色谱学堂
“分不开怎么办”
免费咨询活动
正在进行中
如果同学们在日常工作中遇到
方法开发或者仪器的软硬件问题
都可以扫描求助我们的“大师兄”专家团队
我们会尽力帮你解决
同学们如果仔细查看色谱图，就会发现几乎每一个色谱峰都有一定程度的
拖尾现象
。
这本不是问题，但是当拖尾严重到一定程度就会影响我们的分析结果，所以今天就让我们来谈一谈关于液相色谱峰的拖尾问题吧！
前沿陡峭，后沿较前沿平缓的不对称峰，
称为
拖尾峰
。
下图就是一个拖尾峰，我们会发现这个
峰的右半边峰宽是大于左半边峰宽的
，尤其在基线处更加明显。
绝大多数情况下制药行业的从业人员会选择用美国药典（USP）中
拖尾因子(Tf)
来评价，而其余的分析行业内人员则会选择用
对称因子（As）
来评价。
关于这两个因子的计算，我们之前就有相关的视频介绍，大家可以回顾一下：
其中，拖尾因子Tf=(a+b)/2a，
a和b分别是5%峰高处的左右半峰宽。
对称因子As=d/c，其中c和d分别是10%峰高处的左右半峰宽 。
如果a=b，c=d，那么拖尾因子和对称因子的数值都等于1，也就是该峰不拖尾。
实际工作中，当拖尾因子和对称因子小于2时，这两个值是非常接近的，如下图所示。
先来看看第一个峰（Tf=1.0）和最后一个峰(Tf=3.5)，它们的峰面积虽然是相同的，但是由于最后一个峰拖尾很严重，所以它们的峰高相差三倍。
当我们使用峰高来计算最低检出限时，拖尾峰的负面影响就会比较明显。
当我们对色谱峰进行积分来计算峰面积时，峰的起点和终点通常情况下通过色谱峰的斜率来确定。
色谱峰越拖尾，它的尾部基线越平缓，终点就越难确认。
这一点在基线波动较大时体现的更加突出，那么它就会影响我们积分得到的峰面积。
在药典计算有关物质的相关要求中会提到，峰面积达到主峰面积0.1%的组分都要参与计算。
那么当一些小峰和前面的峰分离度不是很好时，就会容易被隐藏在前面峰的拖尾处从而无法参与计算。
综上所述，拖尾峰会对色谱分析的定性定量结果都会产生影响。
拖尾峰的形成是因为在色谱分离时
出现了一种以上的保留机制
，
并且其中一种保留机制是超负荷的。
在日常分析中大多数情况下会使用反相色谱，以常用的C18柱为例，C18是被键合在载体硅胶表面的，而硅胶是由硅和氧聚合而成的，所以它的表面会出现各种形态的硅羟基。
虽然理想的状态是流动相中的样品只和固定相C18发生作用。而实际上一半以上的硅胶表面并没有被键合上C18，所以硅胶表面会裸露出大量的硅羟基（Si-OH）。
而单独的自由硅羟基会和流动相中的样品发生作用，
形成拖尾。
于是在最近的十几年中，色谱柱供应商致力于生产出高纯度的硅胶载体。由于新型硅胶在无金属离子环境下制造，所以表面不会残留金属离子也会减少拖尾。
另外，硅胶表面尽可能减少自由的硅羟基，未与固定相键合的硅羟基尽可能形成螯合或聚合状态，用来减少拖尾峰的产生。
当色谱柱经历过高温、强酸，或者一些极端使用方法导致
固定相流失较多后
，色谱柱中的自由硅羟基也会变得越来越多，从而更加容易造成拖尾峰
拖尾峰的形成也有可能是因为
柱外的死体积较多
，导致样品在死体积处发生了滞留和扩散。
当样品中出现了
碱性化合物
，碱性基团更容易与色谱柱中硅羟基发生作用形成拖尾峰。
对于过去的自由硅羟基较多的色谱柱，建议在流动相中加入
三乙胺
来抑制拖尾。实验表明三乙胺有非常好的拖尾抑制效果。
另外，由于三乙胺呈碱性，需要大家在使用时考虑色谱柱的ph值耐受范围，某些情况可能需要加入酸性调节剂。
对于新型的表面以耦合和聚合硅胶为主的硅胶载体，我们就很少使用三乙胺来抑制拖尾，而是通过
调整流动相的ph<3
来抑制硅胶的离子化。
当色谱柱柱效降低导致拖尾峰时建议
更换色谱柱。
建议在液相色谱中正确安装并且使用
与您的仪器匹配的管线接头，
以减少死体积的产生。
如果你在分析实验中也遇到了方法开发方面的问题，欢迎来
咨询我们的“大师兄”团队
，我们会尽力帮你答疑解惑。
我们目前支持大部分
主流品牌、常见配置的
液相色谱和气相色谱。
我们也会不定期地把咨询过程中碰到的具有
典型意义的案例
通过微信公众号来
跟大家分享，
与同学们一起提高、共同进步。
如果最后你的问题被我们选为典型案例分享
你还可以获得一份精美的
色谱学堂纪念品
哦~
最后，希望我们的免费咨询活动能够真的帮你解决工作中的问题，也希望大家能够
多多帮忙转发
，让更多人看到我们的活动。
