3-吲哚甲醇的抗肿瘤作用

华西药学杂志2009,23(1):04-047有较好的抑制生长作用,而对正常细胞人胚肺成纤具有较好的体外抗肿瘤活性,但粗提物的C∞值偏维细胞MRC-05的细胞毒作用较弱,只在高浓度时大。经过分离纯化得到白花丹醌,实验进一步研究(0.273gL)显示较强的抑制生长作用了白花丹醌对乳腺癌细胞株(mda-mb-231)的抑表1M法减得自花丹服对md-mb-x及MRC-05的细制作用。众多抗肿瘤药物在杀伤肿瘤细胞的同时胞的体外抑制效应(=5对正常细胞毒性也较大,实验以人胚肺成纤维细胞Tabe1 Inhibitory effect of plumbagin on mda-mb-231and(MRC-05)作为正常细胞对照,拟探讨白花丹醌对MRC-05 by MTT(n=5)正常细胞的细胞毒作用。结果显示,白花丹醌对MRC -0Smda-mb-231细胞有较好的抑制生长作用,而对inhibitory/% ICso/g L"inhibitory/% ICso/g0.27372.560.014MRC-05细胞毒作用弱。提示白花丹醌的细胞毒作7l.71用可能具有一定的选择性,其机制值得进一步探讨0.06970.3969.590.01823鲁支[1]刘圆钟熠高泽文等.白花丹药材的研究进展[门].华西药衰2白花丹醌对mda-mb-231克隆形成的抑制作用(x±,=5)学杂志,2006,21(1):71-73Tabe2 hibitory effect of plumbagin on mda-mb-231bydo[2]刘圆刘超颜晓燕等白花丹不同提取部位体外抗肿瘤及急毒研究[.中国药理学通报,2007,23(1):257-258Inhibitory/%1C/gL[3]黄,王建伟张古荣胰岛素-5-氟尿啶偶联物在体外Control38.67±764的细胞毒性和细胞亲和性[J].华西药学杂志,2007,22(3):2.31×10-23.67±1.5390.515.13x10-3245-2471.16×10-211.00±7.2171.5[4]曲巍,王立明朱有华等曲古霉素A增强抗肿瘤药物对膀5.80×10-317.33±4.1655.8胱癌T24细胞的杀伤作用[].中国药理学通报,2007,232.90×10-327.00±8.1930.181.45×10-331.33±8.[5]陈奇。中药药理研究方法学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,200610152讨论收稿日期:2007=0在前期研究中,白花丹的氯仿和石油醚提取物3-吲哚甲醇的抗肿瘤作用罗丽娜,余龙江,郭鸣,敖明章(华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074)摘要:目的探讨硫代葡萄糖苷的降解产物3-吲哚甲醇(C)在体内、外的抗癌活性,为十字花科蔬菜的防癌作用以及从蔬菜中筛选药用成分提供理论依据。方法体内试验以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率及对脾脏、胸腺指数的影响为指标,评价C对S移植性肉瘤的抑制作用;长期实验在饮水中加入化学致癌剂甲硝基亚硝基胍(MNNG),诱发小鼠前胃鱗癌及癌前病变,同时给予不同剂量C进行预防观察癌前病变和癌变发生率;体外采用MTT法,观察C对Hela细胞增殖的抑制作用。结果LC在体内能明显抑制实体瘤重使荷瘤小鼠的脾脏和胸腺指数下降,表现出一定的免疫抑制作用;长期试验能明显降低MNNG诱发的癌前病变和癌变发生率;在体外对Hea细胞有明显的生长抑制作用,且作用随药物浓度增加而加大。结论IC具有一定的抗肿瘤活性。关键词:3-吲哚甲醇;抗肿瘤;硫苷中图分类号:R96文献标识码:A文章编号:1006-0103(2008)01-0044-04Experimental study on antitumor activity of indolearoinLUO Li-na, YU Long-jiang, GUO Ming, AO Ming-zhang中国煤化工College of Life Science and Technology, Huazhong University of ScienceCNMHGh作者简介:罗丽娜(1981-)女,正攻读天然产物化学专业的硕士学位。E-mal:lamina0122@163.com通讯作者(Correspondentauthor),E-mil:am25@163.com第1期罗丽娜,等。3-吲哚甲醇的抗肿瘤作用Abstract: OBJECTIVE To investigate the antitumor activity of Indole-3-carbinol (IC), the hydrolytic products of glucosilates, in wioo and in vitro, and to screen medicine materials from diet vegetables and provide theory support for the anticarcinogenicityof crucifers. METHODS The inhibition effect of IC to Suso cells in vivo was evaluated by the tumor weight of the mice bearing tumorand the tumor inhibition rate. The effects on spleen and thymus were also observed. Long term carcinogenesis model was induced byN-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine( MNNG). The in vitro anticancer effect was studied by MTT assay. RESULTSobtained that HeLa cells were obviously inhibited by the influence of IC in vitro. And there was positive correlation between thetory effect and IC concentration. Furthermore, the IC also had the anticancer activity to the Suso cells of the mice bearing tumor. Thedeclining of spleen and thymus index indicated that IC had the effect of immunosuppressant. IC can reduce the precancerous affectionsand cancer ratio in long term carcinogenesis experiments. coNclusion IC has some effect on inhibition of tumor.Key words: Indole-3-carbinol; Antitumor; GlucosinolateCLC number: R96Document code: AArticle n:1006-0103(2008)01-004硫代葡萄糖苷(硫苷)是一类广泛存在于十字素(深圳华药南方制药有限公司,批号:NO60502);花科植物根、茎、果实中的糖苷类混合物,特别是芸甲硝基亚硝基胍(MNNG,日本东京化成试剂);小鼠苔属 brassica植物,包括各种卷心菜、椰菜、花椰菜肉瘤细胞株(S3,华中科技大学同济医学院药学和布鲁塞尔苗芽。至今已发现120多种硫苷,在十院);人宫颈癌HeIa细胞(华中科技大学光电国家字花科植物中已鉴定出27种。根据侧链基团的重点实验室传代保株)。SF级昆明种小鼠[湖北省氨基酸来源不同,可将硫苷分为脂肪族、芳香族、吲实验研究中心,许可证号:SCXK(鄂)2003-0007哚族硫苷。硫苷本身是一种较为稳定的化合物,但♀♂兼用,体重18-22g。在芥子酶或胃肠道中的细菌酶的催化作用下,会发1.2方法与结果生降解并生成多种降解产物2。文献报道吲哚1.2.1IC对同种移植性肿瘤的作用取接种于昆族硫苷中的3-吲哚甲基硫苷的降解产物3-吲哚明小鼠约7-10d的S1m肿瘤,无菌条件操作,剔除甲醇(C)可预防癌症的发生(图1)。作者研究了包膜和坏死部分,选取完好的瘤块,置玻璃匀浆器IC的体内体外的抗肿瘤作用以探讨其用于治疗内加入适量生理盐水配制成瘤细胞悬液细胞数癌症的可能性。为1×107-2×10·ml-,接种于同种异体小鼠前肢/ s-b-D glucosecH。-c腋皮下,每只小鼠注射0.2ml。之后动物随机分组s一 B-D glucose分笼饲养。制成实体型荷瘤模型。治疗组讴供试N-OSO3Indole-3-ylmethyl glucosinolate液,qd;阴性对照组用水;阳性对照组用环磷酰胺(CⅨX),隔日p给药1次。S1荷瘤小鼠连续给药10d,停药次日,脱颈处死动物,剥取瘤体组织、脾、胸腺称重,计算肿瘤系数、抑瘤率及脏器系数。采用组间t检验及方差分析,应用SPSS12.0统图1化合物的结构计软件包进行统计学分析。对S1颱荷瘤小鼠的抑瘤Fig 1 Structures of compounds作用和脾脏、胸腺重量的影响见表1实验结果显示,IC对♂小鼠S1有显著抑制作1实验部分用,大小剂量的抑瘤率分别为36.92%34.73%;阳1.1仪器、试药与动物性药物环磷酰胺可明显抑制肿瘤的生长,抑瘤率为二氧化碳培养箱(美国 NuAire);倒置显微镜51.5%。环磷酰胺具有免疫抑制作用,与阴性对照(cOIC);酶标仪(芬兰 Wallac)。3-吲哚甲醇(LC,组相比,可使脾脏和胸腺系数降低,而大小剂量的Sigma公司,纯度99%,批号:122190050);环磷酰胺C也能使脏器系数降低,其中大剂量C对脾脏的江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:06090521);溴抑制作用稍强于环磷酰胺。由于♀♂个体差异,在化二甲噻唑二苯四氮唑(MT, Amresco公司分装);♀荷瘤中国煤化工相差较大,大剂DMEM培养基(Gb公司);新生牛血清(杭州四季量的抑♀小鼠免疫器青生物工程材料有限公司,批号:00201);二甲基亚官具有CNMH腺也有极显著砜(DMSO,天津市大茂化学试剂厂);青霉素钠(华的抑制作用。北制药股份有限公司,批号:S0509301);硫酸链霉L.22对化学物质诱发性动物肿瘤的作用取华西药学杂志第23卷豪1IC对小鼠S1m肿瘤和免疫器官的影响(mgkg1,舞=8Table 1 Influence of IC on 8Sm sarcom mouse and immune organs( mg.kg", m=)aSIa sarcom mouse♀S1 RAnCOmGroupsmg.kg-1 Tc/) Ir/% Oe spleenControl14.4±3.0-12.481±6.821.954±0.4819.3±4.712.173±0.933.568±0.7294±2.6·34.739.861±2.221.881±1.0916.0±4.317.229.958±2.443.160±0.12928.403±1.531.897±04±4.8·41.1311.852±2.06L.841±0.56Compared with control group: P<0. 05,. P<0. 01: Te means tumor coefficient: Ir means inhibition ate Oe means organ coethdear 21.7.0±3.0·51.58.491±1.841.551±0.8511.7±4.1·39.787.791±1.43··1.220±020只小鼠,随机均分为MNNG组;lC大、中、小三IC的6个浓度对HeIa细胞作用48h后,与阴性对个剂量组。取 I g MNNG加1L蒸馏水,避光用磁力照组相比,对肿瘤细胞都有显著的抑制作用,其中搅拌器搅拌约4h,使之溶解成MNNG溶液,置4℃200、250μmol·L剂量的生长抑制率分别达到冰箱里避光冷藏。临用时配成100μg·m-稀释6.52%和78.42%;与环磷酰胺组相比其抑制作用液,置棕色瓶中(外包以铝箔避光)由小鼠自由饮明显较强。IC为52.38μmol·L。取,连续12个月。MNNG组于12个月后停药,给自表3IC对HeLa细胞生长的影响(48h)(x±,=6)来水4个月;C大、中、小剂量组饮水中MNNG用量Tb3 ENect of IC on Hela grow由(48b)(xt,m=6)和时间与MNNG组相同,分别按100、30、10mgkgig给药每周6次共16个月。除实验过程中cmwbInhibitionAmolL-lμnolL-1自然死亡外,其余为有效动物,均于16个月全部处 Control0.236±0.035死。处死动物,全面检查胃肠道,重点观察胃。取全cC100.127±0.052·46.26%52.38胃于大弯侧剪开,绘图或照相后,按0.2~0.4cm宽500.135±0.024·442.81%度全部取材编号,10%甲醛固定,石蜡包埋,间断连0.152±0.039·35.90%续切片,配E染色。MNNG诱发小鼠前胃鳞癌的过0.142±0.03539.84%0.055±0.021·4476.52%程中所出现的增生性病变(角化亢进、单纯性增生、乳头状增生)、癌前病变(乳头状瘤、不典型增生)、cx9gm-10173+0.018…2695%癌变(鱗状细胞癌)与文献一致。治疗组的增生mpared with control group:.P<0. 05,+ P<0. 01; compared with性病变、癌前病变、癌变数均低于MNG组,差异有 CTX甲:△P<0.05,△△P<0.o1显著性(P<0.05)(表2)。表2IC刘MNNG诱发小鼠胃癌前病变和鳞癌的抑制作用2讨论Table 2 Inhibition of carcinogenesis by IC on mice在体内实验中,大剂量3-吲哚甲醇(IC)对♀Groups A Dose/mg kg" Hyperplasia/% Precancerous/% Cand%小鼠Sm肿瘤都表现出一定的抑制作用,且大、小Control 28100.042.3·26.9·11.5剂量都具有免疫抑制作用。体外MT实验显示IC2730对HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,且抑制作用与药物浓度呈正相关。Compared with control group: P<0. 05,.* P<0. 01IC可抑制致癌物与DNA的结合67,除表现出1.2.3MTT比色法测定LC在体外对HeLa细胞的抗机体诱导突变作用、抑制某些酶的活性外,还有抗作用参照文献,采用培养的对数生长期的HeLa激素样活性及抗细胞增生的作用。细胞,消化、收集细胞,计数,调细胞浓度5x10ml-,接种细胞190在9孔板内。每孔加药量参考文献10μ,每种剂量6个平行孔。药物作用48h后,每[1] Troyer JK, Stephenson KK, Fahey JW. Analysis of glucosinolates孔加入10μMT,37℃培养箱中培养4h,弃上清,from broccoli and other ouciferous vegetable by hydrophilic inter每孔加150山二甲基亚砜,微量振荡器振荡5min,.f 1 1 Chromatogr A,2001,919中国煤化工自动酶标读数仪比色(波长570mm)。求出生长抑制率(IR)和半数抑制浓度(LCs)。CN MHGohiocyanates: measurementmechanism of action[J]. J Mutation Re采用组间t检验及方差分析,应用SPSS12.0统search,2004,555:173-190.计软件包进行统计学分析(表3)。实验结果显示[3] Nuon- Baudet l, Rabot S,wlJM,da. Actions of the intesti-华西药学杂志2008,23(1):047-049Wnal microflora with glucosinolates in rapeseed meal toxicity: first [6] Hudson EA, Howells L, Ball HW. Mechanisms of action of in-evidence of an intestinal lactobacillus possessing a myrosinase likedole-3-carbinol as a chemopreventive agent [J]. Biochem Socactivity in vio[ J].J Sci Food Agric, 1990,52: 547-559Trans,1998,26:S370-371[4] Su Q, Lao ZY, Huo X. Investigation of carcinogenesis induced [7] Kojima T, Tanaka Tby MNNG[ J]. Trancaction of Hengyang Medical college, 1994trial cancer in female donryu rats by indole-3-carbinol[J][5]薛庆善体外培养的原理与技术[M].北京:科学出版社,收稿日期:2007-02光源对金丝桃素光动力体外抗肿瘤作用的影响王晓利,刘金钏2,张俊松,杨汝德2(1深圳职业技术学院,广东深圳518055;2.华南理工大学,广东广州510641)摘要:目的研究金丝桃素和贯叶金丝桃中金丝桃素提取物对人肝癌细胞株HepG2的体外杀伤效应及光源对其抗肿瘤作用的影响。方法分析金丝桃素及金丝桃素提取物的吸收光谱,用不同波长的光源激发进行体外细胞毒试验,采用显微镜观察、MTT法分析和DNA电泳等方法评价金丝桃素及金丝桃素提取物的抗肿瘤效果。结果590m的黄光激发金丝桃素和金丝桃素提取物对HepG2细胞有显著的体外杀伤效应,生长抑制率分别为51.5%、83.1%,其他波长光源的作用不显著。结论金丝桃素的光动活性依赖于光源的波长受适当光源激发的金丝桃素及金丝桃素提取物能显著抑制HepC2细胞的生长,显示金丝桃素有良好的光动力治疗肝癌的开发前景。关键词:金丝桃素;光动力治疗;肝癌;光波长中图分类号:R96文献标识码:A文章编号:1006-0103(2008)01-0047-03Effect of light wavelength on photodynamic therapy of hypericin and extract from HypericumL. on HepG2 cancer cell line of human liver in vitroWANG Xiao-li, LIU Jin-chuan, ZHANG Jun-song,YANG Ru-de'(1. Shenzhen Polytechnic, Shenzhen 518055, China; 2.China University of Technology, Guangzhou 510641, China)Abstract: OBJECTTE To investigate the antitumoral effect in mitro and light wavelength effect of hypericin and extract from Hype-ricum perforatum L on HepG2 cancer cell line of human liver. METHODS To detect the absorption spectra of hypericin and ex-tract,use light irradiation of different wavelength for photocytotoxicity test, and assess antitumor effect of hypericin and extract by microscopy, MTT assay and DNA ladder gel electrophoresis. RESULTS The irradiation of 590 nm( yellow)to hypericin and extractad obvious effect on killing HepG2 cell in wuro. The rates of growth inhibition were 51.5 and 83. 1%. CONCLUSION Our studydemonstrates that the photodynamic activity of hypericin and extract depends on light wavelength. Hypericin and extract can obviouslydecrease the growth of HepG2 cancer celL. Hypericin is a powerful naturally photosensitizer and should have a good prospect for furtherKey words: Hypericin; Photodynamic therapy Liver cancer; Light wavelengthCLC number: R96Document code:AArticle id:1006-0103(2008)01-0047-03金丝桃素( hypericin,HY)是贯叶金丝桃 hyper肿瘤方面的报道。文中初步研究了贯叶金丝桃中金cum perforatum L中最具生物活性的物质,结构为丝桃素提取物受不同光源激发后对肝癌细胞的作萘骈二蒽酮类化合物,可发出明亮的橘红色荧光,是用。种良好的光敏剂。研究表明,HY具有抗抑郁、抗病毒(包括Hv)及抗肿瘤等活性。国外在金丝实验部分桃素肿瘤光动力治疔(PDT)方面的研究开发十分活1.1跃,但未见有关贯叶金丝桃中金丝桃素提取物在抗YHa中国煤化工度荧光检测仪CNMHG基金项目:深圳市科技局科技项目(03KB19)作者简介:王晓利(1964-),女,硕土,副教授主要从事医药生物的科研与教学工作。E-mal:xiaoli@yahoa.com通讯作者(Correspondentauthor),E-mail:junsongzhangt@yahoo.com.