莓茶乙醇提取物的急性毒性研究

第27卷第6期ood& MACHINErYvo.27,No.62011年11月Nov,201110.3969 j. issn.1003-5788.2011.06.025莓茶乙醇提取物的急性毒性研究Study on acute toxicological evaluation of ethanol extracts from fusty tea谭平1姚茂君2辛益妹3马美湖2TAN Ping YAO Mao-jun2 XIN Yi-mei MA Mei-hu2(1.湖南机电职业技术学院湖南长沙410151;2,华中农业大学食品科学技术学院湖北武汉430070;3中国人民解放军空军航空医学研究所,北京100036)(1. Hunan Mechanical and Technical Polytechnic, Changsha, Hunan 410151, China;2. College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070, China3. Institute of Aviation Medicine, Chinese PLA Air Force, Beijing 100036, China)摘要:对茶乙醇提取物的急性泰性进行研究。取 Wistar莓茶是一种野生木质藤本植物,又名甘露茶、藤茶、白大鼠40只,清洁鹹,随机分为2組,每组20只,雌雄各半,以茶、龙须茶等,学名显齿蛇葡萄( Am pelopsis最大耐受量法灌胃给予受试样品组大鼠最大使用浓度和最grossedentata),主要分布于湖南湖北、贵州、云南、江西、广大灌胃客量的葺茶乙醇提取物,1天2次(相隔4h),连续观东福建等省区口。莓茶性凉味甘淡,具有清热解毒降暑察14d。结果表明,受试样品组大鼠毛色,皮肤,粘膜,眼晴,呼吸,循环,自主活动及中枢神经系统、行为表现等均与阴性生津消炎利尿、抗氧化、镇痛等功效,是一种具有独特保健对照组大鼠无明显差别,整个试验期内无大鼠死亡,莓茶乙功效和饮用价值的野生天然类茶植物。霉茶在武陵山区有酵提取物大鼠口服灌胃的最大耐受量为10.0g/kg大鼠体广泛的分布和悠久的饮用历史,千百年来,人们将其幼嫩茎重;对所有试验大鼠进行大体解剖,组织器官未见有颜色、体叶加工成保健茶,用于治疗咽喉肿痛、感冒发热、黄疸型肝积、质地等改变,说明蓦茶乙醇提取物的毒性很小,具有较好炎、湿疹、皮炎等症[2,莓茶水提取物主要活性成分为黄酮的食用安全性。类化合物3,5,7,3′,4',5′-大羟基-2,3双氢黄酮醇(二氢关键词:幕茶;显齿蛇葡萄;二氩杨梅素;急性毒性Abstract, The acute toxicological evaluation was studied of ethanol杨梅素, dihydromyricetin,DMY),具有抑菌、消炎、镇痛、止extracts from fusty tea( Am pelopsis grossedentata). The rats were咳、祛痰、抗高血压、保肝护肝及解酒、消脂降糖抗氧化和given the ethanol extracts from fusty tea with the maximum concen-增强免疫力等多种药理活性10,目前对莓茶乙醇提取物ration and capacity by gastric perfusion. twice a day,for14day.的毒理研究未见报道,本试验对其急性毒性进行了研究,以were no abnormal reactions during the observation period on skin,期为莓茶的研究和进一步开发提供参考。mucosa, coat color,eyes, breath,. circulation. locomotor activity.1材料与方法central nervous system, behavior etc, in Wistar sample group, with-out rats,death, and the maximum tolerance was 10. 0g/kg by gas-1.1仪器与材料tric perfusion, There were no change in the tissues and organs on1.L.1主要仪器设备volume, color and texture, which showed the extracts were low toxic小型粉碎机:LH08B,浙江新昌红利数控制造厂and a恒温水浴锅:B220,上海亚荣生化仪器厂;Keywords: fusty tea: ampelopsis grossedentata: dihydromyricetin: a电子天平:EB340HW型,日本 Shimadzu公司;超声波清洗器:8200J4型,日本 Yamato公司;旋转蒸发器:RE52A,上海亚荣生化仪器厂;蔷金项目:国家星火计划项目(编号:2006EA770049)湖南省自然科上皿式电子天平:TMP2型,湘仪天平仪器设备有限学基金资助項目(编号:06J15019);湖南省教育厅高校科公司;研项目(编号:11c0475)喷雾干燥机:GB22,日本 Yamato公司。作者简介:谭平(1968-),男湖南机电职业技术学院副教授,硕士E-mail:tan_xiting@126.com1.1.2材料收稿日期:2011-08-01清洁级 Wistar大鼠:40只,由北京大学医学部实验动物提取与活性2011年第6期科学部提供(合格证号为 SCXKL[京]20020001,动物使用14天受试样品组雄性大鼠平均体重为(194.16±7.86)g许可证为SYXK[军]2002010),雌雄各半体重160~180g14d内受试样品组雄性大鼠体重增加了20.11g试验大鼠饲养条件:相对湿度50%(士5%),温度22℃受试样品组雕、雄大鼠体重与阴性对照组无明显差别,(±2℃),光照12h明、12h暗,全屏障清洁级动物实验室14d内动物生长情况良好,表明莓茶乙醇提取物对大鼠体重内;喂饲全价营养颗粒饲料(北京大学医学部实验动物科学无明显影响。结果见表1。部提供),紫外灭菌后自由摄食;饮水为城市自来水,过滤后表1書茶乙醇提取物对动物体重的影响(x士s装人消毒过的饮水瓶内,自由饮用Table 1 Effects of ethanol extracts from fusty莓茶(按绿茶加工工艺制成):湖南省保靖县秦简茶科技tea to the body weight of mouse开发有限公司。体重/g生理盐水注射液(规格:500mL/瓶,批号:060509112),组别北京双鹤药业股份有限公司。7 d14d桶装饮用纯净水:购于北京华玉时尚饮料有限公司。受试早10172.48±5.35181.7±6.06190.64±6.23无水乙醇:化学纯,北京化学试剂公司样品组♂10174.05±5.90184.90±4.76194.16±7.861.2莓茶乙醇提取物的制备阴性♀10173.95±4.48182.62±5.53191.09±5.43将莓茶粉碎、过筛,称取一定质量的莓茶粉,按料液比为对照组♂10173.95±5.31184.99±5.51194.98±7.951:18(mtV)加入65%的乙醇溶液,在60℃下,超声波提取40min抽滤;滤液采用旋转蒸发器进行浓缩,待料液可溶性2.3对受试样品组一般体征的影响固形物含量达到30%左右即可;经喷雾干燥得莓茶乙醇提取受试样品组大鼠灌胃给予莓茶乙醇提取物(剂量为物,依文献[4]测其二氢杨梅素含量约为70%。10.0g/kg大鼠体重)后,连续观察14d,所有受试大鼠的毛1.3急性毒理学试验发光泽度、大小便摄食活动状态和自主活动等均未见异常根据文献[11~13],将试验用大鼠随机分为受试样品组改变和阴性对照组,每组20只,雌雄各半,阴性对照组给予生理4对受试样品组主要脏器的影响盐水注射液,受试样品组给予莓茶乙醇提取物。给予受试样对所有受试大鼠进行大体解剖,未见其组织器官出现颜品途径:大鼠口服灌胃。给予莓茶乙醇提取物或生理盐水注色体积和质地等改变。受试样品组大鼠皮肤粘膜、眼睛、射液后实验室观察14d,每日记录大鼠的自主活动外观症呼吸循环及中枢神经系统、行为表现等反应与阴性对照组状大鼠的死亡数及死亡时间,对死亡鼠进行尸体解剖观察大鼠无明显差别主要脏器和组织有无肉眼可见的病理学变化3结论2结果与分析以受试样品最大使用浓度、受试动物最大灌胃容量,给因受试莓茶乙醇提取物样品溶解度限制,试验中以予 Wistar大鼠口服灌胃莓茶乙醇提取物剂量为10.0g/kg0.25g/mL比例将受试样品配制成水混悬液,给予受试样品大鼠体重,在观察期内受试样品组大鼠毛色,皮肤,粘膜,眼剂量为20.0mL/kg(大鼠体重),1d2次(相隔4h),1d累睛,呼吸循环自主活动及中枢神经系统行为表现等均与计剂量为10.0g/kg(大鼠体重),阴性对照组给予生理盐阴性对照组大鼠无明显差别整个试验期内无大鼠死亡发水注射液20.0mL/kg(大鼠体重),1d2次。生,莓茶乙醇提取物大鼠口服灌胃的最大耐受量为2.1受试样品组死亡情况10.0g/kg(大鼠体重);对所有试验大鼠进行大体解剖,组织受试样品组大鼠口服灌胃给予受试样品莓茶乙醇提取器官未见有颜色、体积、质地等改变。本试验结果表明莓茶物,剂量为10.0g/kg大鼠体重;整个试验期14d内无动物乙醇提取物急性毒性很小,具有较好的食用安全性,临床应死亡发生,受试样品组20只大鼠全部存活。用安全可靠,具有进一步研究开发价值,为莓茶的后续研究2.2对受试样品组体量的影响提供了试验依据但急性毒性实验仅数次给药,观察时间较第1天受试样品组雌性大鼠平均体重为(17248士短,故还应结合长期毒性试验的毒性表现及多种检查结果综35)g,第7天受试样品组雌性大飘平均体重为(181.77士合分析评价其毒性。6.06)g,7d内受试样品组雌性大鼠体重增加了9.29g,第14天受试样品组雌性大鼠平均体重为(190.64士6.23)g,参考文献14d内受试样品组雌性大鼠体重增加了18.16g1中国科学院植物研究所中国高等植物图鉴补编(第2册)[M第1天受试样品组雄性大鼠平均体重为(174.05±北京:科学出版社,1983:349~3565.90)g,第7天受试样品组雄性大鼠平均体重为(184.90士2王文采.葡萄科新发现[J].植物分类学报,1979,17(3):110~4.76)g,7d内受试样品组雄性大鼠体重增加了10.85g第(下转第106页)提取与活性2011年第6期衰2正交试验结果溶剂微波功率300W,提取时间120s,料液比1:35Table 2 Results and analysis of orthogonal test(m:V)。该条件下,石榴皮多酚提取率可达21.41%。表实验序号AD多酚提取率P/%明微波辅助工艺有利于石榴皮多酚的提取,所建立的工艺可获得较高的多酚提取率,具有良好的应用前景。19.37参考文献21.661宋立江狄宝石碧植物多酚研究与利用的意义及发展趋势[J]化学进展,2000,12(2):161~1702 Nevin K G, Rajamohan T. Beneficial effects of virgin coconut oilon lipid parameters and in vitro LDL oxidation[J]. Clinicalry,2004,37(5):830~83519633 Negi P S, Jayaprakasha G K. Antioxidant and antibacterial acti18.89ities of punica granatum peel extracts [J]. Joumal of Food Science,2003,68(4):1473~1477322.014李云峰郭长江,杨继军,等.石榴皮抗氧化物质的提取及其体外20.6120.2119.8120.47抗氧化作用的研究[.营养学报,2004,26(2):143~147.20.9419.9021.4820.545孙兰萍张斌,赵大庆,等石榴皮中多酚的醇提取工艺优化[冂]20.1821.6220.4420.72包装与食品机械,2007,25(4):20~23.6王华斌,包晓玮,韩海霞,等新疆石榴皮多酚提取工艺研究.食品711.660.26与机械,2010,26(5):137~140.衰3方差分析结果7焦士蓉,王玲陈明夏,等.石榴皮总多酚的超声波辅助提取及其Table 3 Results of variance analysis抗氧化活性研究[J西华大学学报,2009,8(1):60~628李志洲微波辅助提取石榴叶中多酚类物质的工艺[J].食品与机方差偏差自由均方F值F临界值械,2009,25(4):72~75来源平方和度A0.8820.448.33上接第102页B50222.5147.49Fa.0s(2,2)=19.003全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册[M.北京:人民Fa.o(2,2)=99,00出版社,1978:789D0.1120.051.004何桂霞,裴刚周天达,等.显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定[].中国中药杂志,2000,25(7):423~425表4最佳工艺实验验证结果5索朗,齐云,吴彬,等,藤茶抗炎、镇痛作用研究[J].中国民族民间Table 4 Results of test verification医药杂志,2002,12(56):172.实验序号粗提取物得率/%多酚纯度/%多酚提取率/%6钟正贤,周柱芬,陈学芬,等.广西瑶族藤茶中双氢杨梅树皮素的保肝作用实验研究[].中国中医药科技,2002,9(3):155~1567李翠苹,曹树稳余燕影.二氢杨梅素研究进展[J].化学试剂21.488覃沽萍钟正贤,周桂芬,等,双氢杨梅树皮素降血糖的实验研究[J].中国现代应用药学杂志,2001,18(5):351~35353.559张友胜,宁正祥,杨书珍,等.显齿蛇葡萄中二氬杨梅树皮素的抗56.0539.8222.32氧化作用及其机制[J.药学学报,200338(4):241~244.平均值10杨书珍,张友胜,宁正祥,等二氢杨梅素对几种食品常见菌的抑制效果[].天然产物研究与开发,2003,15(1):40~42.该工艺合理且稳定粗提取物的平均得率为5323%平均多11中华人民共和国卫生部保键食品检验与评价技术规范(2003酚纯度为40.25%平均多酚提取率为2141%。版)[S].北京:中华人民共和国卫生部,2003:177~180.3结论12国家食品药品监督管理局.GPT2-1,中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则[2].北京:中国医药科技出版社,2005通过单因素及正交试验优化了石榴皮中多酚的微波辅13李忠海,叶翠层,庞国歌,等.黄皮酿橙梨皮提取物对小白服胃提取工艺条件。其最佳工艺条件:50%(体积分数)乙醇作肠功能的影响[J].食品与机械,2007,23(6):52~54.