细胞因子聚乙二醇修饰物的研究进展

colon tumor xenografts[ J]. J Interferon Cytokine Res ,2001 ,21trolled Release 2001 ,7x 3)287.(11 )885 .[38] Li YP ,Pei YY .Zhang XY .et al . PEGylated PLGA nanoparticles[ 35 ] Allemann E ,Gurny R , Doelker E. Drug-loaded nanoparticles-as protein carriers synthesis preparation and in vivo biodistribu-preparation methods and drug targeting issues[J ]. Eur J Pharmtion in rat[ J ]. J Controlled Release .2001 ,72 2 ) 203.Biopharm ,1993 39 :173.[39] Li YP,Pei YY ,Zhou ZH,et al. Stealth polyanoacryate[ 36] Perachia MT ,Desmaele EFD ,Besnard M vet al . Stealth PEGlat-nanoparticles as tumor necrosis factor-alpha carriers :pharma-ed polyanoacrylate nanoparticles for intravenous administrationcokinetics and anti-tumor effec[ J ]. Biol Pharm Bull ,2001 24and splenic targting[ J] J Contolled Release ,1999 60 121.(6)662.[37] Li YP ,Pei YY ,Zhou 2ZH ,et al. PEGylated polycy anoacrylate(收稿日期2002-04-03)nanoparticles as tumor necrosis factor-alpha carries[J ]. J Con-细胞因子聚乙二醇修饰物的研究进展李晓光,翟所迪*(北京大学第三医院药剂科北京10083)0摘要:目的综述细胞因子聚乙二醇 PEG修饰物的研究进展。方法通过 查阅近年来国内外的相关文献,从制备、产物稳定性及药物动力学等方面进行了总结。结果与结论细胞因子 聚乙二醇修饰物的稳定性与体内药动学特性均有改善其生物活性的发挥则受多种因素的影响,但可通过定点选择性修饰、优化反应条件等手段提高PEG修饰物的生物活性。关键词聚乙=醇修饰细胞因子中图分类号:R944文献标识码:A文章编号:1001- 2494( 2003 )5 - 0325 - 04细胞因子同一般的蛋白多肽类药物一样在生物体内易醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯) SC-mPEQ单甲氧基聚乙=醇琥珀被酶降解或抗体中和而失活并迅速经肾清除。这使得此类酰亚胺酯等。此外,PEG的醛基衍生物也有应用如单甲氧药物的体内稳定性差,血浆半衰期短,从而影响了药物作用基聚乙二醇丙醛9。活化的PEG分子往往通过与细胞因子的正常发挥。加大剂量、频繁给药虽然可以提高疗效,但同赖氨酸残基上的e氨基或N_末端的a-氨基发生反应生成酰时不良反应增加。因此如何提高细胞因子类药物体内稳定胺键、次级胺键或脲键等形式而共价结合。由于赖氨酸残基性及延长血浆半衰期已成为人们研究的热点。最常见的是位点较多反应结果往往难以控制,为此人们研究了一些可利用已有的缓控释材料或剂型直接与细胞因子结合以形成进行特殊位点修饰的PEG结合方法如唐微等10通过基因一些缓控释 系统如脂质体、生物可降解微球、纳米粒等。细定点突变在不含巯基的重组干扰素分子的糖基化位点97Asa胞因子类药物通过包封、吸附、插入等方式与这些系统结合引入半胱氨酸,并使用自制的马来酰亚-6-胺基乙酸mPEG并被保护起来不仅避免或减少了与体液中酶及抗体的直接酯对该干扰素分子进行定点修饰结果表明结合产物的生物接触还可以实现缓控释给药。另-种重要途径就是对细活性没有受到修饰的影响,并且稳定性、溶解性有所增加。.胞因子进行化学修饰。其目的是在保留细胞因子生物活性此外还有人在研究中将PEG活化为具有双官能团的分子,的基础.上通过改善分子的理化性质来实现此类药物的缓控将细胞因子和另外-种修饰物结合起来,如Savva 等1由.释。可用于修饰的物质很多,如PVp1] ,PEC2-51 ,HSA[6]PEG( CO0H)首先合成了DOPE-PEG-COOH ,再通过等但最常用效果也最好的则是PEG修饰。本文对细胞因DOPE端与脂质体相连rCOOH端与TNF-a结合而实现修子聚乙二醇修饰物的研究进展进行了综述。饰作用。1细胞因子聚 乙二醇修饰物的制备2细胞因子 聚乙二醇修饰物的分离、纯化与鉴定人们常使用活化的PEG对蛋白质多肽等大分子物质进PEG修饰细胞因子的分离与纯化主要是基于反应产物行修饰,而活化PEG分子主要有两种途径①直接将PEG的各组分电荷、分子大小、疏水性的差异利用各种色谱手段而末端羟基转化为适当的官能团②使用具双官能团的物质作进行的5。由于PEG活化分子与球状蛋白难于分离所以为桥梁分别与PEG及待修饰的物质相连。关于活化PEG.在实际应用中多先利用电荷差异分离除去混合产物中未反分子的研究,已有人作了十分详尽的综述7。近几年的文献应的PS7年甘广;此列立物再根据不同PEG化蛋中国煤化工显示常用来修饰细胞因子类药物的PEC活化形式主要是一白质在MH子排阻色谱等手段分离。些PEG的羧酸酯衍生物8-9]如SS-mPEQ单甲氧基聚乙二国内则CNM!G被硫酸铵盐析沉淀的方作者简介李晓光,男硕士研究生通讯作者:翟所迪,男,副主任药师,硕士生导师Tel ( 010 >62017691 - 2740 ,Fax X 010 )62050893E- mail zhaisuodi@ 263. net中国药学杂志教挥5月第38卷第5期Chin PharmJ .2003 May.Vol.38No.5 . 325 .法先将白细胞介素2(IL-2)和PEG修饰的产物与过剩的质的改善大大提高了修饰后细胞因子在体内的稳定性。PEG修饰剂及其它副产物分离再结合溶解度色谱效应采有文献表明分析方法的不同会对药动学测定结果有一用分子筛色谱将IL-2与PEG-IL-2完全分开12]。PEG 修饰定影响。Pettit 等17使用两种不同方法考察比较了IL-5 在细胞因子形成的异构体在电荷、疏水性、分子大小上的差异经PEG修饰前后药动学的变化情况结果表明对于未修饰均较小所以分离难度很大往往要求特殊的方法或严格的的IL-5而言两种测定方法的结果相差不大而修饰后细胞控制分离条件。如Monkarash 等13]使用一种磺丙基树脂,因子的测定结果则因方法的不同有明显的差异。利用各单PEG-IFN 异构体局部电荷的微小差异来进行分修饰产物的分子量会对药动学性质产生明显影响,有研离最终分离得到了11种异构体。究表明,以分子量为12000 6000的PEG分子分别单分子PEG修饰细胞因子的PEG化形式、纯度、分子量等有用修饰rhG-CSF ,并将修饰后的产物与rhG-CSF 静脉注射给的信息可通过SDS-PAGE电泳,HPLC ,SEC(空间排阻色药发现随着3种分子的表观分子量增加,平均滞留时间明谱) ,GPQ(凝胶渗透色谱)等手段确定。SDS- PAGE电泳法可显增加同时血浆清除率也依次下降14]。Tsutsumi 等18 ]制以用于分析PEG化蛋白的纯度、确定PEG修饰程度及产物备了低、中、高3种分子量的PEG-TNF-a发现与未修饰的细的比例,但不适于测定产物的分子量。Niven 等141分别用.胞因子相比,t1/2 分别延长了14,37 43倍。此外给药剂量、SDS- PAGE电泳和质谱的方法测定连接了PEGo000 ,PEG2000途径、方式的不同也会产生-定影响。有文献报道将PEG-的两种rhC-CSF的分子量,结果表明同样条件下电泳法的G-CSF分别以5.96594 ug kg-'给药后山2分别为1.94及测定结果明显偏大因此宜采用质谱法确定真实的分子量。2.30 IF2]而将PEG修饰的rhG-CSF经静脉注射肺部喷雾3细胞因子聚乙二醇 修饰物的稳定性及肺部支气管滴注给药后相应的的药动学行为有明显不PEG修饰细胞因子会由于分子间相互作用而导致聚集,同141。而聚集的难易程度与其连接键的形式有关。有研究显示在5影响细胞因子 聚乙二醇修饰物生物活性的因素rhG-CSF分子N-末端通过烷基化或酰基化反应进行单分子5.1聚乙二醇修饰位点的影响PEG修饰并将产物放置8周后,以SEC ,IB(离子交换色谱)细胞因子自身存在着-些与其生物活性密切相关的区的方法分别测定样品峰的保留比例发现以次级胺键连接的域一旦PEG修饰位点占据了这些区域或PEG伸展长链形产物保留分别为82%,84%,而酰胺键产物的保留仅为.成的空间位阻妨碍了该区域与受体正常的结合就会造成细37%65%[15]。这可能是因为烷基化反应形成的次级胺键胞因子体外活性的下降。一个研究结果显示制备N-末端、保留了电荷从而增加了PEG化蛋白分子之间的静电斥力lys35及lys41位点单PEG化rhG-CSF时,N-末端修饰产物而使其不易聚集。这说明选择适当的PEG连接形式有利于的活性保留最高进-步体内活性研究则发现,仅N_末端、使产物更加稳定。lys35 位点PEG化的产物有-定延效作用,lys41 位点修饰产大量文献表明PEG修饰细胞因子抵抗酶的降解能力有物与未修饰产物的体内活性相比并无明显差别15]所提高。如Pippo等2将PEG修饰的rhG-CSF和未修饰的5.2聚乙二醇修 饰程度的影响rhC-CSF与胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶- -同放置结果发现4h通常修饰程度越高修饰产物生物活性下降就越多。常后仅有小于10%的PEG-rhC-CSF被酶降解,而未修饰的细远等3在研究对IL-2分子进行PEG化修饰时发现连接1胞因子不到1h就约有-半被降解。Tsunoda等16]考察了~2个PEG分子的产物总活性保留为95%连接了4~5个PEG修饰的TNF-a与未经修饰的TNF-a对胰蛋白酶和组织PEG分子的产物总活性保留为78%而当IL-2 的可结合位蛋白酶的稳定性结果发现TNF-a迅速被降解消除,而经过矶乎被全部修饰时总活性保留仅为27%另一篇文献报修饰的TNF-a则表现出更强的抵抗力并且随着修饰物分子道2]其制备的PEG-rhG-CSF修饰程度最高时活性保留仅量的增高抵抗力也随之增强。这可能是因为,PEG 长链在为未修饰细胞因子的9%。修饰后可以形成一定的空间位阻 从而阻碍了酶与细胞因子影响PEC反应修饰程度的因素较多,主要有反应时间、的有效结合并且随着修饰程度的升高细胞因子与酶结合修饰试剂的加入量、pH值等。通常,反应时间越长反应越位点被掩蔽的可能性也越大故而耐酶性也相应增强。充分活性下降越多,但反应一旦完成就不再有任何影响。另一方面某些修饰产物会因为水解而不稳定如用ss-对于修饰试剂的量而言，量越多修饰率越大活性下降的越mPEG修饰的产物中存在着酯键所以可能会发生水解，这显著。pH值的影响与具体的PEG反应条件有关。有人在时不仅PEG修饰的效果不复存在,水解后蛋白的免疫原性研究中发现用分子量为5000的PEG对干扰素a-2b进行初也有所增加。中国煤化工7.5~8.5之间反应活性4细胞因子聚乙二醇修饰物的药动学较高THCNMH G°由于PEG修饰细胞因子后分子量显著增加而使其药动5.3具 他囚系时影啊学性质相应发生显著变化,表现为血浆半衰期延长、肾清除PEG活化酯种类的不同也会对PEG细胞因子的活性造率下降、达峰时间延长等; PEG修饰后所形成的空间位阻也成一定影响在一个研究中发现同样是反应1 h ,BSC-PEG可以保护细胞因子不被体内的酶降解或抗体中和。以上性比SC-mPEG和SS-mPEC对IFNa-2b 的修饰程度明显高活326 .万石熬据armJ ,2003 May ,Vol.38 No.5中国药学杂志2003年5月第38卷第5期性保留明显低据分析这主要是因为BSC-PEG两端均有活也是优化修饰效果的一个良好途径。性基团,从而易使干扰素在修饰时发生交联导致修饰程度7结语明显增高。对于SC-mPEG SS-mPEG而言相同条件下,SC-目前多种细胞因子已被广泛应用于临床如粒细胞集mPEG修饰产物则具有更高的活性[8]。此外,还有研究表落刺激因孔( G-CSF )干扰素( 1FN)白细胞介素(IL)等这明在修饰程度- -定的情况下随着PEG分子量的增加相些生物制品具有疗效高、见效快等优点,但体内稳定性差、血应修饰产物的活性下降也越多[ 4 ,13]。浆半衰期短仍然是此类药物乃至大多数蛋白多肽类药物进6优化聚乙二醇修 饰细胞因子的研究行临床应用的最大障碍。在大量实验与临床研究中,PEG修6.1 定点选择性修饰饰已被广泛的应用于包括细胞因子在内的多种蛋白多肽类通过选择合适的PEG修饰剂在对细胞因子活性无影响药物的修饰21]并已经被证实是-种解决上述问题行之有或影响相对较小的区域进行修饰可以确保产物有较高的活效的方法不仅可以提高上述药物的体内稳定性延长生物性保留同时也克服了以往PEG化修饰反应发生位点较为半衰期还可以增加某些蛋白药物的溶解度减弱或消除免随机产物形式、活性、毒性不易控制的缺陷。由于天然蛋白疫原性、抗原性、毒性并显著提高治疗指数等22]这说明了中赖氨酸残基的数目与位置变化较大,所以N_末端成为了PEG修饰的方法具有广泛的适用性和广阔的发展前景。目进行选择性修饰的良好位点9。此外国内有人在INF-Y 的前,PEG修饰的长效干扰素( PEGintron )已经被研制成功并糖基化位点上引入半胱胺酸,利用特殊的PEG活化酯与巯投入临床使用相信未来将会有更多的PEG修饰细胞因子基的结合反应而实现了定点修饰10]。相继成为临床治疗的有效药物更好的为广大的病人消除病6.2 控制反应条件优化聚乙二醇修饰效果痛。如前所述,许多因素都影响着PEG修饰产物的体内外活性，当反应修饰物形式、分子量、反应方式等-定的条件[1] Kamada H ,Tsutsumi Y ,Tsunoda S ,et al. Molecular design ofconjugated tumor necrosis factor-a isynthesis and characteristics下,PEG的修饰程度将对产物的活性保留有重要影响。通常of polyvinylpyrrolidone modified tumor necrosis factor-a[ J ].PEG修饰程度升高后产物的体外活性保留是下降的,但与Biochem Biophys Res Commun ,1999 257 2 )448.此同时产物的耐酶性增强,血浆半衰期延长使得体内活性[2] Pippo KEJ ,W hitcomb KL ,de Prince RB ,et al . Enteral bioavail-ability of human granulocyte colony stimulating factor conjugated反而提高。因此可以通过控制反应物加入量、反应时间、反with pols( ethylene glycol IJ] Pharm Res ,1996 ,13( 1):102.应pH值等条件找到一个合适的修饰度。在此基础上也可进3]常远唐微郑仲承等.白细胞介素-2的PEG化[J].生物化学杂志,1996 ,12( 4 )445.一步选择最优的PEG相对分子质量,PEG修饰剂种类等以[4] Tsutsumi Y ,Tsunoda s ,Kamada H ,et al . Molecular design of进一步完善PEC修饰的效果。如王立夫等19通过控制反应hybrid tumor necrosis factor-alpha. II :the molecular size of的条件来调整rIL-2修饰度实现了修饰产物较好的活性保polyethylene glycol- modified tumor necrosis factor-alpha afectsits anti-tumor potencs[ J]. Br J Cancer ,1996 ,74(7 )1090.留。[5] Gaertner HF ,0fford RE. Site-specifie attachment of functional-6.3 保护活性区域的聚乙二醇修饰ized poly( ethylene glycol ) to the amino terminus of protein[ J ].Biocongucate Chem ,1996 ,7 38.Tsunoda等16]在制备PEG修饰的TNF-a时,引入了一[6] Paige A G ,Whitcomb K L ,Liu J ,et al . Prolonged circulation of种pH可逆性氨基保护试剂二甲基马来酸酐在PEG修饰反recombinant human granulocyte colony stimulating factor by co-应前先使其与TNF-a的一些活性区域结合,从而避免了valent linkage t0 albumin through a heteobifunctional polyethy-lene glyco[J]. Pharm Res ,1995 ,12( 12 ):1883.PEG化在这些部位的进行。修饰反应后再通过调节pH使.[7] Zalipsky s. Functonalized poly( ethylene glycol ) for preparation其从活性区域上解离出来而实现活性区域的恢复。其结果of biologically relevant conjugate[ J ] Bioconjugate Chem ,1995 ,显示经该处理后得到的各修饰细胞因子组分[ mPEG-TNF-a[8]口姚文兵，吴梧桐等.聚乙二醇对干扰素a-2b的初步化6 :150(+)的活性均比相应未经处理时产物[mPEG-TNF-d-)]学修饰研究J].中国药科大学学报,2000 31( 1 )74.的活性高出20% ~ 40%。抗肿瘤活性实验表明mPEG-TNF- [9] Kinster OB ,Brems DN ,Lauren SL ,et al . Characterization andd + )的活性比相应的mPEG-TNF-d -高一倍。stability of N-terminally PEGylated rhG-CSF[ J]. Pharm Res ，1996 ,13(7)996.6.4 使用高分子量聚乙二醇分子修饰[10] 唐微常远徐C J飞等.蛋白质定点PEG化研究97 cy8-IFN-r .PEG化细胞因子体内稳定性及血浆半衰期的改善主要的疏基专一PEG修饰[ J]生物化学与生物物理学报,1996 ,依赖于分子量的增加,以往研究中由于使用的PEG分子量[11] Savva M ,.Duda E ,Huang L. A genetically modified recombinant28( 3)312.较小仅几千所以必须在较高的修饰率下才能达到可观的tumor necrosis factor-a conjugated to the distal terminal of liposo-分子量但与此同时细胞因子的活性也降低了许多。目前有中国煤化工ol chain[J] Int J Pharm ,人报道使用-种分子量为40 000并含有支链的PEG分子对[12]CCHC N M H G质分离纯化的新方法[ J].生干扰素a-2a进行修饰结果取得了很大的成功。该修饰产物物化字杂志,1996 ,12( 1)73.血浆半衰期延长了70倍平均滞留时间提高了50倍并在[13] Monkarash SP ,Ma Y ,Aglione A ,et al. Positional isomers ofmonopegylated interferon a-2b Jisolation characterization ,and bi-相应的II期临床试验中证实其临床疗效明显优于未经修饰ological activity[ J]. Anal Biochem ,1997 ,24x 2) 434.的干扰素20]。这提示人们研制合适的高分子量PEG分子，[14] Nien RW ,Whitcomb KL ,Shaner L ,et al. The pulmonary ab-中国药学杂志2883年5月第38卷第5期Chin Pharm J ,2003 May ,Vol. 38 No.5. 327 .sorption of aerosolized and itrtatracheally intilled rthG-CSFanddue to longer plasma half-ife and higher tumor accumulation[ J ].monoPEGylated thG-CSF[J]. Pharm Res ,1995 ,12(9 ):1343.J Phar macol Exp Ther ,1996 278(3):1006.[15] Kinstler OB ,Gabriel NE ,Farrar CE ,et al . Nterminally chemi-[19]王立夫 吴裕忻，乔敏敏.聚乙二醇修饰重组人白细胞介素-2cally modified protein composition and method:[ P] US Patent ,及其生物学特性[ J].中国免疫学杂志,1998 ,14(2 )94.5824784. 1998- 10-20.[20] Bailon P Palerronri A ,Schaffer C A ,et al. Rational design of a[16] Tsunoda S ,Ishikawa T ,Y amamoto Y ,et al . Enhanced antitumorpotent Jlongtermlasting form of interferon : A 40 kDa branchedpotency of polyethylene glycolylated tumor necrosis factor-a : Apolyethylene glycol-conjugated interferon a-2a for the treat mentnovel polymer-conjugation technique with a reversible amino-pro-of hepatitis C J] Bioconjugate Chem 2001 12 :195.tective reagenC J]. J Pharmcol Exp Ther ,1999 290( 1 )368.[21]印春华张敏.蛋白质和多肽类药物的聚乙二醇结合物- - 种[17] Pettit DK ,Bonnert TP , Eisenman J ,et al . Structure function新型给药系统J ].中国药学杂志2001 36( 5 )292.studies of interleukin 15 using site-specific Mutagenesis ，[22 ] Kozlowski A ,Haris JM . Improvements in protein PEGylation :polyethylene glycol conjugation ,and homology modeling[J] Jpegylated interferons for treatment of hepatitis C[J] J Con-Biol Chem ,1997 272(4 )2312.trolled Release ,2001 ,72 217.[ 18] Tsutsumi Y ,Kihira T ,Tsunoda S ,et al . Molecular design of hy-(收稿日期2002-06-06 )brid tumor necrosis factor-a markedly enhaced antitumor potency真菌耐药性研究进展刘洪涛张军东曹永兵姜远英“(第二军医大学药学院药理教研室上海200333摘要:目的综述近年 来真菌耐药性研究的最新进展。方法从真 菌耐药性分类、产生机制和克服对策三个方面总结近几年国内外相关文章并加以分析和综述。结果真 菌的耐药性的形成比较复杂,有多种机制。结论解决 真菌耐药性问题是个长期而艰巨的任务需要更好的研究对策。关键词真菌耐药性机制中图分类号:R978.5文献标识码:A文章编号:1001 - 2494( 2003 )05 - 0328- 04.抗真菌药物特别是氮唑类药物如氟康唑和伊曲康唑的吗啉类及- -些不相关的化合物如阿莫洛芬等。问世开辟了真菌病药物治疗的新时代。近年来随着免疫1.2 真菌耐药性分类 真菌耐药性可有多种表现形式:①抑制剂的广泛使用肿瘤放疗、化疗的普遍开展尤其是艾滋经典耐药性是指在感染部位有高浓度药物的情况下病原体病患者的不断增加真菌感染特别是深部真菌感染的发病率仍会侵害机体引起临床疾病。②原发耐药性是指病原体在急剧增加。然而就象细菌对抗生素产生耐药性一样随着没有接触药物之前就已经存在的耐药性。③继发或获得耐唑类药物应用日益广泛又使真菌耐药性问题日趋严重给药性是指病原体接触药物之后产生的耐药性。因此真菌耐抗真菌治疗带来新的更严峻的挑战。当前对真菌耐药性的药性可以是真菌固有的抗药能力或真菌耐药株自然选择的研究已成为国内外专家学者所瞩目的热点。本文从真菌耐结果和真菌敏感株变异的结果。药性分类、产生机制及克服对策三个方面,综述近年来真菌此外还有-种耐药性称为临床耐药性指有些致病真耐药性研究的最新进展。菌尽管体外药敏实验显示对药物敏感,但它引起的感染靠临1抗真菌药物及真菌耐药性分类床用药不能有效控制或停药一段时间后能复发。临床耐药1.1 常用抗真菌药物现在临床使用的抗真菌药物在数量性也可有多种原因包括机体免疫功能低下、药动学特征、药上远远少于抗细菌药物原因是真菌感染毕竟不象细菌感染物剂量不合理或药物不易到达的感染部位等。那样常见而且真菌和哺乳类动物细胞都是真核细胞药物2 耐药性产生机制作用的选择性差。目前临床常用的抗真菌药物主要有①多导致真菌耐药性产生的机制主要为真菌细胞摄入/透入烯类:能损害真菌膜脂质结构及功能,如两性霉素B的抗真菌药物药量减少药物作用的靶酶基因突变或过量表( AmpB)制霉菌素。②唑类抑制真菌羊毛甾醇14a-脱甲基达将药物泵出/转运到细胞外的能力增强。但不同真菌对酶干扰细胞膜脂质合成,如酮康唑、氟康唑、伊曲康唑等。不同药物产生耐药性的机制也不同,而且有时是多种机制共③烯丙胺类/硫代氨甲酸酯类:能竞争性抑制角鲨烯环氧化中国煤化工，酶干扰细胞膜脂质合成,如萘替芬、特比萘芬、托萘酯等。2.发现的AmpB ,它含有一④核苷类能干扰真菌核酸的合成及功能,如氟胞嘧啶。⑤条多双THCN M H E的亲水侧链其多双键侧基金项目上海市科技发展基金资助项目( 98QB14009)作者简介 刘洪涛男硕士,讲师。通讯作者 姜远英男教授博士生导师Tel ( 021 )25070371E-mail Jiangy ycn@ yahoo. com. cn328 .。larm J ,2003 May .Vol.38 No.5中国药学杂志2003年5月第38卷第5期