不同浓度乙醇对大鼠肌肉组织影响的探讨

国美容医学2011年2月第20卷第2期 Chinese Journal of Aesthetic Medicine Feh201lvo.20N2程度的加重,这种变化渐趋明显。因此,癥痕组织的形成 for image interpretation[]. Echocardiography200623(2):103-107.可能与机体细胞免疫功能异常升高和体液免疫功能水平[7冷向锋王德昌然等烧伤后增生性癞痕成纤维细胞中TRAL降低有关。受体的表达及意义门中华整形外科杂志200521(6):444[参考文献]gical Reviews, 2006, 20(9): 5-9[]闫贵春表银辉痕发生机制研究进展门中国美容医学2010,19[9)Cilio CM. Daws MR,Malashicheva A, et al. Cytotoxic T lymphocyte(8):1251-1253.antigen 4 is induced in the thymus upon in vivo activation and its[2]郭建辉,曹毅.癥痕治疗的研究进展门浙江中医药大学学报,blockade prevents anti-CD3-mediated depletion of thymocytes [].J2007,31(3):402404Exper Med,1998188(7:1239-1246.[3]Borondo F, Wisniacki DA, Vergini EG, et al. The scar mechanism [10JImami N, Aspinall RGotch F. Role of the thymus in T lymphocyterevisited[]. Europ Physi J, 2008, 65(12): 93-101reconstitution(comment)]. Transplantation, 20006,(11)2238-2239[jAquet K, Krause KT, Denschel JR,et al. Eduction of myocardial sc[1姜五章季晓辉李五峰等环磷酰胺和环孢素A对SLE患者外size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the周血Th细胞亚群兔疫调节的作用团细胞与分子免疫学杂志mechanism[]? Stem Cells and Development, 2005, 14(3): 299-309.2008,24(2):172-174Drobnik J, Karbownik-Lewinska M, Szczepanowska Aet al.[2陈海燕韩捷华咏等类风湿关节炎患者Th细胞亚群的检测及础研究Regulatory influence of melatonin on collagen accumulation in the其临床意义门中国误诊学杂志20088(6:1272-1274infarcted heart scar J]. J Pine Res, 2008, 45(3): 285-290.[6JTabel GM, Whittaker P, Vlachonassios K,et al. Collagen fiber[收稿日期]201011-21[修回日期]201101-16morphology determines echogenicity of myocardial scar: implications编辑/张惠娟不同浓度乙醇对大鼠肌内纠织影响的探讨李岳令,陈石海,刘柳,段红钰(广西医科大学第一附属医院整形美容外科广西南宁530021)[摘要]目的:探讨不同浓度乙醇对大鼠腓肠肌功能及组织学的影响.方法:选取等重的雄性SD大鼠75只,随机分入A、B、C、DE五组,在各组大鼠左侧腓肠肌注射D.2ml浓度分別为50、60%、70%、80%、9β%的乙醇,右侧均注射相同量的生理盐水,分别于注射后第3、7、14、21和28天分离大鼠左右侧腓肠肌,检测每只大鼠左右侧腓肠肌的收编力差(△F)及肌体积差(△V),并取标本做巸染色,光镜下观察肌肉组织学变化,结果:注射相同天数,实验组A、B、C、D组ΔF与△V随乙醇浓度增加而明显升高(R0.05),D组与E组之间无显著差异(P0.05);同一乙醇浓度下,三周内,ΔF与ΔV均随时间延长而明显增加(R<0.05),与注射后第21天相比,注射后28天无明显差异(P0.05)。光镜下,随着时间延长及浓度增大腓肠肌纤維化程度明显加重.结论:随着浓度(50%-80%)增加,乙醇对大鼠腓肠肌损伤程度加重;当乙醇浓度超过80%时,腓肠肌收缩功能基本丧失及组织学上基本纤维化。注射21天后,肌肉组织纤维化程度基本稳定[关键词]肌肉组织;乙醇;血菅瘤[中图分类号]R732.2[文献标识码]A[文章编号]1008-64552011)02-0251-04To approach the different concentrations of alcohol on the myoideum of ratsLI Yue-ling, CHEN Shi-hai, LIU Liu, DUAN Hong-yu(Department of Plastic and Aesthetic Surgery The First Affiliated Hospital, Guangxi Medical University Nanning 530021Guangxi, China)Abstract: objective To explore the efficacy of the different concer中国煤化工of the functions andhistology of gastrocnemius muscle of rats. Methods 75 equipondeCN MH Gided into A.B. C DEfive groups randomly received the injection on the left of gastrocnemius muscle of rats in the 0.2ml of concentration ofalcohol that is 50%,60%,70%.80%.90% and on the right in the commensurate of physiological saline. Gastrocnemius通讯作者:陈石海,男,主任医师,广西医科大学第一附属氏院整形美容外科主任;主要研究方向:血管瘤皮瓣等E-mail: shihai003eyahoo com c中国美容医学2011年2月第20卷第2期 Chinese Joumal of Aesthetie Medicine. Feb.2011Vol.20.No2muscle of rats was dissected 3, 7, 14, 21 and 28 days later, and detected the difference of contractility(AF)and organism(Av) Extracted the specimens in HE and observed the change of muscle tissue in light microscope. Results The groupsof d and E had no significant deviation (P>0.05)after the same of injection of days In the homo- concentration ofethanol, AF and Av increased obviously over time (P<0.05)in three weeks. Compared with 21 days later, 28 days laternad no significant deviation (P>0.05). With time and concentration obviously increased, the gastrocnemius increased thedegree of myofibrosis aggregately. Conclusion When the concentration of alcohol over 80%, the contractile function ofgastrocnemius muscle loss and organization of basic fibrosis. The degree of myofibrosis stabled basically 21 days later.Key words: muscle tissue; alcohol; hemangioma无水乙醇肿瘤内灌注技术是近年来临床上用于治疗海1.5HE染色切片分析:测量体积后切取注射部位腓肠肌组绵状血管瘤尤其是肌肉血管瘤( intramuscular织,10%甲醛固定,常规石蜡包埋切片,染色,光镜下观察肌hemangioma,IMD有效方法之一,但由无水乙醇对病变周围细胞结构、肌膜、肌纤维及细胞核的变化肌肉神经等正常组织的损伤在一定程度上影响了疾病的治1.6统计方法:采用SPSs13.0统计分析系统,所有数据结果疗和病变部位功能的康复在某些情况下其危害性甚至超过均用均数士标准差(x士s)表示,用方差分析做组间比较及各了原发病。因此在无水乙醇治疗肿瘤的过程中,了解尤水乙时间点间比较P0.05差异有统计学意义醇对正常组织的影响,从而降低无水乙醇对病变周围正常组织的损伤,保证病变部位的功能是目前临床亟待解决的问2实验结果题。本研究旨在观察大鼠腓肠肌对注射不同浓度乙醇的作用2.1实验动物大体观察结果注射乙醇后,大鼠后肢活动频率效果探讨不同浓度乙醇与骨骼肌之间的关系,为临床应用和幅度均有不同程度减少,以术后3~4日最为明显,其中D提供选择依据组E组后肢活动减少程度较A组、B组C组明显。所有实验动物未见明显活动及觅食障碍。活体切取腓肠肌,与自身对照侧1材料和方法相比,实验侧肌肉组织颜色苍白、弹性降低,质地变硬1.1实验动物及分组:选取等重雄性SD大鼠75只,体重22腓肠肌收缩力△F:分别于注射不同浓度乙醇术后,第(180±10)g(广西医科大学动物实验中心提供),随机分入A、3、7、14、21、28天在活体状态下手术分离出两侧腓肠肌,通过B、C、D、E五组,每组15只。在各组大鼠左侧腓肠肌注射肌张力转换器,测量其每侧收缩力通过计算得出两侧变化0.2ml浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%的乙醇,右侧均注值。结果显示:不同的处理组间P0.00,不同的乙醇浓度射相同量的生理盐水。对腓肠肌收缩力△F的影响差异有统计学意义:D组与E组1.2动物模型的制备:实验中首先腹腔内注射1%戊巴比妥间P=0.993,80%与90%乙醇浓度对腓肠肌△F的变化差异无(40mg/kg);麻醉后,大鼠仰卧四肢外展位固定于解剖台上,统计学意义不同的时间手术分离组间P0.00,说明时间对常规消毒铺无菌巾单。于后肢小腿后侧做纵形切口,分离、显腓肠肌收缩力△F的影响差异有统计学意义:21天与28天露并游离腓肠肌。根据分组不同,各组分别于第3、7、14、21组间P0.933,第21天与28天手术对腓肠肌△F的变化差和28天随机取1只大鼠做腓肠肌各种检测异无统计学意义(表1)1.3腓肠肌收缩力变化△F的测定:预先运行 PCLab生物信实验侧/自身对照收缩力即为腓肠肌收缩力变化百分号采集处理系统将大鼠固定于实验台上。取后肢下段背侧率,由各实验组不同时间的腓肠肌收缩力改变可作出腓肠肌切口,切开皮肤分离出腓肠肌,于近端分离解剖出坐骨神经,收缩力变化趋势见图,见图1远端从肌腱止点处剪断用丝线将其与肌张力换能器连接给通过观察大鼠腓肠肌△F,了解肌肉收缩力的变化,可进予50g张力,使肌肉处于最适初长度。分别给予单收缩刺一步反映出腓肠肌功能的变化情况。随乙醇浓度的增加AD激强直刺激,记录收缩曲线和测量数值即得出腓肠肌收缩组实验侧肌肉收缩力减弱表明不同浓度(50%~80%)乙醇可力。通过测量每组大鼠两侧腓肠肌收缩力,求出每组平均差以导致肌肉收缩力变化不同随着浓度升高收缩力降低,D值,即△F,观察在第1天7天、14天、21天和28天各组腓组与E组之间△F没有显著差异,表明注射超过80%浓度乙肠肌平均收缩力ΔF变化情况醇腓肠肌基本纤维化;第21与第30天各组腓肠肌收缩力1.4肌肉体积变化△V的测定:显露游离大鼠腓肠肌,在肌△F相比没有显著差异,表明注射乙醇21天后,腓肠肌组织肉起止点处切断肌肉附着部,除去肌肉上附着的组织后将纤维腓肠肌放入已装有6m1甲醛的10m1量筒内,观察量筒刻度中国煤化工浓度乙醇术后,第3变化,即一侧腓肠肌的体积.同样测出另一侧的体积,求出每7、14CNMHG鼠两侧胖肠肌待测组平均的差值,即ΔV。观察在第3天、7天、14天、21天和量完收缩力后,迅速用量筒测量其体积,通过计算得出两侧28天各组腓肠肌平均体积△V变化情况腓肠肌体积变化△V。结果显示:不同的处理组间P0.000中国美容医学2011年2月第20卷第2期 Chinese joumal of aesthetic Medicine. Feb201 L. Vol.20N不同的乙醇浓度对腓肠肌体积△V的影响差异有统计学意由腓肠肌体积变化趋势图可见:在同一乙醇浓度下,随义;D组与E组间P=0.96880%与90%乙醇浓度对腓肠肌体积着时间延长,腓肠肌体积逐渐缩小,第21天后,体积变化不△V的变化差异无统计学意义。不同的时间手术分离组间明显。一周以后随着注射乙醇浓度升高腓肠肌体积变化增P0.000说明时间对腓肠肌体积△V的影响差异有统计学大,乙醇浓度超过80%,腓肠肌体积变化不明显。意义:21天与28天组间P=0.939,第2天与28天手术对腓2.4组织学观察:腓肠肌组织H染色,光镜下可见肠肌体积△V的变化差异无统计学意义(表2)。2.4.1空白组/自身对照侧:肌细胞显红色,肌细胞核位于实验侧/自身对照体积,即为腓肠肌体积变化百分率,细胞周边肌膜下,显蓝褐色。常态下肌细胞排列整齐、大小规由各实验组不同时间的腓肠肌体积改变可作出变化趋势图,则肌节完整可见(图3)见图2。2.4.2A组(50%乙醇):肌细胞排列整齐,肌纤维变细,肌膜整,肌间隙稍变宽,细胞核可见(图4)。→A组2.4.3B组(60%乙醇):肌细胞排列、形态稍絮乱,肌纤维少许B断裂、纤维化肌膜不完整肌间隙变宽细胞核可见(图5)。C组b组244C组(7%乙醇):肌细胞排列絮乱,形态不规则肌纤维断裂、纤维化明显肌膜被破坏肌间隙较宽细胞核可见(图6)础研究2.4.5D组(80%乙醇):肌细胞结构完全破坏,呈坏死状态,继观察时间(天)之坏死区纤维机化肌膜完全被破坏,细胞核碎裂消失(图7图1腓肠肌收缩力趋势图2.4.6E组(9鵑%乙醇):肌细胞结构完全破坏,成纤维化,肌速:图中ABC组与DE组相比在7-28天收缩力存在明显差膜完全被破坏肌纤维断裂、溶解,细胞核碎裂消失(图8)。异DE两组间差异无显著性P0.053讨论高浓度乙醇局部注射可以使受注射部位组织细胞脱水蛋白质发生凝固性坏死,产生无菌性炎症,进一步会发生纤维化和挛缩。自1983年日本杉浦倍之首先采用超声引导下经皮肝穿刺肿瘤内注入无水酒精疗法(PEI)治疗肝癌以来。国内外已逐步将无水乙醇应用于临床上,用于治疗肝血管瘤观察时间(天)肝囊肿国、肾囊肿、消化道出血以及海绵状血管瘤等疾图2腓肠肌体积变化趋势图病。由于灌注无水乙醇后,一些不可控因素常导致周围正常注:图中ABC组与DE组相比在7-28天体积变化存在明显差异,DE两组间差异无显著性,P0.05组织的变性坏死,从而限制乙醇在临床上的广泛应用。表1腓肠肌收缩力△F变化情况B组C组E组F值3天4.28±0.095.99±0.157.79±0.278.88士0.188.76±0.317天6.73±0.3515.54±0.5220.64±1.1640.26±0.5540.50±0.8014天27.28±0.3449.65±1.0964.83±29564.42±0.9915.690.00021天18.21±0.3732.73±2.155681±1.6475.55±0.6928天18.68±0.3532.28士1.405505士2.2773.99±14675.33士1,45F值衰2腓肠肌体积△V变化情况C组D组E组3天0.08±0.010.11±0.010.13±0.010.14±0.020.15士0.017天0.11±0.010.18士0.020.26±0.010.32±0.020.37±0.040.27±0.0.45±0.0321天0.16±0.00.40士0.030.60±0.62中国煤化工28天0.40±0.010.59±0.02CNMHGF值中国美容医学2011年2月第20卷第2期 Chinese Joumal of Aesthetic Medicine. Feb20LVo20N2图3正常大鼠肌肉图4A组大鼠肌肉田5B组大鼠肌肉图6c组大鼠肌肉图7D组大鼠肌肉图8E组大鼠肌肉肉内血管瘤(MD是位于肌内呈弥漫性生长的血管瘤,的进行研究比较少见,约占海绵状血管瘤的08%,常见于四肢,其次为面部及躯干,多同时侵犯皮下,肌肉组织,甚全侵犯至骨[参考文献]膜。目前醉灌注是治疗IM的主要手段之一。IH一般位[樊雪强刘鹏肌肉内血管瘤的诊断与治疗门中日友好医院学报,置比较深,血管畸形也比较严重,不但危及患者身体健康,治2005,19(4)242-24疗上也有很大的风险,尤其在乙醇注射的剂量较难把握剂量[2]Veriasova NN, Polysalov VN, Tarazov PG Long-term results of local小时效果不明显剂量过大对周围正常组织损伤严重导致器ethanol injection therapy in the treatment of hemangiomatosis of the官功能障碍极易出现严重并发症。临床有必要探索出既能治liver[].Veatm Khir Im ll Grek, 2003, 162(3): 22-26愈血管瘤,又不增加并发症的乙醇治疗浓度3]宓兵CT引导下穿刺注射酒精治疗肝肾囊肿疗效分析[中国医学创新2010,18()133-134.本实验将不同浓度醇注入大鼠肌肉组织来观察肌肉[4]王瑾瑜张毅修有成B超引导下肾囊肿穿刺注射无水乙醇治疗体积变化和肌肉收缩力改变同时组织切片观察肌肉组织学12例报告门中华临床医学研究杂志20084(6):871改变情况,结果发现乙醇浓度在50%-80%时,随着注射乙醇5贺军何龙泉陈晓理等无水乙醇介入治疗消化道出血一例中浓度增加,大鼠骨骼肌体积缩小和肌力减弱的程度均呈正增华普通外科杂志2006,21(1)34.加在光镜下肌肉组织破坏逐渐加重(见图、ⅢⅦ);当乙[6杨琴李大铁皮肤血管瘤治疗方法的现状及研究进展门遵义医醇浓度超过80%时,大鼠骨骼肌体积缩小和肌力减弱的程度学院学报200629(1):85-88不明显(P0.05),光镜下见肌肉组织基本纤维化(见图V、口7 Wild AT Raab P, Krauspe R Hemangioma of skeletal muscle[].ArchⅥ)。说明乙醇浓度<80%时,随L醇浓度增加对肌肉组织破坏Orthop Trauma Surg, 2000, 120(3-4): 139-143程度加重;当乙醇浓度>80%时,肌肉组织基本完全被纤维化毛雅君许光旭等Ⅲ研究报告也与实验的结果类同haemangioma report of twoith unusual localization U].Eur通过本实验得知当注射乙醇浓度达到80%时,大鼠腓肠Arch Otorhinolaryngol, 2003, 260(9): 495-498肌组织纤维化已达到最大值再增加乙醇的浓度,只会增加高凤山继英杜军无水醇栓塞及平阳霉素注射治疗复发性海容杂志2004106)330332对周围正常组织的损伤,而腓肠肌纤维化程度不在改变。通[10陈向齐傅琴香体表血管瘤治疗进展福州总医院学报2004过乙醇与肌肉关系的这一联系,为临床利用无水乙醇治疗l()606IMH提供一个参考。[毛雅君许光旭杨晓颜等神经干乙醇阻滞治疗骨骼肌痉李的报注射低浓度L醇可使肌肉保有一定的功能在一定的程告中国康复医学杂志200621(8:716-717度上还使肌肉体秋变小,后期肌肉体积不易恢复等特点,可[2Dailure of botulinum toxin为临床上治疗良性咬肌肥厚常存在作用不持久等缺点四2提供一定参考YH中国煤化工上 Eur Neurol2.00452(3)CNMHG本实验初步观察了不同浓度乙醇对大鼠骨骼肌功能定的影响。如果要进行更为全面的观察,尚须进一步研究骨[收稿日期]20101009[修纠日期20101223骼肌的形态、超微结构生化指标的变化,同时还需更加深入编辑/张惠娟