瘤胃甲烷生成菌PCR反应条件的优化

[目的] 优化适合于瘤胃甲烷生成菌的PCR反应体系.[方法] 以1.5周岁健康的藏系绵羯羊瘤胃内容物总DNA为模板,用特异性引物对甲烷生成菌16S rDNA保守序列进行PCR扩增,并通过改变PCR反应体系中的各参数,优化其PCR反应体系中的相关参数.[结果] PCR最优程序为:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性45 s,51 ℃退火45 s,72 ℃延伸90 s,35个循环;72 ℃后延伸7 min.优化后的PCR反应体系为:5.00 μl 缓冲液,4.00 μl d-NTP,2.00 μl引物(前引物和后引物各1.00 μl),4.00 μl MgCl2,0.25 μl Taq DNA 聚合酶和1.00 μl 1∶ 100倍稀释的DNA模板,然后加水补足25.00 μl.[结论] 该研究为瘤胃甲烷生成菌功能的研究奠定了基础.