聚乙二醇6 000对Tween-80含量测定的影响

中国生物制品学杂志200年第13卷第期 hin I Biologicals2000yul.13No,1聚乙二醇6000对 Tween-80含量测定的影响沈琦刘大英(中国药品生物制品检定所,北京100050【摘要】目的了解聚乙二醇6000对测定Twe80含量的影响。方法将被检样品加95%乙醇沉淀蛋白后,上清加二氯甲烷再加铵钴硫氰酸盐溶液,用紫外分光光度计测Ax吸收峰。结果PC6000含量>00pgm时,干扰 Tween-80含量测定。结论一定浓度的PEC6000对测定Twen80含量有干扰。【关键词】聚乙二醇600(PEC6000吐温-80(Tw80)凝血酶原复合物(PCC)PEC6000为无毒的水溶性合成聚合体。是3.不含 Tween80的不同浓度PEG6000对检种性质温和的蛋白沉淀剂,已被广泛地用于人血浆测结果的干扰的蛋白分离,特别是凝血因子类蛋白的分离。我国对不同浓度的PEC6000溶液按方法处理,在目前有数家单位采用PEC6000结合其他分离蛋白620mm波长比色,5种浓度均能测出 Tween-80,但实的方法生产人凝血酶原复合物(PCC)。在生产工艺际不含Twen.80。PEC6000浓度在500m时影中采用SD病毒灭活方法。根据1995版的《中国生响更大,见表1。物制品规程》要求,在PCC的成品中应检测Twer不同浓度的PEG6000对检测结果的影响80和PEC60残留量。笔者在研究用显色法测定在已知Twen-80含量的标准液和含 Tween80rwcn80残留量2时,发现一定浓度的PEC6000对的PCC样品中加不同浓度的PEC600,计算回收Twe-80含量的测定有影响。率,结果表明PEG600<400yyml时不影响Twen材料与方法80的含量检测,见表2、表3。1.试剂0000A95%乙醇、氯化钠、二氯甲烷、硝酸钴、硫氰酸铵000均为AR级国产试剂;PEC6000进口分装,用水配成0.1%;Twen80进口分装,用水配成01%;凝血0.04酶原复合物,由R血制品公司和H生物工程有限公0.020司提供。0.000220,0300.0400.05000600.070002.方法a:0,1%PEG6000样品加入95%乙醇沉淀蛋白,离心,上清液在7000am-0.004A55℃水浴中吹去乙醇,加入二氯甲烷,最后加入铵钴硫氰酸盐溶液。用紫外分光光度计测Ax的吸收0.020结果0000220.0300.0400.05000600.0700,01.试剂处理前的光谱扫描b: Dichloromethane700.0nm-0.001A对0.1%PEC600、0.1%Twem-80和二氯甲烷0.1900.0803种溶液分别进行光谱扫描。在620mm处均无光吸0.060收峰,见图1(a、b、c)0.0402.3种溶液处理后的光谱扫描020对含 Tween.80的PC、10Og/ ml Tween-80标准220.0300.0400.0500.06000700.0溶液和500r/mlPE600溶液分别按方法进行处e: 0. 1%6lween-8O中国生物制品学杂志2000年第13卷第1期 Chin J Biologicals20,vol13.N,14770000.032A表3不同浓度的PEG600对含Twe80POC样品检测01000.080的影响0.060PEG-600ween-厂家批号回收率(%)0.040R 970618 onegin2300300.04000500.0600.0700.0A: Tween-80(100ug/ml)800290.100700.0nm0057A5PCC样品中Twem80与PEG4000残留量的关系0.000230.0300.0400.0500.0600.0700.0按《中国生物制品规程》方法对18批PCC样B: PGE-6000(50OHg/ml)品Twen-80和PEC600残留量检测结果进行追700.0mm0.028A踪。R公司生产的前6批PCC,PEG6000含量分布在192-368gm范围,后6批PEC6000含量均<0.060100g/m,Twen-80含量均10uyml,全部不合格。230.0300.0400.0500.0后3批 PCC PEG6000含量<100pg/m,Twen80含C:PCC(ugm,含wea80)量全部合格,见表4。图2含 Tween80的PC样品、Twe80标准溶液和PEG6000溶液按方法处理后的光谱表4PC样品中Twen80与PEG6000残留量的关系批号PEC6000pg/ml)Twee80(rgm)表1不同浓度PEC6000对检测结果的干扰R940l6PEG-6 000(ug/ml)10184997011520.83497061119624.097061849.0表2不同浓度的PC600对Tem-8标准液检测的影Fe80标准液浓度PDC6mTmn-80回收率( re/ml)浓度(pqym)(%)98091625.139.952.947.3H9801003197.56080.69801005200I17.3981001440076.99810015159.320098l0016中国生物制品学杂志200第13卷第1期 Chin j biradicals20,vol.13.No1生产工艺中去除Twen80,才能使最终产品 Tween80含量不超标我们的研究结果显示PEG60含量>50048(对华牛物工程有限公马力等几位同志和中关合资上海菜血ml于扰Twe.80含量测定。对近几年18批PCC制品有限公司干坚等同志对该工作的支持深致融意!)PEC6000含量检测结果的追踪,PEC6000含量呈参考文献明显的下降趋势,均<109m,对Twe:80含量检1中作人民共和国卫生部中倒生物制品规程(-部、195测影响不大。H公司生产的前3批 PCC Tween-80含2沈琦,陈继亭,刘大英.种凝血闪子制品中Twm8残留量测定