不同超声提取时间对凝血后乙醇浓度检测的影响

中国法医学杂志 CHIN J FORENSIC MED2014年第29卷第5期技术交流不同超声提取时间对凝血后乙醇浓度检测的影响张权,陈文生,洪亮(贵州师范大学贵州省山地环境信息系统和生态环境保护重点实验室;贵州师范大学物证司法鉴定所,贵州贵阳5500摘要】目的探讨已发生凝血的血液样本采用超声处理的必要性和最佳时间。方法抽取500名驾驶员血液样本各两份,其中1份为抗凝血,1份为未抗凝血。抗凝血样本采用直接进样,未抗凝血分别采用旋涡震荡后直接进样和进一步以不同时间超声处理后再进样,采用GC法分析各样本中乙醇浓度。以抗凝血检测结果为标准值,进行比较和分析。结果500份抗凝血液样本中有462份检出乙醇,相应462份未抗凝血液样本中445例检出乙醇。未抗凝血经60min超声处理后再进行GC检测,所得结果与相应抗凝血相符,而采用更长、更短时间的超声处理,或不加超声处理的检测结果绝大多数与相应抗凝血检测值存在显著性差异(P<0.01)。结论机动车驾驶员血液中乙醇浓度测定应使用抗凝血样本;如样本未加抗凝剂出现凝血后,则应对样本进行超声波处理,时间以60min为宜。【关键词】法医毒物分析;血液乙醇浓度;储存容器;凝血;超声提取时间【中图分类号】DF795.1【文献标识码】B【文章编号】001-5728(2014)05-0457-03doi:10.13618/ ]. Issn.1001-5728.2014.05.017Influence of different ultrasonic extraction time on detecting alcohol concentration after bloodcoagulated( Zhang Quan, Chen Wensheng, Hong Liang/ Guizhou Provincial Key Laboratory of informationSystem of Mountainous Areas and Protection of Ecological Environment, Guizhou Normal UniversityIdentification for Evidence, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, China)Abstract ]Objective To investigate the coagulation of blood samples have been the necessity and thebest time of ultrasonic treatment. Methods Blood samples collected from 500 drivers in two copies, one ofthem is anticoagulant, another is not anticoagulant. Anticoagulant sample was injected directly, no anticoagulantsample was injected directly after vortex vibration and sampled by ultrasonic treatment in different time, GCwas used to analyze alcohol concentration in each samples. The anticoagulation test results as the standardvalue, comparison and analysis. Results 462 out of the 500 copies of anticoagulant blood samples testedcontain alcohol, 445 cases of alcohol were detected from corresponding to 462 without anticoagulant bloodsamples. After 60min ultrasonic treatment, without anticoagulant blood samples were followed by GCdetection, the result was consistent with corresponding to anticoagulation blood, and the longer, shorter timeof the ultrasonic treatment, or without detection of ultrasonic processing results most with the correspondinganticoagulation detection value exist significant differences(P<0. 01). Conclusion Alcohol concentrationdetermination of motor vehicle drivers blood should use anticoagulant blood samples; if the sample clottingwithout anticoagulant, ultrasonic treatment should be treated with the sampleKey words ] forensic toxicological analysis; blood alcohol concentration; container; coagulation;ultrasonic extraction time酒后驾车是一个国际性的交通问题,而检测血液鉴定过程中发现,目前对于送检血液样本并无特殊规中乙醇浓度是判定酒驾的有力证据,检测结果直接影定,而不同状态的血液样本中乙醇浓度检测结果可能响相关案件最终的判罚。本文作者在日常的司法有影响2。未加抗凝剂的血液样本,一定时间后会发生凝血,检测时如按照直接取样或经离心后进行测【作者简介】张权,男,硕士研究生,研究方向:主要从事法医毒定,将影响结果的准确性。对此,本文实验针对已发物化学分析工作。E-mal:gongchangmuyou@126.com生凝血的样H中国煤化工行色谱检测分【通信作者】陈文生,女,教授,主要从事物证司法鉴定方面研析,希望能为CNMHG提供参考。究。E-mal:13984030377@126.com中园练医学杂忐 CHIN J FORENSIC MED_2014年第29卷第5期1材料与方法表1不同提取方式的回归方程及相关系数1.1样本来源样本操作方法线性回归方程收集作者单位检案中抽取的500名驾驶员血液抗凝血直接进样Y=0.0107x-0.01660.998样本各两份,其中1份加抗凝剂(抗凝血),系使用真未抗凝血超声提取Y=0.0106x-0.00740.9994空抗凝管采集;1份未加抗凝剂(未抗凝血),系使用普通采血管采集。2.2不同超声提取时间对血液中乙醇浓度检测结果1.2样本处理的影响抗凝血各取样品0.5mL,加入5μL10%叔丁对500份抗凝血液样本进行GC检测,其中有醇,用去离子水定容至5.0mL,直接进样进行GC462份检出乙醇。对相应的462份未抗凝血液样本检测。按本文方法采用超声处理,并进行GC检测,其中445未抗凝血各样品分别用两种方法进行处理:①例检出乙醇。采用MM-2型快速旋涡震荡器(江苏姜堰市沈高康健在本文未抗凝样本中选取浓度范围为28生化器具厂)粉碎凝血块(约10-20)后,取0.5mL79mg/100mL(酒后驾驶限)和81~32lmg/100mL加入5μ10%叔丁醇,用去离子水定容至50mL,直(醉酒驾驶限)1的样本各5份,按照本文未抗凝血接进样进行GC检测;②在用上述旋涡震荡方法粉碎的两种方法处理、检测并计算均值;以相应抗凝血凝血块后,采用KQ2200DE型数控超声波清洗器(昆液样本检测结果为标准值,考察不同超声时间对未山市超声仪器有限公司)对样本进行超声波处理,超抗凝血液样本中乙醇浓度检测结果的影响,结果见声温度控制在40℃以下,超声时间设置为15、30、45、表2、表36075、90min等不同时长,处理后再按照上述方法进由表可以看出,未抗凝血液样本超声60min时,行GC检测检测结果接近抗凝血检测的标准值;超声时间过长或1.3仪器条件过短,都会影响结果的准确性。日本岛津GC-14C气相色谱仪(配火焰离子化检如表2中的3号样本,抗凝血样本乙醇检测标测器),HW-2000色谱工作站;色谱柱:DC200填充准值为59mg/100mL(达到酒驾标准),而同一个体色谱柱(2m×2mm)。柱温:120℃,进样口温度:未抗凝血样本,旋涡震荡后未经超声处理直接进样150℃,检测器温度:150℃,载气:氮气(纯度≥检测,结果为仅为14mg/100mL(未达到酒驾驶标99.99%),100kPa;氢气(纯度≥99099%),50kPa。准)。又如表3中的4号样本,标准值为每份样本平行测定2次,记算平均值,相对相差不超243mg/100mL(达到醉酒标准),未经超声处理直接过5%。进样检测,结果为仅为74mg/100mL(未达到醉驾驶1.4统计学分析标准)。应用SPSS18统计软件对所得数据进行统计分2.3抗凝血和未抗凝血检测结果比较析,多个样本均数的比较采用单因素方差分析,检验从本文样本中经检测,选择乙醇浓度在20~50、水准=0.01。51~80、81~120、121~160、161~200、201~2502结果与讨论251~300、301~350mg/100mL每浓度范围各10份样本。不同状态样本按照本文方法,抗凝血直接进样检2.1回归方程、线性范围、相关系数及最低检出限测,未抗凝血按旋涡震荡直接进样检测和超声处理后在空白血液中添加无水乙醇,配制乙醇浓度为检测方法分别检验,数据应用SPSs8统计软件处5、20、80、100、150、300、500mg/100mL的标准系列工理,用单因素方差分析。作液,分别按照本文抗凝血样本的方法直接进行GC检验结果亦表明,未抗凝血经60min超声处理后检测,并制作标准曲线。以乙醇和叔丁醇的峰面积比再进行GC检测,所得结果与相应抗凝血相符,而采值(y)为纵坐标,乙醇的质量浓度(x)为横坐标作线用更长或更短时间的超声处理,或不加超声处理样本性回归,得到线性回归方程,在5~500mg/100mL范的检验结果绝大多数与相应抗凝血检测值存在显著围内,线性关系均良好,详见表1。测得最低检出限性差异(P中国煤化工均为0.1mg/100mL。CNMHG中囤汹医学杂忐 CHIN J FORENSIC MED2014年第29卷第5期表2酒后驾驶者抗凝血和未抗凝血乙醇浓度检测结果(m=5)抗凝血未抗凝血检测值/(mg/l00mL)样本标准值/漩涡后不同超声时间mg/100mL)未超声15mi30min45min90min27272767表3醉酒驾驶者抗凝血和未抗凝血乙醇浓度检测结果(n=5)抗凝血未抗凝血检测值/(mg/100mL)样本标准值/漩涡后不同超声时间(mg/100mL)未超声15minmin60min75min90min11580170243233321230285318310107表4不同状态血样本乙醇浓度检测结果统计分析(x±s,mg/100mL,n=10)未抗凝血检测值抗凝血检测值漩涡后不同超声时间未超声15min30min45min60min75min20~5033.8±10.39.1±3.6′13.8±3.818.7±4.9·27.5±8.232.5±9.730.7±9.426.7±9.651~8064.7±10.118.7±2.0·31.5±6.3·43.1±8.7·55.2±9.863.8±9.159.1±8.954.6±8.181-12099.9±12.829.0±6.5·51.8±7.8·70.3±8.686.4±13.698.1±12.789.4±10.584.7±9.2121~160140.1±13.145.2±3.871.5±7.798.4±9.3·127.4±12.0138.2±12.1129.2±10.9121.8±11.2161~200181.2±12.260.3±3.391.6±5.8·127.8±9.1162.5±12.8·176.9±13.2168.4±12.5·161.4±10.9201~250225.2±16.573.3±5.0·113.2±8.3·157.1±10.9·198.4±13.6·220.0±15.6211.1±15.3·197.1±16.4251~300276.4±16.089.1±5.4·40.4±10.4·193.6±15.7250.6±20.0·269.8±15.8256.8±16.1·249.2±16.9′301~350327.1±16.3108.5±7.5170.8±8.9·232.8±14.7·294.4±10.5315.8±16.7300.3±13.8·292.5±11.3*:与抗凝血比较,P<0.01综上,以往研究发现,在检测血液中乙醇浓度时血液凝固会影响血中乙醇浓度测定的准确性6。本参考文献文实验结果也显示:当血液样本中出现凝血时,如未1]赵秉志,袁彬.醉驾入刑诸问题新探讨[J].法学杂志对血样进行超声提取处理或超声提取时间达不到2012,(8):17-2160min时,检测结果可能有偏差。此结果提示,在对2]卓先义,卜俊,向平等·血液中乙醇检测结果的法医学机动车驾驶员血液中乙醇浓度进行测定时,应送检抗分析[J].中国司法鉴定,2010,48(1):2225凝血液作为样本;如样本采用普通采血管采集后出现3]周方满中国煤化工擎浓度的影响因素分析[J]7-1348凝血,则应对样本进行超声波处理,超声温度应控制CNMHG人日期:2013-10-21)40℃内,超声提取时间以60mn为宜。459