如何进行有机酸的方法优化
关键词
有机酸C18分不开
虽然液相系列才推出了两集,但后台已经收到很多关于液相色谱的提问。
其中这个有机酸的方法优化案例很有代表性,和大家一起来分析一下。
也欢迎大家给灵姐姐留言,提出你的看法。
@蓝南
一直在关注色谱学堂,最近跑液相遇到了问题,跑有机酸峰挨的太近,不好分开!
七月买的zorbaxsb_aq的柱子,条件都试过,用了乙腈和pH2.0的缓冲液,效果不佳。
现在是甲醇加pH2.3的能分开九种酸里的六种,现在是抗坏血酸和乳酸分开了一点,但估计不能做积分处理,昨天试过1.8的,结果两个峰之间的乳酸被盖住了,三个峰变成两个了。
5min-6min的三个峰分别是抗坏血酸,乳酸,莽草酸。
想请教色谱君,不想换柱子,还能有什么方法能让抗坏血酸和乳酸完全分开?
如果一定要用C18柱分析有机酸,第一件事情是要抑制有机酸的电离。
有机酸的pKa值在3.5-4.5左右,因此缓冲盐需要设在pH2附近。
一般C18柱的pH耐受范围是2-8,所以这里你选了耐酸的Zorbax SB_aq的柱子,pH耐受范围1-8,是对的。
但是仍然有三个靠前出峰的化合物不能分离,是什么原因呢?
我们来看一下这三个化合物的结构。
首先这三个化合物能和C18固定相作用的基团都非常少,只有一两个甲基或亚甲基,也就是保留会很弱。
虽然实际上结构差异很大,但主要是极性基团,尤其是羟基的差别。
这种情况,其实非常适合用HILIC模式来分析。
使用水溶性的流动相,能够溶解样品。
和布满硅羟基的硅胶柱,能够保留样品。
没有一根色谱柱能分离所有的化合物。
虽然C18柱的使用非常普遍,但也不用执着于非它不可,不然干嘛要发明那么多种柱子呢:)
忘了什么是HILIC模式?请戳这一集↓↓↓
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那么,为什么会有那么多种色谱柱呢?
过一段,我们将推送“色谱柱里,到底装了些什么?”欢迎关注!
周末了,来点儿轻松的~
聊聊大闸蟹的那些事儿~
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