正交试验优选了哥王的提取工艺

208中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs第38卷第2期2007年2月正交试验优选了哥王的提取工艺陈爽,邵曼莉,杨振宇,杜智敏(哈尔滨医科大学附属二院临床药物研究所,黑龙江哈尔滨150086)摘要:目的研究影响了哥王提取的各种因素,确定最佳提取工艺。方法采用正交试验,考察乙醇提取次数、加醇量、醇体积分数、提取时间4个因素的影响,以乙醇浸膏收率、总黄酮的质量分数、抗炎效果为指标优选了哥王的乙醇提取工艺。结果在所考察的因素中,对乙醇浸膏收率、总黄酮的质量分数、抗炎效果影响程度均为醇体积分数>提取次数>提取时间>加醇量。3方面因素,以抗炎效果为主要指标,确定最佳提取工艺为A1BC2D2,即75%乙醇10倍量提取2次,每次4h。结论本实验采用的方法和指标适合于了哥王的提取关键词:了哥王;总黄酮;抗炎;正交试验中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:0253-2670(2007)02-0208-03Optimum extracting technology of wikstroemia indica by orthogonal testCHEN Shuang, SHAO Man-li, YANG Zhen-yu, dU Zhi-min(Institute of Clinical Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150086, ChinaKey words: Wikstroemia indica (L.Meyer; total flavones; antiinflammation; orthogonal test了哥王 Wikstroemia indica(L.)C.A. Meyer恒温干燥箱(上海市跃进医疗器械一厂)。始载于《岭南采药录》,为瑞香料荛花属植物,苦寒、昆明小鼠(哈尔滨医科大学动物中心)。微辛、有毒,清热解毒、化痰散结、通经利水,可用于2方法与结果治疗扁桃体炎、腮腺炎、淋巴结炎、支气管炎、哮喘、2.1因素水平的确定:采用L(3)设计实验,以不肺炎、风湿性关节炎、跌打损伤、麻风、闭经、水肿等同倍数的乙醇、提取次数、醇体积分数、提取时间为疾病1)。了哥王含有小麦黄素羟基芫花素酸性树指标进行比较,因素水平安排见表1。脂、挥发油、皂苷、多糖类、黄酮类等成分。其中黄酮表1因素水平类成分有抗菌、抗炎、镇痛等作用2;)。目前文献报道Table 1 Factors and levels了哥王提取溶剂有水、石油醚、乙醇、甲醇等。了因素哥王对二甲苯所致小鼠耳部炎症有抑制作用1。为水平A醇提次数B加醇量C醇体积分D提取时间探索药材有效成分提取的最大化,本实验用乙醇提/次/h取,乙醇浸膏收率、总黄酮质量分数、抗炎效果为指4标,考察影响了哥王提取的主要因素,寻求最佳的提取工艺条件。2.2乙醇浸膏收率的测定:取了哥王粗粉50g,按1材料、试剂与仪器正交表中规定的条件进行回流提取,提取液滤过,回了哥王购自安徽亳州敬德药业公司,经哈尔滨收乙醇,浓缩成稠膏状,干燥至恒重,得干膏,称质医科大学附属二院临床药物研究所金瑞教授鉴定为量,计算醇浸膏收率。瑞香科荛花属植物了哥王W. indica(L.)C.A.2.3总黄酮的测定Meyer,取茎干燥粉碎后备用。芦丁对照品购自中国2.3.1供试品溶液制备:精密称取正交试验下的干膏药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。1g置锥形瓶中,用石油醚超声脱脂3次,每次2h,弃紫外可见分光光度计(日本岛津UV-2201去石油层。剩余残渣挥干溶剂加入甲醇45mL密型);超声波仪(昆山市超声仪器有限公司KQ2200E闭放中国煤化上放冷,滤过滤液置于型);电子分析天平(日本岛津AEU-210型);电热50mCNMHG得供试品溶液收稿日期:2006-04-12作者简介:陈爽(1980—),女,河南鹤壁人,硕士研究方向:新药研发与药代动力学通讯作者杜智敏Tel:(0451)86605353 E-mail:dzm1956@126,com中草嘴 Chinese Traditional and Herbal Drugs第38卷第2期2007年2月2.3.2对照品溶液的制备:精密称取120C干燥恒法测定吸光度,按回归方程计算总黄酮的质量分数重的芦丁对照品10mg,加甲醇溶解并定容至50mL2.4抗炎效果的测定:采用二甲苯致小鼠耳部炎症量瓶中,即得0.2mg/mL的对照品溶液试验?。小鼠18~22g,雄性,100只,随机分为102.3.3标准曲线的制备:分别取对照品溶液组,每组10只。其中9组为实验组,分别ig给予提2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL于25mL量瓶取的醇浸膏,药物溶液浓度为8%,剂量为中,加5%亚硝酸钠1.0mL,静置6min,加10%硝1.6g/kg,给药容积为0.4mL/20g;另1组为对照酸铝1.0mL,静置6min后,加4%氢氧化钠10.0组,给予等体积的蒸馏水。每天讴g给药一次,连续mL,加甲醇至刻度,摇匀,静置15min,进行全波长d。末次给药后1h,每鼠右耳两面均匀涂100%二甲扫描,在510m处均有最大吸收。以该波长处吸光苯致炎剂0.02mL致炎,左耳作对照。1h后处死小值为横坐标,样品质量浓度(mg/mL)为纵坐标,得鼠,沿耳廓基线剪下两耳,用直径9mm打孔器打下标准曲线回归方程为C=1.9649A+0.0035双耳同一部位圆片,电子分析天平称重,计算肿胀度0.9997,线性范围为0.4~2.4mg/mL(肿胀度=右耳片质量一左耳片质量)。对9组实验2.34精密度试验:分别精密吸取的供试品溶液组与蒸馏水组肿胀度进行t检验1.0mL,按实验方法操作测定5次吸光度,结果2.5正交试验结果与分析:试验结果见表2。方差RSD分别为2.17%分析结果见表3。可见各组乙醇提取物对二甲苯所2.35稳定性试验:取供试品溶液室温放置4、8、致小鼠耳部炎症都有抑制作用,与蒸馏水组比较,第12、16、20、24h测定吸光度,RSD为1.29%,说明供35、7组有显著性差别(P<0.05),其余各组有非常试品溶液在24h内基本保持不变。显著性差别(P<0.01)。由表2的R值看出各因素2.3.6回收率试验:精密吸取供试品溶液0.5mL对浸膏收率、总黄酮的质量分数、肿胀度的影响程度于25mL量瓶中,加入芦丁对照品溶液顺序均为醇体积分数>提取次数>提取时间>加醇(0.2mg/mL)0.5mL,制备供试品溶液,测定吸光量。方差分析表明:醇体积分数对浸膏收率、肿胀度度,计算得平均回收率分别为99.12%(RSD为有显著影响,而其余3因素对结果影响不显著。以抗1.66%)(n=5)。炎作用为主要指标,确定提取最佳条件为2.3.7样品测定:精密吸取供试品溶液1.0mL,依A1B3CD2,即75%乙醇10倍量提取2次,每次4h表2提取工艺正交设计试验结果Table 2 Results of extracting technology by orthogonal test实验号浸膏收率/%总黄酮/%肿胀度(x±s)/mg12.242.5士1.210.107.592.9±1.0231231235.183.3±1.017.3210.252.3士1.53.2±1.2113.482.5±1.4蒸馏水组4.5±1.5浸膏收率37.3840.6843.0438.5039.2042.86R16.004.86总黄酮28.1626.0324.25K24.23中国煤化工肿胀度K8.17.6CNMHGK1.00.5与蒸馏水组比较:P<0万方数P