枳椇子影响乙醇代谢机理研究

Science and Technology of Food industry研究与探讨枳棋子影响乙醇代谢机理研究(中国农业大学食品学院,北京100094)任发政罗云波蒋菁莉要为了研究积棋子解酒保肝机理,实验建立了低剂乙醇乙醇为北京化工厂产品;牛血清蛋白为 Sigmu公模型组(自由使用2.5%乙醇、3.9g/kg体重-d)和高剂重乙司产品;其他试剂均为国产分析纯。醇模型纽(自由饮用8%乙醇12.6g/kg体重d),权子组(小鼠自由饮用mgm子浸液)子ICR雄性健康小鼠60只,23~25g维通利华实验持续30d验动物技术有限公司提供。测定小鼠肝脏乙醇脱氨酶(ADH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性及丙二群752紫外分光光度计上海棱光技术有限公司(mda)谷甘(sH)含量结果表明长期摄入乙醇 spectrumlab22p分光光度计上海棱光技术有限引起肝 ADH SOD GST活降低,导致MDA含量片高和GH含量下降,积子提取液可抗乙引起的公司DL40B离心机上海安亭科学仪器上述变化,具有解酒保肝作用关词旗子 ADH SOD MDA GSH1.2方法中图分类号:TS201.2文献标识码:A1.2.1动物分组1CR雄性健康小鼠60只,按体重文章编号:1002-030622206-02大小随机分组:空白对照组10只,饮用白来水;低醇模型组10只,饮用2.5%乙醇溶液,平均每只实验动物的乙醇摄入量为3.9g/kg体重d:高醇模型组10枳棋子为鼠李科植物枳棋 Hotenia dulcis只,饮用8%乙醇溶液,平均每只实验动物的乙醉平 Thunb的带有肉质果柄的果实或种子,又名鸡距子、均摄入量为12.6g/kg体重d;子浸提液加低醇拐枣等,其功效主要为清热利尿、止渴除灿解酒,组10只,乙醇用量同低醇模型组,饮用枳棋子液;用于热病烦渴、呃逆、呕吐、小使不利酒精中毒等药棋子浸提液加高醇组10只乙醇用量同高醇组饮物近年来,国内外学者对枳棋子药理作用及其机用枳棋子浸提液;枳棋子组10只,饮用棋子浸提制进行了研究。有文献报道,棋子对急性酒精中液。毒有预防和治疗作用,对CCL和D-氨基半乳糖诱导的实验性肝损伤及体外培养的肝细胞损伤具有保护实验周期为30d,日禁食14h.次日小鼠称重,颈椎脱处死,马上剖取肝脏,用预冷到4℃的生理作用为了探讨积棋子解酒保肝机理本实验从不同盐水冲洗2~3次,滤纸吸干。称取肝重,按1:9的比例实验组小鼠ADH、SOD、ST酶活性及MDA、CSH含加入pH7.4的磷酸盐缓冲液,冰浴研磨制成肝均浆,量等方面研究枳棋子解酒保肝机理。4℃下放置4h以上,12000/min低温离心20min,取1材料与方法上清液1.1材料与仪器1.2.2小鼠肝均浆中ADH活性的测定参照 Blair枳棋子浸提液积棋子购自北京宏生堂,25%乙的方法,测定单位时间内OD的改变,表示酶活力。测醇浸提2h,回收乙醇,过滤(每100ml含生药25g),定条件:p8.8肝均浆提取液0.1ml,5mmol/na10.1ml稀释为3mg/ml的枳棋子液待用;氧化型辅酶25mml1.乙醇,温度25℃,波长340m,每30s记录(NAD+)、还原型谷光甘肽(GSH)购于北京欣经科Dw值单位定义:单位时间内OD改变0.001为生物试剂公司1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为军一个活力单位U考玛斯亮法测定蛋白质含量事医学院药材供应站产品:SOD试剂盒、GSH试剂1.2.3小鼠肝均浆中MDA含量的测定TBA比色盒、MDA试剂盒购于北京康定泰克有限公司;95%法,具体操作按试剂盒说明1.2.4小肝均浆中SOD活性的测定黄氧化酶法,具体操作按试剂盒说明,收稿日期:2002-10-081.2.5小鼠肝均浆中GST活性的测定采用作者简介:任发政(1962-),男,博士,研究方向:食品科学研究与探讨Vo1.23,o.12,2002表1枳棋子对小鼠肝脏ADH,SOD、GST活性及GSH、MDA含量的影响AD/)S(/mg)MA(umo/g蛋白)ST(ml/m蛋) GSHmmol蛋白)空白对照组12.16±0.61123.011.753.75±14.650.6720.0070.4100低模型组10.04±1.06102.95±18.7678.52±14.170.588±0.0030.398±0.001高醇模型10.250.3673.20+155101.6923.580780.00203640.00115.19±0.39122.10±34.3671.53±11.4740.743±0.0040.520±0.004棋子+高醇6.0528687.7644757.50±8003500.390.003子组12.65±2.52127.07±30.7358.66±26.950.697±0.0030.432±0.002注:与空口组比较*p0.05,*p<0.01:与低醇模型组比较p<0.01;与高醇模型组比较p<0.01报道的方法,测定条件:pH65,肝均浆提取液05m,性的下降,有效地提高OD酶活性阻止SOD清除1 Ornol1L0 CDNB0.ml.30mml/.Sh0.1ml波长340m,体内白由基能力的下降,通过防止GSH耗竭,恢复记录单位时间内OD值的改变、结果以mg/min产生GST活性,增加GST催化GSH的结合反应,以减少的mol.cdn-gH络合物表示乙醇代谢氧自由基的产生,抑制脂质过氧化反应,抑1.2.6小鼠肝均浆中GSH含量的测定根据GSH制肝脏中MDA的升高,轻乙醇及其代谢产物对肝与二硫代二硝基苯印酸反应时能产生一种黄色物织的损伤,对抗肝脏脂质过氧化作用而保护肝脏、质,在420m下有最大吸收峰,可用比色法定量测定4结论CSH,具体操作按试剂盒说明4.1积棋可逆转乙醇所致的乙醇脱氢酶活性的下2实验结果降,保持乙醇氧化中间产物乙醛的产生与积累间的积子对小鼠肝脏ADH、SOD、GST酶活性及对平衡。肝脏GSH、MDA含量的影响见表1。4.2积棋子可抑制乙醇所致的丙二醛升高,提高超由表可知,长期给予乙醇会导致小鼠肝脏氧化物歧化酶活性,防止肝细胞膜的脂质过氧化作ADH、SOD、GST活性的降低,MDA含量升高,GSH含用,保护肝脏免受自由害。量降低,与空白对照组比较,均具有统计学差异,而4.3枳棋子可阻止乙醇所致的还原型谷胱甘肽的耗积子提取液拮抗了乙醇的上述不良作用。竭,恢复谷胱甘肽硫转移酶活性,确保GSH氧化还原3讨论过程的顺利进行,并加速乙醛的代谢火活长期和大量摄入乙醇会造成肝细胞的损伤3ADH是乙醇的氧化还原酶,在乙醇代谢中起重要作参考文献用,ADH活性的变化可影响到血中乙醇的浓度,若该1谢宗万,余友岑主编全国中草药名鉴(上册)北京:人民出版酶活性降或受到抑制,可使机体对乙醇的生物利社,1996.55用度提高,进而加重乙醇对脑、肝脏等器官的危害作2扬,陆红,枳子药理研究模况.中医药学报,2002,30(1:用。乙醇本身较易变成自由基,乙醇在体内的代谢54~56中间产物乙和多种氧化自由可对肝脏产生危3杨,王萍乙醇生物代及其对肝脏的毒性作用河尚医学害。在正常生理状态下,体内消除自由基的氧化还原研究,19987(1):78-79系统可维持体内自由基的平衡,但长期大量的乙醇4李文杰5OD在治疗超氧阴离子自由基所引起的疾病及抗摄入,使白由基产生增加,导致肝脏脂质过氧化。木裹老上的应用中国药学杂志,1989,24(7):398研究中,低剂量乙醇模型小鼠肝脏ADH、OD酶活5王新月急性酒精性肝损伤中医药防护作用实验研究概况性降低,MDA含量升高,与空白对照组比较有极显中国中医急198135-13性差异(P<0.01),GSH含量及CST酶活性降低,与空6张洪等枳棋子提取物对乙醇所致小鼠肝损伤的抗作用白对照比较差异显著(P<0.05):高剂量乙醇模型组广东药学学报,2001,17(3):180-181小鼠肝脏ADH、SOD、GST活性降低,MDA含量升7扬积子对乙醇所致小鼠肝脏损伤的预防作用中药高,同时CSH含量降低,与空白对照组比较差异极显药理与临床,2000.16(3):19~20(0.01),证实了乙醇对肝脏的毒性作用及对肝脏8扬,等积棋子酒与枳子水液解酒毒作用比校研究时解毒功能的影响。棋子能拮抗乙醇所致的各项指珍医国药201,126:481483标的改变,小鼠肝ADH,SOD、GST酶活性等指标 Blair A.H. et al. Some catalytic properties of human明显升高,MDA含量降低,GSH含量升高,与相关文 liver alcohol dehydrogenase. Biochemistry. 1966(61:2026献报道一致提示枳棋子对慢性乙醇性肝损伤有 10 Wiliam. H. Habig et al.Assays for Differentiation of一定的保护作用、子解酒保肝作用的机理与以tn- S-Transferases Biol.c14230713下几个方面有关:可逆转乙醇所致的乙醇脱氢酶活