色谱实验中拖尾因子、对称因子和不对称因子基础理论!
色谱实验中拖尾因子、对称因子和不对称因子基础理论!
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色谱实验中经常会碰到拖尾因子、对称因子和不对称因子三个专业名词,不少色谱工作者对这三个名词不甚理解,有时还会混淆。本文是对色谱中的拖尾因子、对称因子和不对称因子之间的关系和区别简述,供广大同行 探讨,不妥之处,还望指正!
高斯曲线是正态分布中的一条标准曲线 【1】 。色谱实验中的色谱峰在理论上应该符合其分布。因此理论塔板数也是色谱系统适用性一项重要表征。不过,实际上由于仪器死体积的存在,以及仪器部件和固定液对样品的吸附效果等因素,色谱实验中的大多数色谱峰都对高斯曲线分布存在一定的偏离,产生峰的不对称现象。色谱实验中的色谱峰存在前延、对称、拖尾三种形态,因此这种不对称现象更能说明色谱峰形状态。图1中右图是前延色谱峰,左图是拖尾色谱峰。
图 2 高斯曲线
拖尾因子
拖尾因子是用于评价峰形对称性的一个参数。美国药典、欧洲药典和中国药典均对拖尾因子作出了规定。
图 3 色谱峰 USP 拖尾因子计算图
图 4 色谱峰 CP 拖尾因子计算图
不对称因子
不对称因子是用于评价峰形不对称性的一个参数 【3】 ,其与拖尾因子的概念接近。美国药典中从色谱峰的顶点作一条曲线与基线垂直,再于峰高10%处做一条与基线平行的直线,与峰两边的交点和垂线的交点将这条直线分成两条线段,A表示左线段的长度,B表示右线段的长度,不对称因子用As表示,则计算公式为As=B/A。如图5所示。
对称因子
对称因子这个参数比较特殊,各种色谱仪器、各国药典的说法也是不一致的。美国药典中的一种说法是对称因子是不对称因子的倒数(一般很少用) 【4】 。而日本药典和欧洲药典都是对对称因子进行规定,其计算公式和USP拖尾因子是一致的。图6是欧洲药典对对称因子的规定 【5】 。
拖尾因子、对称因子和不对称因子规定范围探讨
结语
不管是拖尾因子、对称因子还是不对称因子,我们的目标都是以其判断色谱峰的对称或不对称性。无论采用哪种参数,只有采用同一种参数比较不同色谱峰峰形
才有实际意义。理论上,药物分析色谱实验中一般都使用拖尾因子来判断色谱峰峰形。而拖尾因子或者与拖尾因子计算方法一致的不对称因子或对称因子都是由各个色谱工作站自动计算而得。因此只要掌握了各个色谱工作站中关于色谱峰峰形判断的标准,就能根本上区分拖尾因子、不对称因子和对称因子,以便合规和准确地以这些参数判断色谱峰峰形。
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