聚乙二醇修饰重组人干扰素ω的过程优化

采用分子量20000直链单甲氧基PEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-SS)对毕赤酵母表达的重组人干扰素ω(rhIFNω)进行氨基化学修饰,以期获得抗原性降低及稳定性增加的单链PEG修饰产物(PEG-rhIFNω).建立了PEG修饰rhIFNω的反应体系,考察了修饰反应各因素对单修饰产物得率的影响,优化修饰工艺条件为:反应体系起始pH值8.5,rhIFNω/PEG摩尔比1∶7,rhIFNω浓度0.75 mg· ml-1,磷酸盐缓冲液浓度50mmol· L-1,于25℃振荡反应4h,用30％冰醋酸终止反应.在优化条件下,单链PEG-rhIFNω含量和修饰率分别达到0.25 mg·ml-1和34.63％.纯化后的单链PEG rhIFNω具有典型PEG修饰蛋白的特性,体外抗病毒活性保留了天然rhIFNω抗病毒活性的15％.