萎胃汤对大鼠血清SOD活性、MDA、GAS的影响研究

江西中医学院学报2013年6月第25卷第3期JOURNAL OF JIANCXI UNIVERSITY OF TCM2013 Vol25 No.3胃汤对大鼠血清SOD活性.MDA、GAS的影响研究★张伦'刘蔚'戈焰'荣尚一2 (1.广东省第二二中医院广州510095; 2.南方医科大学公共卫生与热带医学学院广州510515)摘要:目的:通过动物实验研究探讨萎胃汤的作用机制。方法:取SPF级SD大鼠70只,经病理组织学检查判定慢性蒌缩性胃炎(CAC)动物模型复制成功后,将模型动物按体重随机均分为模型组、胃复春组(0.54g1kg)、萎胃汤高(20.8g生药Akg)、中(10.4g生药kxg)、低(5.2 g生药kg)剂量组(分别为4倍2倍、1倍临床等效剂量)。按照测试盒的要求测定胃酸、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、、血清丙二醛(MDA)、血清胃泌素(GAS)含量。结果;治疗12周后,各给药组大鼠胃液PH、血清血清SOD活性、MDA、GAS含量等方面均较模型组显著改善(P<0.01),其中蒌胃汤高、中剂量组较胃复春组改善程度具有显著性差异(P<0.01 或P<0.05)。结论:萎胃汤能改善CAG模型大鼠的生存质量、降低胃液PH值(P<0.01),升高血清GAS含量(P<0.01)、升高SOD活性(P<0.01)、降低MDA含量(P<0.01),且蒌胃汤高、中剂量组较对照药胃复春为好。态关键词:萎胃汤;模型大鼠;超氧化物歧化酶活性;丙二醛;胃泌素中图分类号: R285.5文献标识码: A研究The Study of Weiwei Decoction Effects on Rat Serum SOD Activity、MDA GAS约230 mL,称重,量取1/50的浓缩液,按照正交实验循环提取4小时,并浓缩成膏,80心干燥,粉碎,过中干膏率的测定方法测定干膏率,考察优化提取工筛,加人沉香粉和适量糊精,制粒,压片，即得。艺在热循环回流循环提取浓缩机组的重现性,结果3讨论见表5。3.1通过对处方 进行实验室阶段研究,优选最佳提表5健胃消胀片提取工艺的重现性取工艺为药材加18倍量的水,浸泡30 min,循环提批号干膏率(%)取4小时,该提取工艺在热循环回流循环提取浓缩200808139.17机组中应用中重现性较好,质量易于控制。200810069.223.2健胃消胀片根据通降胃气之法创立,选用枳200812059.19壳大腹皮沉香三者共用为君药,共凑行气消胀之MEAN力,彰显胃气下降之作用,对上腹部胀满、胃脘疼RSD0.27痛,属于脾胃气滞证的疗效显著,值得临床推广使结论:按优化提取工艺采用热循环回流循环提用,造福于广大脾胃病的患者。取浓缩机组提取健胃消胀片三批,测定提取液的干[1]吴谋,陈继英健胃消胀片部分成分的鉴别和含量测定[J].中国参考文献膏率,结果表明健胃消胀片提取工艺在热循环回流医院药学杂志,2011,31(20);1 742-1 743.循环提取浓缩机组中有较好重现性。[2] 董明国,卢晓敏.周正.等.健胃消胀片对胃肠系统药理作用研究2.4.2制备工艺确定[0]. 中西医结1中国煤化工、处方中十味,沉香粉碎,过筛,备用;其余枳实YHC N M H G期:2013-01-23)等九味加水18倍量的水,浸泡30 min,热循环回流68..张伦等:萎胃汤对大鼠血清SOD活性MDA、GAS的影响研究ZHANG Lun', LIU Wei', GE Yan' , Rong Shang- yi?1. Guangdong Second Provincial Traditional Chinese Medice Hospital, Guangzhou 510095;2. Southern Medical University School of Public Health and Tropical Medicine , Guangzhou 510515Abstract: Objective: Through the animal experiment to study the mechanism of action of Weiwei decoction. Methods: SPF of 70 SDrats were examined by histopathology , determine the replication of successful animal model of chronic atrophic gastritis(CAG), the ani-mal models were randomly divided into model group, w eifuchun group (0.54g/kg) , Weiwei decoction high (20.8 g crude drug /kg),medium (10.4 g crude drug /kg) , low (5.2 g crude drug /kg) dose group (respectively 4 times, 2 times, 1 times as clinical equivalentdose. ). According to the requirements of Laboratory reagents do gastric acidity determination.serum superoxide dismutase (SOD) activi-ty, malondialdehyde (MDA) , serum gastrin (GAS) content.Results: after 12 weeks treatment, the rats administered PH of gastricjuice, serum SOD activity, serum MDA, GAS were signifcantly improved compared with model group (P<0.01) , Weiwei decoctionhigh. middle dose group were significantly improved compared with Weifuchun group (P<0.01 or P<0.05 ). Conclusion: Weiwei decoc-tion can improve the CAG rat model of quality of life, reduce the PH value of gastric juice (P<0.01), the content of serum CAS (P<0.01), increase the activity of SOD (P<0.01), decreased the content of MDA (P<0.01) , and the high, middle dose Weiwei decoctiongroup better than in the control drug W eifuchun.Keywords: Weiwei Decoction; Rat Model; Superoxide Dismutase; Malondialdehyde; Gastrin慢性萎缩性胃炎属于中医学“胃脘痛”、“胃痞”水瓶中,外贴黑色避光纸,整个配制过程全部避光实等范畴"。中医学认为本病病因不外乎饮食不节、操作。验情志所伤与脾胃虚弱。慢性萎缩性胃炎患者久病1.2.2剂量设置以药品说明书标示临床日用量作研究脾虚,加之调养失当，外邪侵袭等因素,使中气更虚为基础,参考《中药药理研究方法学》中的剂量换算不足以行血,渐致壅滞成瘀。脾虚血瘀证是慢性萎方法“体表面积比”换算动物试验剂量作为临床等缩性胃炎中医学临床最常见证型,萎胃汤验之临床效剂量。换算后,胃复春片为0.54g Akg(2倍临床等屡获良效,本研究通过动物实验研究萎胃汤可能的效剂量) ,萎胃汤高剂量为20.8 g生药/kg、中剂量为作用机制,为今后更深-步的研究工作打下基础,10.4 g生药/kg、低剂量为5.2 g生药kg(分别为4倍现将动物实验研究报告如下。临床等效剂量、2倍临床等效剂量临床等效剂量)。1材料与方法1.2.3动物造模取SPF级SD大鼠70只,雌雄各半,1.1材料常规喂养1周后,随机抽取雌雄各5只作为空白对1.1.1 实验动物SPF级SD大鼠,雌雄各半,体重照组,其余大鼠采用1500μg/mL的MNNG饮水加180-220g,由广东省医学实验动物中心提供,实验饥饱失常的方法复制CAG模型-),连续3个月。具动物生产许可证号:SCXK(粵)2003- 0002。动物饲体操作如下。养环境:广东省中医研究所SPF级实验室,实验动物(1)MNNG溶液自由饮用:浓度为1500μg/mL使用许可证号:SCXK(粤)2005-_0059,温度20C-的MNNG溶液,装人外涂黑色的饮水瓶中,每天更25C,湿度60%-70% ,SPF级大鼠饲料，饮用无菌水。换并给足量,自由饮用。1.1.2药品试验药:萎胃汤(黄芪、党参、当归、白(2)饥饱失常:2d足量喂食, 1d停食,循环实施。术、甘草、枳壳石斛鸡内金、山楂、三七莪术),由3个月后,随机抽取5只动物,脱颈椎处死动广东省第二中医院中药房提供,单味颗粒剂由广东物,迅速取胃。经病理组织学检查,判断动物造模省-方制药厂生产;对照药:胃复春片(成分为红情况。造模成功标准:参照《中药(新药)临床研究参、香茶菜、炒枳壳等),杭州胡庆余堂药业有限公指导原则》(2002)中GAG的病理诊断标准,经病理司生产,国药准字:2000003，批号:090604。确诊:①固有腺体萎缩;②黏膜肌层增厚;③可有肠1.2方法上皮化生或假幽门腺上皮化生;④固有膜炎症;⑤1.2.1MNNG饮用液配制用灭菌自来水将MNNG可有淋巴滤泡中国煤化工配制成10mg/L浓度的储存液，避光冷藏保存，用时CAG动物MHCNMHG10只/组,将.将其配成1500ug/mL的饮用液,装人200mL的饮造模动物按体重随机均分为模型组、胃复春组.69●江西中医学院学报2013 年第25卷第3期(0.54g/kg)萎胃汤高(20.8 g生药kg).中(10.4 g生与 胃复春组相比,萎胃汤低剂量组大鼠胃液胃液总药/kg)、低(5.2 g生药Akg)剂量组(分别为4、2、1倍临酸度无显著性差异(P>0.05),萎胃汤低剂量组大鼠床等效剂量)。血清胃泌素含量有显著性升高(P<0.01),萎胃汤1.2.4给药方法各组大鼠按剂量灌胃给药, 10mU高、中剂量组大鼠胃液胃液总酸度和血清胃泌素含kg,1次/d,空白对照组给予等体积蒸馏水。连续12周。量均显著性升高(均P<0.01)。1.2.5指标检测与标本采集测定胃酸、血清SOD活表1萎胃汤对CAG大鼠PH值、总酸度、胃泌素含量的影响(:s)性、MDA、胃泌素含量。胃液血清胃泌素分组胃酸测定;于末次给药后,大鼠禁食24 h,禁水pH值总酸度/mmol●L'/pg* mL"8h,眼眶采血;用25%乌拉坦腹腔注射麻醉,剖腹,空白组2.110.52150.60+14.87*** 145.58738*结扎幽门贲门,取出全胃,沿胃大弯剖开胃腔,倾模型组5.17+0.52**75.454.53**173.89+8.71**H出内容物,用5.0mL生理盐水冲洗,收集于冲洗液胃复春组4.48+0.45** 95.86+3.84***95.17*7.21**于离心管中,3 000 rpm离心20 min,吸取上清液1.0高剂量组299+9.49** 132.56+12.92** 129.85+5.27mL,用PH计测量pH值,计算原胃液PH值;二步滴中剂量组3.43+0.43**+}120.6410.84**5 120.53+13.18**附定法"测胃液总酸度。将血液于3000mmp离心10min,吸取血清。严格按照试剂盒说明书,测定血低剂量组4.27+0.57**105.45+8.90**112.89+7.17**m注:与空白组比较, *P<0.05, **P<0.01;与模型组#P<0.05,#P<0.01;清中的SOD活性、胃泌素、MDA含量。与胃复春组比较,&P<0.05,98P<0.01.1.3 统计方法2.3对大鼠血清SOD(超氧化物歧化酶)活性和计量资料多组间均数的比较先采用单因素方MDA(丙二醛)含量的影响差分析,方差齐时 ,以均值加减标准差(xs)表示 ,组与空白对照组相比较,模型组CAG大鼠血清实验间的均数两两比较用SNK法;方差不齐时,以平均SOD活性显著降低(P<0.01);与模型组相比较,胃研秩次、下四分位数、中位数和上四分位数R(Ps,Po,复春组和萎胃汤高、中低3个剂量组SOD活性显著Ps)表示,多组间平均秩次比较用Kruskal-Wallis秩升高(均P<0.01);与胃复春组相比较,萎胃汤高剂和检验,组间平均秩次的两两比较用Mann-Whit-量组SOD活性显著升高(P<0.01),萎胃汤中、低剂neyU法。以上数据均由SPSS15.0完成, a=0.05。量组SOD活性亦有升高但无统计学意义(P>0.05)。2研究结果与空白对照组相比较,模型组CAG大鼠MDA2.1 一般情况显著升高(P<0.01);与模型组相比较,胃复春组和CAG模型大鼠精神萎靡眼睛无神、活动缓慢,萎胃汤高、中、低3个剂量组MDA显著降低(均P<毛发色泽枯稿疏松粗糙竖毛、易脱落,食量减少，0.01);与胃复春组相比较,萎胃汤高剂量组MDA显常有便溏、形体偏小，耳色淡白,拱背,喜扎堆,消著降低(P<0.01) ,萎胃汤中、低剂量组MDA亦有降瘦、体重增加缓慢。治疗期间,空白组未发现上述低但无统计学意义(P>0.05)。表现,各治疗组大鼠经治疗后，其毛色、精神状态、表2萎胃汤对CAC大鼠血清SOD和MDA的影响(xs)食欲、大便活动情况等均有不同程度的改善,而以SOD/U. mL-+MDA/mmol.L:'萎胃汤高、中剂量组最好、萎胃汤低剂量组和胃复152.610.379.48+2.06*春组次之,模型组最差。97.84+9.95**116.88+1.06**#2.2对CAG大鼠胃液PH值、胃泌素的影响与空白对照组比较,各组大鼠胃液PH显著升胃复春组132.93+11.49**14.29+0.98**高(均P<0.01);与模型组相比,胃复春组、萎胃汤高剂量组150.1312.84"10.96+1.61*m高、中、低3个剂量组大鼠胃液PH均显著性降低中剂量组137.14912**12.961.83**(P<0.01);与胃复春组相比,萎胃汤高、中剂量组大低剂量组137.53+6.68***13.58+1.50**鼠胃液PH有显著性降低(均P<0.01),萎胃汤低剂注:与空白组比较, *P<0.05, *P<0.01;与模型组#P<0.05, #P<0.01;量组大鼠胃液PH降低不明显(P>0.05)。与胃复春组比较,SP<0.05, 8sP<0.01.与空白对照组相比较,模型组大鼠胃液总酸度2.4不良事件发生率和血清胃泌素含量显著降低(P<0.01);与模型组相2组大| 中国煤化工汇、消化道出比,萎胃汤高、中、低3个剂量组和胃复春组大鼠胃血、血尿等的:MHCNMHG安全的药物。液总酸度和血清胃泌素含量显著升高(均P<0.01);●70张伦等:萎胃汤对大鼠血清SOD活性MDA、GAS的影响研究3讨论的诊断及药物疗效的判定,具有非常重要的意义。本研究采用以MNNG为主的加饥饱失常法复本研究提示萎胃汤各剂量组均能改善CAG模制CAG大鼠模型。造模开始后6周大鼠即开始出型大鼠的生存质量:即大鼠的精神状况、饮食量、活现活动量、饮食量、体重、毛色、二便等方面的异常动度、体重毛色、二便等- -般情况,且萎胃汤高、中变化,至12周时上述改变更加明显,而且胃粘膜肉剂量组较对照药胃复春为好。在改善胃液PH方眼观和显微镜镜下观呈不同程度的萎缩、胃壁厚变.面,萎胃汤高、中、低3个剂量组大鼠均显著性降低薄、弹性降低、皱壁减少、黏膜色泽发白或变暗,有胃液PH值(P<0.01),且萎胃汤高、中剂量组较胃复出血点等情况的发生,符合人类CAG的临床和病理春组大鼠胃液PH值亦有显著性降低(均P<0.01)。特征。在胃酸分泌功能方面,萎胃汤高、中、低3个剂量组近年来,超氧化物歧化酶(SOD)的防御和修复和胃复春组均升高了胃泌素的分泌情况(均有P<氧代谢产物的损伤作用得到了广泛的重视,测定0.01),且萎胃汤高、中剂量组较胃复春组大鼠胃泌SOD可在一定程度上反映机体清除自由基能力的素亦有显著性升高(均P<0.01)。在抗氧化能力方大小。丙二醛(MDA)是脂质过氧化的最终分解产面亦有改善,萎胃汤3个剂量组均显著升高了SOD物,可与脂质过氧化中间产物自由基损伤膜结构，活性(均P<0.01),降低MDA的含量(均P<0.01)。改变膜成分的活性及抗原性而影响膜的正常功通过实验研究也可以看出，治疗作用中以萎胃汤高能。因此, MDA水平是脂质过氧化物损伤效应的特剂量效果最好;治疗剂量呈现了一定的剂量正相关征性指标。蒋时红等[5]在实验中发现,慢性萎缩性关系。通过动物实验研究进--步阐明了萎胃汤治胃炎(CAG)大鼠模型血清和胃黏膜SOD水平明显疗慢性萎缩性胃炎的作用机制。下降,而MDA水平明显升高,表明CAG大鼠脂质过参考文献氧化反应增强,超出了抗氧化系统的抗氧化能力,[1]白兆芝,张彦敏,张润顺,等胃安泰胶囊治疔慢性萎缩性胃炎癌头使MDA增高,自由基代谢异常起着重要作用。前病变的临床研究[].上海中医药杂志,2005 ,39(2):16-17.研[2]陈云逸胃癌动物模型研究进展[].肿瘤基础与临床,2006.19究胃泌素主要由胃窦G细胞释放,除存在于血液.(1):751.和组织中,也存在于胃液内,具有刺激胃酸分泌,促[3]雪辉,王建国.大鼠慢性萎缩性胃炎模型的建立[D张家口医学使胃肠粘膜的蛋白质、RNA、DNA的合成,促使胃肠院学报,2002, 19(2);11.粘膜的生长与更新速度加快等作用。还能引起幽[4]陈奇.中药药理实验方法学{M]_北京:人民卫生出版社,1994:859门括约肌松弛,胃窦肌收缩,加快胃排空。在CAG[5]蒋时红,刘旺根,王雪萍,等.黄芪建中汤对脾虚型慢性萎缩性胃时由于腺体萎缩,肠上皮化生,G细胞数量减少,炎大鼠血象、血液和胃黏膜生化指标的影响[]-中国中医基础医CAS分泌下降，由于失去了激素的营养作用,胃粘学杂志,2006, 12(4):279 -281.膜进一步萎缩,肠化加剧,形成恶性循环。因此,检(收稿日期:2013-03- -26)测胃酸、胃蛋白酶活性及血清胃泌素含量对于CAG新专栏征稿《江西中医学院学报》(双月刊)已全面改版,以下重点栏目面向全国征稿:●理论研究对中医重大理论问题进行专题论述。讨论专题有:中医水理论研究、火理论研究、体质学说研究、梦理论研究、病证理论研究。●百家争鸣旨在打破中医学术界的沉闷局面,对中医药事业发展的重大问题展开讨论争鸣。争鸣要求坚持良好的学术道德,敢说真话,敢亮观点。争鸣的主要内容有:中医教育反思、中医科技走向、中医发展前景、中西医结合前景、新时期中医的生存模式等。.●中医文化研究主要反映中医与古代哲学、古代社会政治经济、人文地理等文化形态的研究成果以及五运六气研究、生命学说研究的最新动态。●道教医学研究包括道教医药文献研究、道教医药人物研究、道教医药史研究、道教医学理论研究、道教医学方药研究、道教医学养生研究等,要求观点正确,不违中国煤化工欢迎广大作者踊跃投稿。YHCNMH G71 .