锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性

热带作物学报2011,32(2):293-29Inese journal of Tropical Crops锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性苟亚峰12,李志刚1,孙世伟1,桑利伟',刘爱勤121中国热带农业科学院香料饮料研究所,海南万宁5715332国家重要热带作物工程技术研究中心,海南儋州571737摘要采用菌丝生长速率法和组织测定法,测定锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌、香蕉枯萎病菌、芒果炭疽病菌和芒果蒂腐病菌的抑菌活性以及20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒癌病的保护作用。结果表明,锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌具有较好的抑菌活性,在浓度15mgmL时抑菌率为994%,EC为06875mgmL;对芒果炭疽病菌的抑菌率为6375%,但对芒果蒂腐病菌无抑菌活性。20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病表现出较好的保护效果,当稀释100倍和50倍时抑制率分别为7279%和7891%。关键词锡兰肉桂提取物;胡椒瘟病菌;抑菌活性;保护效果中图分类号S4822文獻标识码AStudy the inhibitory Activity of Cinnamomumzeylanicum Bl Ethanol ExtractionGoU Yafeng, LI Zhigang, SUN Shiwei, SANG Liwei, LIU Aiqin+2I Research Institute of Spice and Beverage Crops, CATAS, Wanning Hainan 5715332 State Engineering and Technology Research Center for Importantpica Crops, Danzhou Hainan 571737ity of Cinnamomum zeylanicum B1. ethanol extraction against Phytophthorcapsici, Fusarium oxysporum f sp. cubense, Colletotrichum gloeosporioides and Botryodiplodia theobromae by mycelium growthrate method and in viva. The results indicated that Cinnamomum zeylanicum Bl ethanol extraction had good inhibitoryactivity to Phytophthora capsici. At the concentration of 1.5 mg/mL, the inhibitory rate were 91.949, ECo was 0.6875me/mL 63.75% to Colletotrichum gloeosporioides but no inhibitory effect to Botryodiplodia theobromae. The protective efficacyof 20% Cinnamomum zeylanicum ME was 72.79% and 78.91% respectively at the concentration of 100x and 50xKey words Cinnamomum zeylanicum B1. extraction; Phytophthora capsici; Inhibitory activity: Protective efficacydoi103969/isn.1000-2561,20110021锡兰肉桂( Cinnamomum zeylanicum Bl)为樟菌、香蕉枯萎病菌、芒果炭疽病菌和芒果蒂腐病菌科樟属植物,在中国广东、广西、海南和台湾均有为供试病原菌,测定锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑栽培。锡兰肉桂的桂皮是一种古老的香料,最初发菌活性及其微乳剂的防治效果,为锡兰肉桂杀菌剂现在埃及木乃伊的尸体中,其树皮具有防腐、健的开发应用提供理论依据。胃、抗癌、杀菌、杀虫、杀螨等多种活性。陈青等报道锡兰肉桂丙酶提取物对棉铃虫和皮氏叶螨具1材料与方法有较强的毒杀作用,并分别对其体内多种解毒代谢11材料酶具有明显的抑制作用。冯岗等测定了锡兰肉桂1.L.1供试病原菌胡椒瘟病菌( Phytophthora提取物对集中害螨的杀螨活性,表明锡兰肉桂叶乙 capsici)由中国热带农业科学院香料饮料研究所植醇提取物对朱砂叶螨、皮氏叶螨、比哈小爪螨均有保中心提供;香蕉枯萎病菌( Fusarium oxysporum f毒杀作用。 Egbert等研究发现锡兰肉桂精油具有sp. cubense)由中国热带农业科学院海口实验站提广谱的抗菌活性,对供试曲霉属菌株A.nigr,A.供;芒果炭疽病菌( Colletotrichum gloeosporioides)jas和A. fumigatus等生长具有较好的抑菌活性。和芒果蒂腐病菌( Botryodiplodia theobromae)由中国但目前国内外有关锡兰肉桂提取物的抑菌活性报道热带农业科学院环境与植物保护研究所提供。较少,为进一步深入了解锡兰肉桂提取物的抑菌活1.l2羋故把兰肉桂叶于2009年中国煤化性,本文以几种主要热带作物上典型病害胡椒瘟病10月}饮料研究所。CNMHG收稿日期:2010-05-12修回日期:20100920基金项目:公益性行业科研专项(No.200903024005),海南省自然科学基金项目(No.309055)资助作者简介:苟亚峰,女,研究实习员,研究方向:檀物源农药研究开发。·通讯作者:刘爱勤,E-mil:lag3680@163com热带作物学报第32卷12方法1.2520%锡兰肉桂微乳剂保护效果测定参照12.1锡兰肉桂无水乙醇提取物的制备供试植冯俊涛門方法进行。采摘健康、新鲜、叶龄相同的物样品的前处理和提取均参照冯俊涛等的方法,得胡椒嫩叶(直径不大于9cm),洗净放于吸水纸上无水乙醇提取物浸膏,于冰箱中(04℃)保存备用。晾干;将20%锡兰肉桂微乳剂稀释为50倍和10012.220%锡兰肉桂微乳剂的制备称取1.21中倍,对照药剂烯酰,吗啉WP配制为100倍和制备的锡兰肉桂无水乙醇提取物2g,溶于2g无2000倍,以及不含有效成分的空白对照,共5个水乙醇和甲醇的混合溶液中(无水乙醇:甲醇=2:处理。先于真叶上施药,晾干药液后,用昆虫针1),充分搅拌,然后加入乳化剂Twen-201g,搅在叶子正面等距离的位置刺伤,再用接种针将3拌均匀后,在高剪切机的作用下,逐步加入自来水块直径为06cm的胡椒瘟病菌外层菌饼接在相应5g,在常温搅拌一定时间后停止,静置,得20%刺伤处,每皿1片真叶,正面朝上放于培养皿锡兰肉桂微乳剂。中,然后于人工气候培养箱(25-28℃)中培养1.2.3抑菌活性测定采用菌丝生长速率法。5d后测量各处理的病斑生长直径。按下式计算保称取03g锡兰肉桂无水乙醇提取物浸膏,先用护效果:1mL无水乙醇溶解,再用无菌蒸馏水稀释制成浓病斑生长直径=测量直径0.6度为15mmL和6mmL的无水乙醉提取物。培抑制率=对对照病魔牛长直径处理班生长直径养基融化并冷却至50℃左右,将4mL不同浓度的锡兰肉桂无水乙醇提取物分别与36mL瓶的PDA×100%培养基混合,摇匀,迅速倒入3个直径为9cm的1.26数据分析用 Microsoft excel软件进行整培养皿中,待其凝固后,取菌落直径为06cm,培理;经DPS统计软件进行多元分析;将菌丝生长养好的各供试病原菌的外层菌块放置于培养皿中抑制率换成几率值(y)、药剂浓度转换成以10为底央,以加入等体积无水乙醇灭菌水的PDA培养平的对数值(x),作毒力回归直线,求出毒力回归方板为对照,每个处理3个重复。接种后,在人工气程(y=a+hx)和相关系数(r),计算抑制中浓度候培养箱(25-28℃)下培养5d后,采用十字交叉(EC)法分别测量菌落直径,求其平均值,按下式计算抑菌率。2结果与分析菌落直径ε测量菌落直径平均值-0.62.1锡兰肉桂无水乙醇提取物对供试病原菌的抑抑菌率=对照菌落直径处理菌落直径×00%菌活性对照菌落直径采用冷浸的方法制备锡兰肉桂无水乙醇提取物1.24宣内抑菌每力(EC)测定将1.2.3中筛选浸膏的提取率为2483%。从表1可见,不同浓度出抑菌活性较好的病原菌作为供试病原菌,测定的锡兰肉桂无水乙醇提取物对各供试病原菌菌丝生锡兰肉桂无水乙醇提取物对其离体抑菌毒力。将长具有不同程度的抑菌活性。当锡兰肉桂无水乙醇锡兰肉桂无水乙醇提取物分别稀释为20、15、提取物质量浓度为15吗g千样/mL时,对胡椒瘟病1.0、0.6、0.3mg/mL的浓度,按一定比例加入到融菌表现出较强的抑制活性,抑菌率9194%;对芒化好的PDA培养基中,参照1.2.3的方法测定,每果炭疸病菌也具有一定的抑菌活性,抑菌率为处理重复3次,用最小二乘法计算毒力回归方程及6375%;对香蕉枯委病菌抑菌活性较差,仅为抑制中浓度(ECy)。4103%;对芒果蒂腐病菌无抑制作用。表1锡兰肉桂无水乙醇提取物对供试病原菌的抑菌率测定结果15mg/mL浓度处理06mg/ml浓度处理供试病原菌平均菌落直径/cm抑菌率/%平均菌落直径/cm抑菌率胡椒瘟病菌( P. capsici)9194±0084240.32±1.8957a香蕉枯菱病菌(F. oxysporum)4103±0中国煤化工15148b芒果炭疽病蘸( C. gloeosporioides63.75:0.3CNMHG85油芒果蒂腐病菌(B. theobromae)8.23说明:“”表示提取物对芒果蒂腐病菌菌丝生长无抑菌活性;菌落直径指的是3次重复的平均值;数字后字母相同表示无显著差异,不同表示差异达显著水平。下同。第2期苟亚峰等:锡兰肉桂无水乙醇提取物的抑菌活性22锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌的室瘟病菌表现出较强的抑菌活性,进一步测定不同浓内抑菌毒力度的锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌菌丝生从表1可见,锡兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒长的室内抑菌毒力(ECs),结果见表2。豪2锦兰肉桂无水乙醇提取物对胡椒瘟病菌菌丝生长的室内抑菌毒力测定结果供试药剂供试浓度/(mgml)抑菌率/%毒力回归方程y=ax+b)相关系数()ECy(mgmL)98.39a8548a锡兰肉桂无水75.27ay=4l1x666130975006875乙醇提取物45.70b03645c2320%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病的保护效果剂稀释50倍和100倍时,防效分别为7891%和结果表明,20%锡兰肉桂微乳剂对胡椒瘟病的7279%;对照药剂烯酰,吗啉WP稀释1000倍和保护效果明显低于化学杀菌剂烯酰·吗啉WP,但2000倍时防效分别为100%和91%6%,见表3。也表现出较强的保护效果。当20%锡兰肉桂微乳表3锯兰肉桂无水乙醇提取物对胡撤瘟病的防效测定结果稀释50倍稀释100供试药剂平均菌落貞径/m防效/%平均菌落直径/cm0%锡兰肉挂ME051778917279烯酰吗啉WP3讨论外,还有几种黄酮类化合物。由于生物碱类、萜本研究结果表明,锡兰肉桂无水乙醇提取物对类、黄酮类、香豆素、木脂素、甾类及精油类等化胡椒瘟病菌具有较好的抑菌活性,抑菌率达合物叫都是主要的植物源杀菌剂有效成分,因此91%4%;对芒果炭疽病菌的抑菌活性一般,抑菌锡兰肉桂中具体的抑菌活性成分还有待进一步研率为6375%;对芒果蒂腐病菌无抑菌活性。有研究。活性成分的确定对该物质的杀菌机理具有重要究发现肉桂丙酮提取物在20mgm的浓度下,对意义。芒果采后的2种病原菌的抑菌率可达100%,具有鲁考文献较好的抑菌活性,这与本试验结果有相似之处。田陈實,軍丽金,杨卫帆,等兰肉桂丙酮提取物对棉铃虫的毒由组织法试验结果表明,20%锡兰肉桂微乳剂的保力及其代谢酶活性的影啊]农药学学报,204,6(1):11-15护效果低于化学药剂烯酰.吗啉WP,但治疗效果四2陈青,杨旦帆,覃丽金,等锡兰肉桂丙酬提取物对皮氏叶螨的有待进一步研究。由于该微乳剂为植物源杀菌剂毒力及其代谢酶活性的影唧中国生态农业学报,2005,13(4):对环境污染小,对作物靶标安全,不易产生抗药性29-31等优点,因此,具有进一步开发利用的潜能。13]冯岗,张静,曲晓,等锡兰肉桂的杀蜻活性及有效成分门热带作物学报,2010,31(3):474479目前,有关锡兰肉桂杀虫、防腐、抗癌活性等1 Egberto Santos carm, Edeltrudes de oliveira,, Evandro Leite方面的研究很多。 Jayaprakasha等研究表明锡兰肉de Souza, ef a. Effet of Cinnamomun Zeylanicum Blume桂果实提取物可作为抗氧化剂和抗诱变剂应用于食essential oil on the growth and morphogenesis品生产中; Ichii等分别在离体和活体条件下测定potentially pathogenic Aspergillus species [ ] Brazillian Joumal了锡兰肉桂叶精油的杀螨活性,发现在离体条件下,当锡兰肉桂叶精油的浓度在016%-10%时对5中国煤化工申蘸话性筛选试验几西CNMHG29(2):668兔痒螨具有较好的杀螨活性,但对具体的杀螨活性1方中达,病研万团M北暴:甲国农业出版社,198成分未见研究报道。有报道锡兰肉桂中除了含有抗7慕立义植物化学保护研究方法M北京:中国农业出版社,PAF活性的丁香酚、大豆脑苷I、山奈酚等化合物1994:798l-296热带作物学报第32卷高兆银,胡美姣,李敏,等.中草药提取物对2种果采后for in vitro control of Colletotrichum loeosporioides, causal agent病原繭的抑菌活性热带作物学报,2008,29(1):83-88of anthracnose disease in tropical fruits U Pest Manag Se[9)Jayaprakasha G K, Negi P S, Jena B S, et a. Antioxidant and2003,591245-1249extracts[]. Joumal of Food Composition and Analysis, 2007.20330-336[1o] Fichi G. Flamini G. Zaralli L J, et a. Efficacy of an essentialoil of Cinnamomu zeylanicum against Psoroptes cuniculi U).Phytomedicine,2007,14(23):227-231[11] Almada Ruiz E, Martinez Tellez M A, Hem ndez Alamos MM,et al. Fungicidal potential of methoxylated flavones from citrus责任编辑:高静中国煤化工CNMHG