血清中甲醇和乙醇的气相色谱法测定

中华劳动卫生职业病杂志200年2月第23卷第1期 Chin J Ind Hyg Occup Dis,Jmne200vd.23,Nol监测与检验技术血清中甲醇和乙醇的气相色谱法测定刘军生杜书明钱义【摘要】目的建立血清中甲醇、乙醇快速测定的气相色谱方法。方法抽取静脉血10ml,取10ml静脉血,待血液凝固后离心分离血清,取1.0μ血清直接进样,采用玻璃填充柱分离样品中的甲醇和乙醇外标法定量。结果血清中甲醇、乙醇最低检出浓度均为0.50g/ml,线性范围分别为0.005~0.400和0.10~3.95mg/m,回收率分别为98.0%~102.0%和98.0%~103.7%。相对标准偏差(RSD)分别为200%-637%和3.18%~5.83%。结论血清中甲醇、乙醇的气相色谱测定方法能将甲醇和乙醇很好分别测定,可应用于甲醇、乙醇中毒的临床诊断和治疗。【关键词】甲醇,乙醇,血清;测定,气相色谱法职业接触甲醇和乙醇的工人体检、酒后驾车事故责任鉴离度和灵敏度而言,SE54毛细管柱优于不锈钢柱和玻璃柱,定、临床上甲醇或乙醇中毒的诊断治疗,都需要测定其甲醇但因毛细管柱内径小柱效容易降低不宜用作血清经常测定。和乙醇的血液浓度{。我们建立了血清中甲醇、乙醇快速测我们参考有关文献3,从分离度、准确度和能否用血清直接定的气相色谱法,以保留时间定性,外标法定量,操作简便,操作为目的,对401担体(60~80目,85%)玻璃填充柱进行结果准确,能使甲醇、乙醇很好分离。了试验结果在上述条件下,直接用血清1.0进样可以达材料与方法到准确快速分离甲醇、乙醇的目的(图1)。见甲醇、乙醇标仪器与试剂:CC9790型气相色谱仪(浙江温岭福立分样色谱图析仪器有限公司),FD检测器,N3000色谱工作站(浙江大学2.线性范围和检出限:甲醇线性范围为0.50-40.00智能信息研究所),甲醇、乙醇标准液(色谱纯)。mg/ml,乙醇线性范围为10.00-400.00mg/ml,甲醇、乙醇检2.色谱条件:填充玻璃柱(2.0m×3.2mD),填充401出浓度均为0.05mg/ml。甲醇回归方程:y=380x+79.83,r担体(60~80目,85%),汽化室温度200℃,检测器温度2800.9997,乙醇回归方程:y=480x+3542,r=0.9987,此方℃柱温100℃按30℃/min升至210℃,保留2min,柱前压法的灵敏度完全可以满足对临床酒精中毒的诊断和酒后驾01mPa,氢气0.1mPa,空气0.0mPa,高纯氮做载气,衰驶的判断。减5。3.方法的回收率和精密度:配制0.79mg/ml的甲醇和3.标准储备液的配制:准确吸取甲醇0.10m(79mg)、3.95mg/m的乙醇血清标准液各50ml,分别加入到甲醇本乙醇0.50ml(395mg)置于100ml容量瓶中,加血清(取自无底值为0.05mg/m,乙醇本底值为0.25mg/ml的两种标准液未有饮酒史的体检健康者)至刻度配成100ml甲醇含量为中,使甲醇浓度(理论值)分别为0.100.15、0.200.30、0,4079mg/ml,乙醇含量为395mg/ml的混合标准液。mg/ml,乙醇浓度(理论值)分别为0.50、1.002.00、2.503.004.标准曲线的绘制:取标准储备液和不饮酒的正常人mgml,每个浓度准确进样1.0l做6次平行实验。结果表血清配成甲醇含量分别为0.00、0.05、0.10.、0.20、0.40、明:甲醇、乙醇各浓度回收率分别为980%-102%和98,0%060、0.79mg/ml和乙醇含量分别为0.000.25、0.50、1.00、-103.7%;相对标准偏差(RSD)分别为2.00%-6.37%和200300、3.95mg/ml的甲醇-乙醇混合工作液各10.0ml。3.18%-5.83%。准确吸取1.0μd进样。做6次平行实验,分别记录峰面积,取平均峰面积为纵坐标(y),对应的标准浓度(x)为横坐标绘制标准曲线5.样品测定:抽取静脉血1.0ml于试管中,待凝固后以4000r/min离心5min,取血清1.0园进样。记录峰面积,查605050305标准曲线,外标法定量。二、结果与讨论1.毛细管气相色谱法的建立:甲醇、乙醇测定方法很甲醇多2,如化学法、酶法和气相色谱法,但以气相色谱法较简便准确。通用色谱柱为GDx102(顶空法操作),但就其分050者单位:300天津解放军272医院毒检中心(刘军生、杜书时间(t/min)中华劳动卫生职业病杂志200年2月第23卷第1期 Chin J Ind Hyg Occup Dis,June2005.v.23,No,14.血清空白试验:空腹抽取不饮酒的男女各40人静脉0.5h比较,差异无统计学意义(P>0.5),因此血样采集后应血各1ml,按本法色谱条件直接取血清1.0μ进样。实验表在3h内测定,放置时间超过3h逐渐下降,结果偏低。明,不饮酒者血液中也含有微量的乙醇,且无性别差异。对6干扰实验:在1ml空腹静脉血中加进0.10mg/m的甲80名不饮酒的正常人和206名酒精中毒患者血样分析,甲醇和0.50mg/m的乙醇混合标准液离心后取血清首先做甲醇、乙醇正常参考范围分别为0~0.8mg/ml和0.05-8.00醇、乙醇测定,而后将1m血液混匀加入1md冰冷双蒸水使mg/m(按95%可信限计算),酒精中毒乙醇含量一般为50~其溶血然后配制成含血红蛋白5、10、20、40gL的溶血样品,350mg/ml对于因酗酒引起的酒精中毒,血清乙醇含量明离心后分别取1d上清液进样。结果显示,随着溶血程度加显增高,对常年接触甲醇的工人,应做动态的甲醇浓度观察,大,甲醇、乙醇含量逐步增高,说明溶血对该方法有明显干扰。甲醇浓度≥20mg/m应诊断为中毒。有资料报道甲醇中毒患者血清甲醇量>20mg/ml,酒精中毒患者血清乙醇量>50mg/ml甲醇、乙醇中毒个体耐受性差异很大,本次报道的正1李影林,卢淑文,中华医学检验全书,北京:人民卫生出版社1997.3216-3218常参考值和中毒量范围与有关资料报道基本一致13。2张黎军,仲翠莲气相色谱法在甲醇和乙醇中毒诊断中的应用5.样品稳定性:将做回收实验所用的5个浓度的甲醇、乙中华预防医学杂志,200034:52533李焕德,许树梧.急性中毒毒物检测与诊疗,湖南:湖南科学技醇血清标准液放置0.5、1.0、2.0,3.04.0h分别测定其含量。术出版社,2000.450605当样品放置室温(25℃)4h时,甲醇、乙醇测定结果与前0.5h(收稿日期:2003-1203)结果比较,差异有统计学意义(P<0.01)。3h测定结果与前(本文编辑:杨德一)细菌生化鉴定和药物敏感性检测试剂盒的研制邢冬红陈军生孟颖胡志东刘晓春刘毅华【摘要】目的研制细菌生化鉴定与药物敏感性测定两项试验同步进行试验的试剂盒,达到简易快速诊断的目的。方法根据美国临床实验标准化委员会(NCLS)抗生素最低抑菌浓度(MC)测定法规选择氨苄霉素、头孢唑啉庆大霉素、丁胺卡那霉素、氧哌嗪青霉素、妥布霉素、头孢噻吩舒氨新、头孢哌酮、头孢三嗪和环丙沙星共12种抗生素和大肠杆菌(ATC2592)、伤寒和鼠伤寒沙门菌、黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌,分离自门诊及住院患者的大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、阴沟肠杆菌等共97株。取待测菌24h培养物,接种普通肉汤,35℃孵育4~6h,用%6孔接种器蘸取菌液与检测板对合接种。于35℃孵育18-24h后观察结果。分别用传统法(生化鉴定试验法、药敏试验琼脂稀释法)作对照试验。结果试剂盒法与试管法结果的符合率为954%,用试剂盒法与琼脂稀释法平行测定12种抗生素对50株菌种的MC,两种方法MC值符合率为753%,在±1稀释度范围内的符合率为95.8%结论釆用试剂盒进行试验可以满足临床诊断需求【关键词】细菌鉴定;测定试剂盒细菌生化鉴定与药物敏感性测定是细菌学检验中两个氨新、头孢哌酮、头孢三嗪和环丙沙星分别为市售商品抗生重要组成部分,长期以来作为两个独立试验分别进行。近年素注射剂来,国外已有将两项试验合二为一同步进行的商品化试剂盒菌种来源:(1)标准菌种:大肠杆菌(ATCC2592)、伤供应临床,达到简易快速诊断的目的,但国内尚无类似产品寒和鼠伤寒沙门菌、黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌购自卫生部问世。本研究旨在解决这一问题,填补国内空白药品生物制品检定所。(2)临床菌株:分离自天津医科大学材料与方法总医院2000年5~7月门诊及住院患者,包括大肠杆菌、肺(一)材料炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、阴沟肠杆菌等共97株。1.聚苯乙烯塑料板:12孔x8孔,孔容量0.4ml。(二)方法2.抗生素:根据美国临床实验标准化委员会( NCCLS)抗1.检测板的制备:根据 NCCLS药敏试验MC分界点生素最低抑菌浓度(MC)测定法规选择12种抗生素,其中表确定12种抗生素的稀释范围(每种6个稀释度),原液氨苄霉素、头孢唑啉、庆大霉素、丁胺卡那霉素、氧哌嗪青霉浓度为最高浓度的10倍。配制后分装,-20℃保存备用。在 Minibact鉴定系统3配方基础上并参照其他鉴定系素、妥布霉素购自卫生部药品生物制品检定所;头孢噻吩、舒统进行改进。共包括ONPG、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸苯丙氨