苦地丁的提取工艺

2010;30(8)南方医科大学学报( J South Med Univ)1969苦地丁的提取工艺吴青业1,关业枝1,刘婵1,黄成安(广州中医药大学1科技产业园,2009届实习生,广东广州510445)摘要:目的研究苦地丁的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以紫灵的含量为考察指标,考察溶剂用量提取次数、提取时间对紫堇炅含量的影响,从而确定最佳提取工艺。结果确定最佳提取工艺条件为:用8倍量的90%乙醇提取2次,每次3h。结论此提取工艺简便、易行,可用于苦地丁药材的提取。关键词:苦地丁;正交试验;紫堇灵中图分类号:R2842文献标识码:A文章编号:16734254(2010)08-1969-02苦地丁又名地丁、苦丁、小鸡菜,用于清热解毒、mm,中性氧化铝12g,柱长20cm,湿法装柱,用30活血消肿,药理学研究资料表明主要化学成分为生ml%5%乙醇预洗)上,用95%乙醇洗脱,收集洗脱液物碱类,紫堇灵为主要活性成分。苦地丁临床应用于25ml,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解,加甲醇定容至多个传统方剂中,如感冒清热颗粒、利胆八味散、清血100ml,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。解毒丸、犀角紫草丸、连翘败毒丸(散)等2。而对苦地24标准曲线丁活性成分(紫堇灵)的提取工艺研究在国内尚未见精密吸取对照品溶液0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0报道。本实验以紫革灵的含量为指标,对苦地丁的不ml,分别加甲醇定容至10ml,摇匀。按上述色谱条件同提取工艺进行比较,采用正交试验优选出适合工业测定。以进样量ⅹ(μg)为横坐标峰面积A为纵坐标,化生产的紫堇灵最佳提取工艺绘制标准曲线,得冋归方程为:A=127×10X+11296r-09996,进样量在0.0781.248范围内与峰面积1仪器与试药呈良好的线性关系。Waters2695-2996高效液相色谱仪(美国),Empower色谱工作站;紫堇灵对照品(111343工艺考察200601):中国药品生物制品检定所;苦地丁药材3.1提取溶剂考察(20081223):市售;其余试剂均为AR级。提取生物碱常用的提取溶剂有水、乙醇。分别考察提取溶剂对提取率的影响2分析方法称取苦地丁药材(过10目筛)50g,共3份,分别2.1色谱条件加人10倍量的蒸馏水、8倍量90%的乙醇(含1%乙色谱柱: Diamonsil C18(5μm,250mm×4.6酸)、8倍量90%乙醇(适量的浓氨水润湿药材)作为mm);流动相:甲醇-0.015molL磷酸盐缓冲液(pH提取溶剂,分别提取3h。提取液按上述方法处理,计67)(取磷酸二氢钾1.58g和磷酸氢二钾076g,加水算紫堇灵的含量(mgg)。结果(表1)表明,水、酸性乙l000ml溶解,混匀,用氢氧化钠试液调节pH值至醇较碱性乙醇的提取率低,故本试验优选碱性乙醇作289mm。理论板数按紫革灵峰计算应不低于600.提取溶剂。67)(70:30);流速:1.0 mUmin;柱温:28℃;检测波长为提取溶剂。表1提取溶剂种类对提取率的影响2.2对照品溶液的制备溶剂种类含量(mgg)精密称取紫堇灵对照品7.6mg,加甲醇定容至100ml,即得。酸性乙醇0.729碱性乙醇2.3供试品溶液的制备将提取液于60℃薄膜浓缩至无醇味,用2%盐酸3.2正交试验设计调pH至2.5,滤过,滤液用pH25的盐酸溶液定容至用90%乙醇(先用适量的浓氨水润湿药材)提取500ml,精密量取续滤液50ml,置氧化铝柱(内径15苦地凵中国煤化工正交试验表头设计见收稿日期:201006-15CNMHG分析提取苦地丁中紫堇灵的最优杂为AB,即8倍的90%乙基金项目:广州市白云区科技局项目(2008P03)作者简介:吴膏业(1968-),男,博士,副主任药师,主要从事中药制备醇,提取2次,每次3hT艺与质量标准研究33方差分析通讯作者:关业枝,电话:02087476093, E-mail: zlll(@ hotmail com对以上正交试验结果进行方差分析,由结果(表1970南方医科大学学报( J South Med Univ)第30卷亵2因素及水平设计表行提取,紫堇灵的平均得率为1503mgg,实验结果稍高于优化的工艺,说明选择的工艺是可行的因素乙醇用量(倍)提取次数(次)提取时间(h)空白衰5验证试验结果468试验号紫萌灵含量(mgg)平均值(mgg)RSD%)0.6l513表3试验结果(n=2)序号A蕴灵含量(mgg4讨论12223323312231045中药材提取的常用溶剂为水、乙醇,但水的提取0.597范围广,选择性较差,精制困难,且游离的生物碱难溶于水,故不适宜作为提取该药材活性成分的提取溶剂。而乙醇可以溶解生物碱及其盐类、蒽醌、黄酮等成分,为本研究以碱性乙醇提取苦地丁的活性成分提供均值11.0050.7301.073了依据。实验数据表明碱性乙醇比酸性乙醇更有利均值210111.3640959于苦地丁活性成分提取,原因系苦地丁的活性成分为均值31.1181.0401.102极差0.1130.6340.1430024生物碱,大部分生物碱在碱性乙醇中被游离出来而易溶于乙醇中,而在酸性乙醇中生物碱与酸成盐,从而4)看各因素影响主次顺序:提取次数>提取时间>使提取率降低。分析方法中样品溶液不采用传统的三溶剂用量,均为显著性影响因素(P<001)。确定最佳氯甲烷萃取,而通过中性氧化铝柱净化,具有操作简提取工艺为:用8倍量的90%乙醇提取2次,每次3便、省时、毒性小的优点。表4方差分析衰参考文献:方差来源偏差平方和自由度F比F临界值品著性[1]吕惠子,崔兴日,王广录苦地丁的化学成分与药理[J]中药野生19000P00l植物资源,2002,21(4):545.ABc0.603260300019000P001[2]黄阁,赵怀清,李发美苦地丁的化学成分分离分析及活性研究00352350000.903P001冂].沈阳药科大学学报,2001,18:4I923误差[3]国家药典委员会中国药典,一部[S]北京:化学工业出版社,2005:138-9,644.3.4验证试验[4]梁生旺,中药制剂分析[M]北京:中国中医药出版社,2008:75精密称取苦地丁药材粗粉500g先用适量的浓5】刘定远,医药数理统计方法[M]北京:人民卫生出版社,20氨水润湿,静置半小时,加入8倍量的90%乙醇问流提取提取2次每次3h,平行做3份,测定紫茧灵含6]徐盛,邱祖民,刘燕燕,等中药梔子提取工艺的优化门中成药,2006,28(10):151921量。由表5得知,按照筛选的最佳工艺(ABCD1)进[7)张兆旺中药药剂学[M]北京:中国中医药出版杜,200:197中国煤化工CNMHG