茯苓多糖提取工艺的优化

1362007,Vo!.28,No.05食品科学※工艺技术茯苓多糖提取工艺的优化陈莉,郁建平(贵州大学生命科学学院贵州贵阳摘要:本实验比较了茯苓多糖的几种提取工艺。结果表明,利用酶解热水浸提法提取茯苓多糖,能显著提高茯苓多糖的浸岀率,是热水浸提法的2.32倍,并且具有浸提时间缩短,提取祭件温和,所得茯苓多糖立体结构不易被破坏、生物活性髙等优点。同时还确定了酶解十热水浸提法提取茯苓多糖的最佳工艺条件关键词:茯苓;多糖;植物复合酶;提取工艺Qtinizati on of Ful i ng( Pori a coccus)Pol ysacchari des Extracti on Technol ogyCHEN Li, YU Ji an- pi ng*Co l ege of Life Sci ence, Gi zhou Uhi versi ty, Gi yang 550025, Chi na)bstract: This paper conpared several Fu ing( Pori a coccus) extracti ng techni ques. The resul ts shoved that the Fu ingpol ysacchari des extractingtechnol ogy that conbi nes enzymol ysi s w thhot wat er extracti oncani nprovethe extracti grat e ofFu i ngpdl sacchari dessi gri fi carly, ar 2 32ti nes of that of hot wat er extraction Aditi onal l y, thecorbi nedextractingt echa ogyhastheadvart ages: shorter ngextracti ngperi od ml dext racti ngcad ti onsfar st ab estereoscapi cstructureandhi ghbi ol og calactivi ty of extract ed Ful i ng pol sacchari des. The paper al so det erm nes the opt i umprocessi ng condi ti ons for Fu i ngpd sacchari des extracti onwiththeconbi nedext racti ngt echo ogyKey wor ds por i a coccus pol sacchari des veget abl e conpound enzynes extract i ng technol ogy中图分类号R842文献标识码A文章编号1002-663200705013604茯苓( Por i a coccus wol f)为多孔菌科真菌茯苓的干燥块状茯苓(经鉴定为茯苓)贵阳市花果园农贸市菌核。是常用的传统中药,具有渗湿、健脾、利尿场;植物精提复合酹(主要成分为纤维素酶、果胶酶、等功能。茯苓多糖( pachyman)具有抑制肿瘤生长,调节中性蛋白酶等)宁夏夏盛植物精提复合酶事业部;蒽机体免疫等功能。酮上海化学试剂公司3,5-二硝基水杨酸上海化学近年来茯岺多糖的提取一般用热水浸提法、碱液浸试剂公司。提法、酸液浸提法等先得到茯苓多糖的粗品再通过纯化1.2仪器工艺得到茯苓多糖的精品。紫外分光光度计北京普析通用仪器有限公司高本实验将通过对茯苓粗多糖提取工艺的的比较研速离心机北京医用离心机厂。究,以探求最佳的提取工艺。热水漫提法时间长且多13方法糖提取率低,而酸碱液漫提法漫提程序较繁琐,浸提1.31茯苓多糖含量测定方法的确定条件较剧烈,极易破坏多糖的立体结构,使其生物活吸收光谱的确定:分别取葡萄糖标准溶液和茯苓多性受到限制。有关酶法提取茯苓多糖的具体方法很少见糖提取液1.0m,置10m带塞试管中,快速加入0.2%蔥报道。本实验采用复合酶十热水浸提法提取茯苓多糖,酮试剂4.0m,水浴10mn,以蒸馏水为空白参比,在使提取时间缩短,多糖提取率提高,同时能保持茯苓200~700m)长范围内用紫外分光光度计进行扫描。实多糖的生物活性,适合于茯苓多糖在医药和保健品方面验结果表明,茯苓多糖和葡萄糖的最大吸收峰均在的开发研究620nm处。经过重现性、稳定性、回收率试验,确定1材料与方法选用蒽酮一浓硫酸法作为茯苓多糖含量的测定方法。标准曲线的回归方中国煤化工R=0.994211材料、试剂1.32还原糖CNMHG收稿日期20061130通讯作者作者简介:陈莉(1975-),女,硕士研究生,主要从事营养生化与检测技术研究。※工艺技术食品科学2007,Vol.28,NO.05137采用DNS法测还原糖含量断上升,当达到90mn时浸出率已接近最大值。再延长133酶解+热水浸提法工艺流程酶解时间,提取率变化不大,而且酶解时间过长会导致茯苓粉碎加水漫泡30mn(复合酶加水在40℃活化多糖降解、杂质大量溶出。所以酶解时间定为90mn10mn)→加入复合酶在48℃(p}5)浸提90mn→中和后加213酶解温度的影响水再升温至80℃继续浸提90mn→乙醇醇沉→无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤→茯苓多糖粗品→去蛋白质大孔树脂吸附纯化→洗脱液浓缩后透析→透析液浓缩后冷冻干燥→纯化茯苓多糖2结果与分析21影响酶解过程的因素影响酶法提取茯苓多糖的因素主要有:酶加入量、酶解液pH值、酶解温度、酶解时间、固液比等。本04244464850525456酶解温度(℃实验就酶解过程中不同因素对茯苓多糖提取率的影响分图3酶解温度的影响别作了比较。Fig 3 Effects of enzymol ysi s tenper ure211酶加入量的影响从图3中可以看出,48℃是最佳酶解温度,有利于酶效的充分发挥。0.6214酶解液pH值的影响0.5030200204060811.21.41.6酶加入量(%海加入量的影响FiEffects of aunt of enzyne added4464.85052545658从图1中可以看出,随着酶加入量的增大,多糖的浸出率也在上升,当酶加量达到1%时,浸出率达到图4酶解液pH值的影响最大值。酶加量过大,会导致提出多糖的降解,反而Fi g. 4 Effects of enzymol ysi s l i qui d pH val ue使多糖浸岀率降低。所以确定最佳酶加量为1%。从图4中可以看出,酶解液最佳pH值为5.0,此212酶解时间的影响时酶解可以达到最佳效果。215酶解液中固液比的影响0.706003米0.55}◆020053045607590105120135酶解时间(mn图2酶解时间的影响g 2 Effects of enzymol ysi s tine中国煤化工从图2中看出,随酶解时间的增长多糖的浸岀率不CNMHGtio1382007,Vo.28,No.05食品科学※工艺技术从图5中可以看出,当固液比达到1:10时,多糖浸出率的上升趋于平缓,为了减少后继浓缩过程的工作量,在不明显影响多糖浸出率的情况下,浸出液体积越少越好,所以确定酶解过程的固液比为1:10坐0.2522影响热水浸提过程的因素酶解+热水浸提法全过程为:酶解反应和80℃热水浸提两个阶段。两个阶段都很重要。酶解后再用热水浸提的过程中,主要讨论了浸提时01020304间、温度、固液比对茯苓多糖浸出率的影响。加水倍数221酶解后热水浸提温度的影响图8酶解后热水浸提加水量的影响Fi g 8 Effects of the anount of hot water added afte0.45enzym增加,当固液比达到1:40时浸出率上升趋于平缓,考虑到浓缩过程的工作量,在不明显影响多糖浸出率的情0.20况下,浸岀液体积越少越好,所以确定酶解后热水浸提时的固液比为1:40。0.05224茯苓粗多糖各提取方法效果比较0.00为比较不同提取方法对茯苓多糖得率的影响,由实05060708090100验可知:酶解+热水浸提法提取茯苓多糖,浸提时间缩短近一半,提取率是热水浸提法的2.32倍。另外,酶图6酶解后热水浸提温度的影响Fig 6 Effects of water tenpret ure after enzymol ysis解+热水浸提法全过程为酶解反应和80℃热水浸提两个阶段。第一阶段主要作用是酶解细胞表面结构及胞间连从图6中可以看岀,多糖浸岀率随温度的上升而增接物,并伴有部分糖类物质溶出。第二阶段通过提高加,80℃时浸出率上升趋于平缓,考虑到温度过高易温度后,既具有灭酶作用,同时使溶于热水的胞内多造成多糖的降解,故酶解后热水浸提温度确定为80℃。糖浸岀率增加,两个阶段都很重要。222酶解后热水浸提时间的影响表1粗多糖得率的比较0.45Tabl e 1 Conpari son of extracti ng rat es of crude Fu i ng粗多糖得率(%0.35热水浸提法酶解法酶解十热水浸提法0.103结论0.0531茯苓中除了含有多糖外,还含有蛋白质、纤维素和果胶等物质,实验中所用植物复合酶是主要由纤维素浸提时间(h酶、中性蛋白酶、果胶酶等组成的混合酶系。纤维素酶解后热水浸提时间的影响Fig 7 Effects of ext racti ng ti ne af ter erzyml ysis酶能降解茯苓的细胞壁,从而加速茯苓多糖的浸岀;蛋白酶可降解茯苓中所含蛋白质,同时降低了它们与原料从图7中可以看出,当热水浸提时间达到90mn时,的结合力,有利于多糖的浸出;果胶酶能水解果胶促进多糖浸岀率不随时间的延长而显著增加,考虑到提取过多糖溶岀到浸提液中。使用酶解法可以在较低的温度下程温度较高,时间太长会影响所提多糖的活性和增加多提高多糖的提取率。由于酶作用的专一性,不会破坏糖中杂质的溶岀,所以确定酶解后热水浸提时间为茯苓多糖的结构。90m ne32酶解+热水浸提法提取茯苓多糖的优点:(1)茯苓223酶解后热水浸提过程中加水量的影响多糖的漫出率H中国煤化工杂质含量低、从图8中可以看岀多糖浸出率随加水倍数的上升而提取液粘度低CNMH°吉构不易被破※工艺技术食品科学2007,Vol.28,NO.05139五味子叶中总黄酮最佳提取工艺研究郑春英,李宏涛,陆欣媛,周东坡*(黑龙江大学生命科学学院,微生物黑龙江省高校重点实验室,黑龙江哈尔滨150080)摘要:用单因素试验和正交试验考察了料液比、提取时间、提取温度及乙醇浓度对五味子叶总黄酮含量的影响。结果表明:料液比为1:35,75%乙醇在85℃超声提取60mn,为最佳条件;此条件下,7月份和8月份五味子叶的总黄酮平均含量分别为6.0285m/g和8.0714g/g关键词:五味子叶;总黄酮;最佳提取工艺St udy on Qti noumExtracti ng Process of Tot al Fl avones fromSchi sandra chi nensis( Turcz. )Bai I I LeavesZHENG Chun-yi ng, LI Hong-tao, LU Xi n-yuan, ZHOU Dong-po(Hei l ong i ang Provi nce ui versi ty Key Labor at ory of Mcrobi d ogy, Col l ege of Life Sci ence,Hei longj i ang ui versi ty, Harbin 150080, Chi na)Abstract: The opt i nmmext racti ng cond ti ons of fl avanes i n Schi sandra chi nensis (Turcz. )Bai l l l eaves werei westi gat ed bysing ef act ar test withtheorthogonal test desi gn thera nf act ors af fecti ngthecartert of total fl avanes extract edfraSchi sancahi nesis(TurCz. )Bai ll l eaves veretherat eri al-li qu drat i a theextracti ont enper at ure, theextracti onti ne andthe al cohdconcertrati on The resu ts showedthat the opti mondi ti ons were: &5C, 60mn 75%al cohd and nat eri al-li qi drati o 1: 35.uder thecad ti ons, thecorterts of total fl avones i nSchi sandrachi nesis(Turcz. )Bai l l l eaves cd l ectedi nboth]u yandAgst6. 0285ng and8, 0714ng/g respecti vel yKey wor ds Schi sandr a chi nensis (Turcz. )Bai ll l eaves tot al fi avones opt i nomextracti ng process中图分类号TS255.1文献标识码A文章编号1002-6630(200)05013904五味子 Schi sandr a chi nensis(Tuz.)Bi,习称北前,关于五味子叶中总黄酮提取工艺及含量测定等方面五味子”η,木兰科植物,是药食同源功能性保健食的研究未见报道。为更好地开发利用五味子叶中的黄酮品。我国黑龙江地区,五味子叶常以山野菜的形式在市类物质,本实验进行了提取工艺的研究,以期筛选岀较场岀售;在欧洲,五味子叶则被制成各种营养食品用于好的提取工艺,为五味子叶的合理利用提供科学依据。运动员的营养保健或是用于预防心血管疾病。五味子叶中主要活性成分是槲皮素、山奈酚等黄酮类成分2。目1材料与方法收稿日期2006-0920通讯作者基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11511289);黑龙江大学杰出基金项目;黑龙江大学博士启动基金项目作者简介:郑春英(1968-),女,副教授,博士,主要从事食品、药品有效成分分析。坏、生物活性高,适合与药品及保健品的开发研制∏徐保梁.食用菌多糖提取方法研究[.食用菌,199611:64)生产能耗降低,生产周期缩短,更加经济;综上彐潘琦,贾向皮提取茯苓多糖实验方法研究[可知:酶解+热水浸提法是适合于提取茯苓多糖的理云南中医学院学报197,20(3):13164孙文基。天然药物成分提取分离与制备[M.北京:中国医药科技出想方法。版社,1999288参考文献孙向军.螺旋藻多糖提取新工艺的研究].食品科学,20002:32「η林宇野,杨虹.酶法提取多糖的研究].食品与发酵工业,195(1):沈爱英中国煤化工糖的研究1,食用1317菌,200(3HCNMHG