOx的表征结果温度40°C、转速80 r/min的条件下运转72 h。对挂片进行清洗处理，称重，计算其质量损失，同时进2.1.1 形貌行空白实验。分别以式(1)、(2 )计算碳钢的腐蚀速图1为介孔SiO2 微球样品的TEM照片。从图1(a)可以看出，所制备的介孔SiOz是- -些形状率(XI )和固定化溶菌酶对碳钢的缓蚀率(X2 )。比较规则的圆形颗粒，颗粒粒径在150- 200 nm范8760X (m-mo )X10_ 87600X(m-mo )S.ρ°l围，大小不-一，分散性不太好，颗粒呈现堆积、掩(1)盖状态。图1(b)为一个完整颗粒的高分辨图片，可以清楚地观察到其具有介孔状结构，孔道呈发散的x2=X0=Xx 100%(2)Xo蠕虫状。a)b)中国煤化工100 nmYHCNMHG2omm图1介孔 SiO微球样品的TEM照片Fig 1 TEM photos of mesoporous SiO2 microspheres sample(a) and (b) are the TEM photos at different magnification times.第5期介孔SiO2固定化溶菌酶在柴油泄漏循环水系统中的缓蚀性能11392.1.2 BET 比表面性质附量随着p/po的增加不断增大，在0.2~0.3范围图2为介孔SiO2微球样品的N2吸附-脱附等温有一个快速的上升，这是由介孔里N2的毛细凝聚线和孔径分布。引起的。脱附等温线与吸附等温线一致， 说明介孔根据BDDT (Brunauer deming deming teller )分SiO2微球具有很好的介孔特性。BET测试得到介孔类，图2(a)显示的N2吸附-脱附等温线的起始段斜SiO2微球的比表面积为1088.9 m2 /g率变化由大到小，是典型的IV型等温线，属于多从图2(b)看出，介孔SiOz微球的孔径分布在孔物质发生多分子层吸附时特有的等温线15。在一2~ ~3 nm之间，平均孔径为2. 55 nm;孔径分布曲线定范围的p/p下出现滞后环，是非气孔型固体表呈单峰状，并且半峰宽较窄，说明样品的孔径均匀，面的气体物理吸附引起;由于多层吸附的存在,吸其结构为介孔状。600.4r(a(b).2 t20 500.0 t4000 0.8-300.6-- Desorption0.4-。Adsorption2001000.20.6.0p/p。D./nm图2介孔 SiO2微球样品的N2吸附-脱附等温线和孔径分布Fig 2 N2 adsorption desorption isotherms and pore size distribution of mesoporous SiO2 microspheres(a) N2 adsorption- desorption isotherms; (b) Pore size distribution2.1.3 FT-IR 分析图3为介孔SiO2微球的FT-IR谱。从图3可以制备的样品为SiO2。看出，464 cm-' 附近有一窄而尖的峰，归属于2.2介孔 SiO.固定化溶菌酶的制备条件优化Si- 0- Si的伸缩振动，800 cm 1 附近的吸收峰归属2.2. 1溶菌酶给酶 量的优化于Si-0-Si的弯曲振动，933cm1附近的吸收峰取等量介孔SiO2，投加到不同质量浓度溶菌酶归属于Si- 0的伸缩振动; 1087 cm^ I 附近有- -强 且的NaHPO4-KHzPO. 缓冲溶液(50 mmol/L,尖锐的峰，归属于硅氧烷中Si- 0- Si 的不对称振pH值7.0)中，其他条件相同，进行溶菌酶的固定动; 1639 cm~附近的吸收峰归属于Si02表面吸水化，得到的固定化溶菌酶的相对酶活示于图4。后形成的氢键，3415 cm 1 附近的吸收峰归属于硅醇Si- 0H及表面吸附水的一0H 振动。由此证明，所g‘0te 800(0η影60& 50一中国煤化工YHCNMHG10121.4 7.6pLysuzylme)/(g:L)4000350030002500200015001000500 0图4溶菌酶质量浓度(ρ)对固定化溶菌酶相对酶活的影响Wave number 1 cmr'Fig 4 Effect of lysozyme mass concentration (ρ) on图3介孔 SiO2微球的FT-IR谱the relative activity of immobilized lysozymeFig. 3 FT-IR spectrum of mesoporous SiO2 microspheresm(Si02)=0.1 g; pH=7.0; c(Buffer)= 50 mmol/L1140石油学报(石油加工)第31卷由图4看到，随着溶菌酶质量浓度的增加，固2.2.3 pH 值的优化定化溶菌酶的相对酶活逐渐增大，当溶菌酶质量浓取等量介孔SiO2投加到溶菌酶质量浓度为度为0.8 g/L时，相对酶活达到最大;继续增加给0.8 g/L的Na HPO+- KH PO+缓冲溶液(50 mmol/L)酶量，相对酶活反而略有下降。陈建龙161利用空气中，室温振荡10h,考察固定化pH值对固定化酶玻纤滤材进亍溶菌酶固定化时也发现，随着给酶量增相对酶活的影响，结果示于图6。从图6可以看出，大，固定化酶活性先增大后减小。这是因为溶菌酶质介孔SiO2固定化溶菌酶的最佳pH值为6.5。pH量浓度增加，使固定在介孔SiO2上的酶量相应增加;值增大或减小都会使固定化溶菌酶的相对酶活降低。然而，随着载体负载酶量的增大，酶分子相互拥挤造105成的空间位阻也增大，使溶菌酶活性中心互相遮盖,100底物与产物也不能及时扩散，因此，超过- -定溶菌酶)5 t质量浓度后，固定化酶的活性反而下降。固定化溶菌)0 t酶最佳的溶菌酶质量浓度为0.8 g/L。2.2.2固定 化时间的优化80 t取等量介孔SiOz,投加到溶菌酶质量浓度为75 t70 t0.8 g/L的Na HPO-KH2 PO:缓冲溶液(50 mmol/L,pH值7.0)中，室温下考察固定化时间对固定化溶650 55 60.57.7.58.Immobilization pH value菌酶相对酶活的影响，结果示于图5。图6固定化 pH值对固定化酶相对酶活的影响Fig. 6 Effect of immobilization pH value on10the relative activity of immobilized lysozymege 95m(Si02)=0.1 g; p(Lysozyme)=0.8 g/L;e 90r=10 h; c(Buffer )= 50 mmol/L85-g 80-刘慧等171的研究表明，溶菌酶的最适pH值在.6~6.5范围，在5~7范围内酶活性相对比较稳定，55 t而大于7时酶活性急剧下降，当pH值为8时,相05012对酶活下降至10%左右。本实验结果与其研究大致Immobilized time/ h相符。然而pH值低于6.5时，固定化溶菌酶的相图5固定化时 间对固定化溶菌酶相对酶活的影响对酶活下降较大，pH值为5.4时，相对酶活下降Fig. 5 Effect of immobilized time on the relative activity of至71.74%。这是因为酸性条件下，溶菌酶活性中.immobilized lysozyme心氨基酸的解离状态可能不利于酶活性的充分发挥;m(Si02)=0.1 g; pH=7.0; dLysozyme)=0.8 g/L;c(Buffer )= 50 mmol/L .同时，溶菌酶的等电点为pH值10.8左右，在酸.性条件下表面带正电荷，使酶分子与介孔SiO2表面从图5可以看出，随着固定化时间的延长，固的硅羟基的相互作用减弱。定化酶的相对酶活先增大后减小;当吸附时间为2. 2. 4缓冲液浓度的优化10 h时，相对酶活达到最大。固定化时间小于10 h取等量介孔Si02,投加到溶菌酶质量浓度为时，随着时间的延长，溶菌酶的吸附量逐渐增大，0.8 g/L的Na HPO4-KHzPO+ 缓冲溶液(pH值因此相对酶活逐渐增大;当固定化时间为10 h时,6.5)中。在室温振荡10h条件下，考察缓冲液浓度反应达到吸附平衡，相对酶活达到最大;固定化时对固MYH中国煤化工结果示于图7。间超过10h后，虽然溶菌酶固定量增大，但与给酶. CN M H G摩尔浓度为50 mmol/L量过大效果类似，溶菌酶分子相互拥堵，使溶菌酶时，固定化溶菌酶的相对酶活最高，当浓度高于活性中心互相遮盖，因此，超过一-定时间后，固定50 mmol/L时，固定化溶菌酶的相对酶活下降明显。化酶的相对酶活反而下降。制备固定化溶菌酶最佳这是因为当缓冲液摩尔浓度为25 mmol/L时，缓冲效的固定化时间为10 h。果较弱,不能保证溶菌酶固定化时的稳定环境,因此第5期介孔SiO2固定化溶菌酶在柴油泄漏循环水系统中的缓蚀性能1141105固定化效果较摩尔浓度为50 mmol/L时差;而当缓冲100液摩尔浓度高于50 mmol/L时，由于浓度过高，蛋白亚基之间的相互作可能会遭到破坏，引起亚基解离，90 t同时，会影响酶分子与介孔SiOz表面的吸附作用力,85 "从而影响酶的固定化效果。另外，当浓度过高时，可80|能导致电荷屏蔽作用，使底物分子不能接近酶的活性5t中心，从而降低了固定化溶菌酶的催化效率，使相对70 t酶活降低。因此优选缓冲液摩尔浓度为50 mmol/L。65204060801001201401601802002.3 固定化溶菌酶的缓蚀性能c(Buffer)/ (mmol:L)图7缓 冲液摩尔浓度对固定化酶相对酶活的影响2.3. 1实验用循环水水质fig. 7 Influence of buffer molar concentration on一般情况下，循环水是中性和弱碱性的，the relative activity of immobilized lysozymepH值控制在7~9.5之间。实验循环水的水质分析m(Si02)=0.1 g; e(Lysozyme)=0.8g/L; =10 h;pH=6.5结果列于表2。表2实验用循环水水质Table 2 The quality of circulating water for experimentTurbidity,plon)/(mg. L-1 )Total hardness' )Total alkalinity'/pH value .NTUCa2+Mg2 'CI-S0?Total iron(mg. L-1)(mg●L-1)8.915.0281.6837. 60303.25260. 32392. 71350. 211) Based on CaCO32.3.2柴油投加量的确定继续增加，对异养菌产生了毒性，从而使细菌总数向2 L烧杯中加入1 L循环水，并向其中投加降低，减缓了碳钢的腐蚀速率。不同量的柴油，按1.6节中所述方法进行腐蚀实验，循环冷却水中的油一-般以分散态、乳化态或溶测定碳钢的腐蚀速率，结果示于图8。解态的形式存在，当油含量较高时可通过物理或化学方法破乳，最后的浓度往往较低。此外，由图8.0.25可知，碳钢在柴油质量浓度为80 mg/L的循环水中0.20- λ的腐蚀速率最高，故选择80 mg/L作为模拟柴油泄漏腐蚀实验的柴油质量浓度。0.152.3.3固定化溶菌酶的缓蚀效果三0.10向2 L烧杯中加入1 L循环水，向其中投加少0.05许柴油，使柴油的质量浓度为80 mg/L，并分别加人不同量的固定化溶菌酶进行腐蚀实验，测定碳钢160320480 640 800 96011201280的腐蚀速率和固定化溶菌酶对碳钢的缓蚀率，结果p(Diesel)/ (mgL)示于图9。图8含不同质 量浓度柴油循环水中碳钢的腐蚀速率(Xi )从图9可以看出，随着固定化溶菌酶质量浓度Fig. 8 The corrosion rate (X ) of carbon steel in的增加碳钢的腐蚀速离下降明显，相应的缓蚀率circulating water with different mass concentrations of diesel从图8可以看出，随着循环水中柴油质量浓度逐渐MYH中国煤化工5g/L时，缓蚀率达.. CNMH G质量浓度至0.7 g/L的不断增加，碳钢的腐蚀速率呈现先上升后下降的时，缓蚀率为78. 21%。趋势。这是因为低浓度的柴油能为异养菌的生长提卢宪辉等203研究表明，使用游离溶菌酶进行腐供碳源等营养条件，使细菌总数高于未投加柴油蚀实验时，虽缓蚀效果明显,但随着溶菌酶质量浓时[18]，创造产生点蚀的环境”;随着柴油浓度的度增加， 呈现先增大后减小的波动变化，即游离溶1142石油学报(石油加工)第31卷菌酶性质不稳定。这主要是由于循环冷却水的pH2012，28 (5 ): 883-888. (LIU Fang， YANG Fei,值一-般为7~9.5，在此范围内，游离溶菌酶的活性WANG Feiyang， et al. Effects of oil leakage ir稳定性较差[”'。实验表明，固定化溶菌酶的稳定性circulating cooling w ater system on biofouling grow thcharacteristics [ J ]. Acta Petrolei Sinica ( Petroleum较游离溶菌酶有了显著提高。Processing Section), 2012, 28(5): 883-888.) .0.2280[2]尹金风，史锋,王小元.蛋清溶菌酶与渗透剂对大肠杆0.2070菌的协同抑菌作用[J].食品科学, 2011, 32(11); 176-0.18180. (YIN Jinfeng， SHI Feng， WANG Xiaoyuan .| 600.14--●- X。。Sy nergistic antibacterial effect of lysozyme with cell0.120permeabilizers on escherichia coli [J ]. Food Science ,弋0.10-402011, 32(11): 176-180.)0.08[3] CALLEWAERT L, MICHIELSC W . Lysozymes in the300.06animal kingdom[J]. J Biosci , 2010, 35(1): 127-160.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.20[4]林翠花，肖素荣，孟庆国.溶菌酶结构特点及其应用[J].p(Immobilized lysozyme)/(g:L")潍坊学院学报，2005, 5(2): 108-110. (LIN Cuihua,图9含柴油循环水添加不同量固定化溶菌酶时XIAO Surong， MENG Qingguo. The structure ，碳钢的腐蚀速率(X )和缓蚀率(X2 )characteristics of lysozyme and its application [J]. Jourmal ofFig. 9 The corrosion rate (X ) of carbon steel andW eifang University , 2005, 5(2): 108-110. )corrosion inhibition rate (X2 ) in circulating water containing[5] BLAKE C, KOENIG D, MAIR G, et al. Structure ofdiesel with different amounts of lysozyme addedhen egg-w hite lysozyme. A three- dimensional FourierpDiesel )= 80 mg/Lsynthesis at 2 Angstrom resolution[J]. Nature, 1965 ,206(4986): 757-761.然而，游离溶菌酶对碳钢的缓蚀率最高可达[6] LENINGER A, NELSON D，COX M. Principles of83%，略高于固定化溶菌酶。这是因为游离溶菌酶Biochemistry [M ].2nd Edition. New York: Worth的酶分子直接分散在循环水中，而固定化溶菌酶的Publishers, 1993: 180-312 .酶分子在介孔SiO2表面吸附，降低了与循环水中细[7]肖怀秋，林亲录，李玉珍，等.溶菌酶及其在食品工业中的应用[J].中国食物与营养，2005, (2): 32-34.菌的接触能力，从而影响了其缓蚀效果。(XIAO Huaiqiu， LIN Qinlu， LI Yuzhen， et al .3结论Application of lysozyme in the food industry [J]. Foodand Nutrition in China .2005, (2): 32-34. )采用溶胶-凝胶法合成了介孔SiOz微球，其粒[8]谯康全，吴永强,刘新露。溶菌酶在硫酸介质中对径在150~ ~200 nm范围，表面平均孔径为2. 55 nm,Q235钢缓蚀行为的研究[J].腐蚀与防护，2012, 33比表面积为1088.9 m2 /g。利用物理吸附法固定化(6 ): 478-481. (QIAO Kangquan， WU Yongqiang，溶菌酶,确定固定化的最佳条件为溶菌酶质量浓度LIU Xinlu . Corrosion inhibition behav ior of lysozyme on0.8 g/L、固定化时间10h、pH值6.5、缓冲溶液Q235 steel in H2SO4 solution [ J ]. Corrosion &摩尔浓度50mmol/L。在模拟柴油泄漏循环冷却水Protection, 2012, 33(6): 478-481.)的腐蚀实验中，当柴油投加质量浓度为80 mg/L[9]LEEC，LIN T，MOU C. Mesoporous materials forencapsulating enzymes[J]. Nano Today，2009, 4(2 );时，固定化溶菌酶对碳钢的缓蚀率最高可达165-179.78. 21%，且稳定性较游离溶菌酶有显著提高;然[10]吕勇军，李佩晋,郭杨龙，等.酶在有序介孔材料上的而，其最高缓蚀率较游离溶菌酶的最高缓蚀率中国煤化工18，20(7-8): 12-1179.(83%)低，表明固定化溶菌酶对细菌的亲和力较游MYHCNMHGGUO Yanglong，et al.离溶菌酶弱。Immobilization ot enzymes on mesoporous materials[J」.Progress in Chemistry , 2008，20(7-8): 1172-1179.)参考文献[11]杨冲.介孔二氧化硅的制备及银的负载性研究[D].南[1]刘芳，杨飞,王飞扬，等.油品泄漏对循环冷却水系统京:南京理工大学，2010.生物黏泥生长特性的影响[J].石油学报(石油加工)，[12] 方欣闪.介孔二氧化硅微球的制备[J].长春理工大学第5期介孔SiO2固定化溶菌酶在柴油泄漏循环水系统中的缓蚀性能1143学报(自然科学版)，2010， 33(2): 90-93. (FANG[17]刘慧，王风山，楚杰.蛋清溶菌酶部分酶学性质及酶活Xinshan. Preparation of mesoporous silica microsphere性的影响因素研究[J].中国生化药物杂志，2008, 29[J]. 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