丹宁-聚乙二醇法提取纤维素酶的研究

木霉经固态发酵制成纤维素酶湿曲,按曲水体积比1:5加入40℃去离子水,保温60min后,过滤获得粗纤维素酶液.在酶活为FP雠22.6√mL的稀酶液中,加入丹宁至5.0∥L时,粗酶液中纤维素酶接近完全沉淀下来,将沉淀分散于pH4.6的0.1mol/L柠檬酸缓冲液中,加入分子质量为6000u的聚乙二醇(PEG)至丹宁含量的1.6～4.0倍,酶活回收率达到210%～245%,可将纤维素酶浓缩7～8倍.PEG对纤维素酶有激活作用,采用丹宁作为纤维素酶的沉淀剂,PEG可将纤维素酶从酶-丹宁复合物中解析出来.丹宁、PEG的用量与酶液中的蛋白质含量有关,PEG超过解析酶用量的一定范围,因激合纤维素酶使酶活回收率超过100%,过多PEG会使系统发生相改变,从而使酶失活,使得酶活回收率急剧降低.