天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰

目的 对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析.方法 选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物.通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰.通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性.结果 突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的 蛋白相对分子质量约为30 000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000.初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性.结论 成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径.