重楼水提工艺的初步研究

第29卷第1期云南中医学院学报Vol 29 No. 12006年2月ournal of Yunnan College of Tradtional Chinese Medicine2.2006重楼水提工艺的初步研究年四辉,张赫名,郑渝艳(云南中医学院中药学院,云南昆明650200)摘要:目的:探讨重楼提取过滤难及水解的问题;得到重楼总皂苷最佳提取工艺。方法:重楼水提取过程中加入酶A和复合酶B解决其过滤问题;通过正交实验考察提取时间、提取次数、提取温度、溶媒用量、pH及药材粒度对重楼总皂苷溶出的影响。结果:酶A酶B的交替使用可解决过滤难问题,提取率提高2428%两种酶的用量分别为酶A1ml/kg生药,酶B2m/kg生药;提取次数对重楼总皂苷的提取率有极显著性影响,粒度有显著性影响,其最佳提取工艺为粉碎成20目的药材用倍量pH7的溶剂60℃提取3次,每次3h。结论:该工艺环保,可行关键词:重楼;水提工艺;正交实验中图分类号:R283.6文献标识码:A文章编号:1000-2723(2006)01-0013-04重楼 Rhizoma Phizoma paris系百合科重楼属2方法与结果Paris多种植物的根茎,2000年版药典和2005年版2.1标准曲线的制备药典收载的重楼为百合科植物云南重楼 Paris精密称取105℃干燥至恒重的对照品9.6mg置Polyphylla Smith Var. yunnansis( franch.)10ml容量瓶中,甲醇溶解至刻度,配制成0.96mgHand.Maz或七叶一枝花P. Polyphylla Smith ml的标准品溶液。分别取标准溶液50,100,150,Var chinensis( Franch.)Hara的干燥根茎,具有消20,250,300,350,40,450l置10m容量瓶中,水肿止血清热解毒凉肝定惊的功效,在传统医学上浴挥干溶剂加高氯酸溶解至刻度密闭,置水溶锅主要用于各种疮毒、蛇毒、痈疽,现代药理研究表明65℃恒温15min,取出后放冷至室温,2h内于其具有抗癌、抗生育、抗徵生物镇静、镇痛、止咳平408mm处以高氯酸为空白测定吸收率得回归方程喘、止血等作用其主要药效成分是重楼皂苷。由于A=6.4×10-3+0.0189,r=0.993,药物浓度在重楼中含有大量的淀粉胶质蛋白,传统提取工艺4.8~43.2g/ml成线性关系多为甲醇或高浓度乙醇提取。我们通过复合酶对重2.2样品溶液的制备楼根粉进行处理,然后水提取,可以很好的解决其难提取液浓缩,80℃以下减压浓缩至干,称取相当以过滤的问题同时通过正交试验可以确定重楼的于4g生药量的提取物,甲醇溶解洗涤至25m容量最佳提取工艺。瓶中定容至刻度,取50l溶液至10ml溶量瓶中,1材料与试剂照2.1项下测定含量。Ⅳ2450紫外分光光度计(日本岛津),GOA2.3酶提取实验研究型电热真空干燥箱(天津产), eppendorF微量移液2.3.1酶A、酶B的用量考察枪(美国产), Precisa XSI25A型电子天平(瑞土产),酶A(北京北方生物工程有限公司),复合酶重楼中含有大量淀粉、蛋白质和粘液质,加热后易糊化,不仅影响重楼有效成分的溶出,也造成过滤(北京北方生物工程有限公司),滇重楼(云南白药集极为困难。我们在固定工艺40目药材粉加7倍量团武定GAP基地提供,经鉴定为滇重楼的干燥根水微沸状态下煎煮3h,以过滤的难易程度及重楼皂茎),重楼皂苷1(中科院昆明植物研究所,高氯酸苷提取率为考察指标,重点考察了酶A用量酶B(分析纯成都金山化工),高纯水(自制,电导率≤用量。cm中国煤化工CNMHG收稿日期:2005-10-09作者简介:年四辉(1978~),男,安微怀运人,云南中医学院203级研究生,研究方向:中药资源开发与利用。2006年云南中医学院学报第29卷表1实验方案和结果试验号酶A用量(ml/kg生药)·酶B用量(ml/kg生药)过滤状况总皂苷提取率(%较难滤54.681234567123123可滤61.27可滤62.511222可滤60.26易滤易滤58.96易滤易滤易滤45.33实验中发现随着酶A酶B用量的增大,药材表3酶因素对过滤和重楼皂苷提取率的影响的过滤改善比较明显,考虑生产成本,故在保证过滤项目过滤情况重楼皂苷提取率(%)效果的前提下,酶A用量以1ml/kg生药,酶B以未加酶难滤2ml/kg生药为宜,结果见表1。酶A难滤74.182.3.2加酶温度的考察酶B难滤由于酶都是蛋白,温度对其稳定性和活性影响酶A+酶B易滤84.24很大。温度越低,酶越稳定但活性降低,温度既能加快酶反应的速度,也能导致酶失活变性,所有的酶都表3可以看出,加酶A的温度对药液的过滤有一个适合的温度。本实验中,酶A是高温酶酶B没有影响,而加酶B的温度对药液的影响较大,因是低温酶,因此在上述实验的基础上分别从不同的此酶A可以在80℃左右加入,酶B可在药材煮提后温度考察温度对酶活性的影响,结果见表2。冷至50℃加入,可使酶A、酶B的活性保持最大。表2加酶A酶B温度对药液过滤的影响实验中发现,单用一种酶不能解决其过滤问题,而两种酶联合使用可使药液易滤,并可大幅提高重楼皂加酶A温度加酶B温度过滤情况过滤情况苷的提取率(C)2.4重楼提取工艺的实验研究难滤难滤0089在解决了重楼过滤问题后,采用正交实验对可难滤难滤0000可滤能影响重楼皂苷溶出的因素进行了考察,见表4、易滤难滤可滤表4正交实验因素、水平表因素提取时间(h)提取次数提取温度溶媒用量(倍)H值粒度(目)E573TH中国煤化工CNMHG第1期年四辉,等:重楼水提工艺的初步研究表5实验设计与数据分析列号A提取物总皂苷总皂苷H质量(g)质量(m)提取事(%)实验号(空白)96.62045.12323123232.1163.2752345145.72068.4194.7652.0160.190231.6107.52050.4822.0147.36569.1921.7183.23086.022345678231312231323312312231123311.5130.57561.301.4142.30066.8121.1122.91057.2122322.1177.24083.311.2116.4954.69191.94590.12200.915139.963121.209158.194141.574145.938126.052141.247k2138.526146.925140.998147.585156.624155.124153.614R19.385405720.9866.0112.8629.79112.367粒度是显著性因素;考虑到粒度过细可能导致过滤表6重楼总皂苷方差分析表困难,且F因素2水平与3水平几无差别,即采用3因素偏差平方和自由度F比F临界值显著性水平,故重楼总皂苷的最佳提取工艺为提取时间1399.91523.8126.90B3F2E2C1A3D2,即粉碎成20目的药材用7倍量pH7的溶剂60℃提取3次,每次3h提取次数6662.130218.14318.000F<0.01根据以上实验分析,我们做了3次验证实验,重提取温度1500.97724.0886.溶媒用量6.71920.3726.940楼总苷的含量是184.834,182.406,185.132mg,提pH值1559.69924.4276取率为86.78%、85.64%、86.92%粒度3392.218296.940F<0.052.5重楼皂苷的索氏提取实验误差34.41取重楼40目粉4g,100ml甲醇提取8h,过滤,空白597.092滤液浓缩转移至25ml容量瓶中,取50μ至10ml容量瓶中,按照2.1.2项下测定含量,重楼中重楼皂从直观分析也可看出,RB>RF>RE>RC>苷含量为5.33%(n=3)。RA>RD,影响因素从大到小依次是提取次数、粒3结论和小结度、pH值、提取温度、提取时间、溶媒用量,其中溶中国煤化工特定的非目标成媒用量最不明显。由方差表可以看出影响提取物分淀CNMHG以很好解决重楼中重楼总皂苷的含量的极显著性因素是提取次数,总皂苷生广过程中过漶题,同时可以提高重楼2006年云南中医学院学报第29卷总皂苷的提取率。预实验表明酶A、酶B加入的先和后续工作的方便第1次我们选择7倍量水第2后顺序同样可以解决开始的过滤问题,同时对重楼次和第3次我们选择5倍量,对重楼提取率影响甚总皂苷的提取率几无影响,考虑实际提取工作的连微。本工艺用水作溶剂,不仅环保,亦可降低生产成续性,故我们选择先加酶A后加酶B。单用1种酶本,溶剂用量少,可为后续工作提供方便。可以部分改善过滤问题并能提高重楼皂苷得率,但两种酶联合使用可很好的改善过滤,可大幅提高重[参考文献]楼皂苷得率。薄层层析亦表明,酶的加入并没有改]郑虎占.中药研究与应用M北京学苑出版社,198341变重楼皂苷的成分[2]徐学民钟炽昌熊治平.重楼皂甙成分的含量测定研究溶剂用量对重楼总皂苷的溶出率影响不大,可J].中草药,1986,17(11):13-14.能是酶的加入对其影响较大。考虑到实际工作状况(编辑:左媛媛)Studies on Water-extracting Technology From Rhizoma ParisNIAN Si-hui, ZHANG He-ming, ZHUO Yu-yanFaculty of Traditional Chinese Pharmary, Yunnan College of TCM, Kunming Yunnan 650200 ChinaABSTRACT: Objective: To resolve the question of filtrating in water-extracting from Phizoma paris: toget the best water-extracting Technology of the total Paris Steroid Glycosides(TPSG) Methods: mixingenzyme A and enzyme B during the process of water-extracting: explore time endurance,timestemperature, the amount of solvent pH and the size of particle by orthogonal experiment. Result: Theextracting-rate of TPSG improved 24. 28%, the amount of enzyme a is lml/ kg herbs, and the amount ofzyme B is 2ml/kg herbs. The best technology is following: 20 mu, 7 times water of pH7, extracting 3times at 60C, 3 hour every time. Conclusion: The technology is practicable.KEY WORDS: Rhizoma Paris; Water-extracting Technology; Orthogonal Experimaent(上接第9页)要临床表现为消渴的症状,无论有无血医学,1997,18(9):619-621.糖的改变均可辨证为消渴,从消渴论治。在临床中[5]陈濒珠西医内科学.(第五版)M·北京:人民卫生出版决不可将二者等同起来,而应针对具体的临床情况社,2002804进行治疗,以取得最佳疗效[6]赵凌云.1型糖尿病病因发病学进展[J.四川生理科学杂志,1995,17(4):21-25参考文献][7]郭月季,崔庆荣妊娠糖尿病的中医病因病机探讨[J].甘[1]王永炎中医内科学(第六版)[M].上海:上海科学技术肃中医学院学报,2004,21(1):21-22出版社,1991301[8]邓传贤糖尿病从肝论治刍议[冂.云南中医学院学报,[2]张红艳,李杰,闵秀全.2型糖尿病的病因遗传学研究进2005,28(3):19-21展[J].广西医学,2004,3(26):361-363[9]郭渝南糖尿病病因病机探识[.实用中西医结合临床,3]王兰英,高玉琪.2型糖尿病的脂代谢紊乱[J.《国外医2002,2(2);52-54.学》内分泌学分册,1995,15(4):185.(编辑:迟越)[4]徐亮,王家骥.2型糖尿病发病机理的研究进展[门].广东A Study on Comparing Diabets with Emaciation-thirst Disease of TCMLIANG Di-sai, XU Ye, SHI Xian-zhou. Advisor: HUANG Wen(Yunnan College of TCM, Kunming Yunnan 650200, China)ABSTRACT: Compared the difference and similaity of modern diabetes and emaciation-thirst Disease ofTCM in the aspects of the pathogenesis, clinical symptom and中国煤化工 dopt the diabetesand emaciation-thirst disease. The author explain that can't giCNMHGin the clinic, butshould combine the clinic carries on the treatment to thus obtaluKEY WORDS: Emaciation-thirst Disease: Diabetes: Eliminate and Research