口服聚乙二醇改性聚乳酸靶向分布实验

第24卷第12期第三军医大学学报Vol.24，No. 122002年12月ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAEDee. 2002-推测我们进一步采用纯乙醇固定细胞后加用Tri-chemie acute renal failure in rat[J]. Kidney Int , 1994 A464):1 050-ton-100以增加抗体对细胞的通透性,染色后出现与1 058.[2] GailiJ , Coleh D , Rabiner I, et al. Redistribution and dysfunction ofGailit相同的实验结果。实验结果显示，缺氧、氧化损integrins in cultured renal epithelial cells exposed to oxidative stres[ J ].伤后整合素a3的表达只存在分布的改变而无明显强，AmJ Physiol , 1993 2641 Pt 2)F149- FI57.度变化活细胞仅缺氧组染色的原因源于活细胞对抗[3] Zuk A ,BonventreJ V , Brown D ,et al. Polarity , integrin , and extracellu-体分子不通透而在空间.上阻碍了细胞基底侧表达的整lar matix dyamics in the postischemic rat kidneyC J]. Am J Physiol ,合素a3与其相应抗体间的正常抗原抗体反应所致。1998 275<3 Pr 1):C711- C731[ 4] Canfied P E , Geerdes A M ,Molitois B A. ffet of reversible ATP deple-活细胞仅缺氧组于细胞周边染色更加证实在本实验条tion on tight-junction integrity in LLC-PK1 cell[ J] Am J Physiol ,1991 ,件下缺氧后存在细胞整合素a3在侧缘的重新分布表261(6Pr2)F1 038- FI 045.明损伤后确实存在着整合素分子分布的改变。通过我[5] Gumbiner B M. Cell adhesion : the molecular basis of tssue architecture们在体肾缺血再灌注损伤后整合素a3的免疫金银染and morphogenesidJ] Cell ,1996 84( 3)345 - 357.[6] Lieherthal W , McKenney J B , Kieler C R ,et al. Betax1 integrin mediated色结果也显示出明显的细胞侧缘及顶侧的分布改变。adhesion between renal tubular cells after anoxic injury[ J]. J Am Soc本研究结果表明缺氧、氧化损伤后TEC整合素Nephrol 1997 82):175- 183.a3均可出现明显的极性分布变化这种变化有可能是[7] Romanov V ,Noiri E ,Cerwinki G ,et al . Two novel probes reveal tubular导致细胞间粘附力增强而细胞与基底面粘附力减弱的and vascular Ang-Gly-Asp( RGD ) binding sites in the ischemic rat kidney. [J] Kidney-Int ,1997 ,521 )93- 102.的基础。(编辑冷怀明)参考文献:[1] Nori E, Cailit J, Sheth D,en al. Cyelic RCD pepides aneiorate is-AAAAIAAAAAAACAACAAAAAAAAAAAAAAAAE文章编号1000-50 2002 )12-1415-02口服聚乙二醇改性聚乳酸靶向分布实验Studies on distribution of PELA after oral administration曾韦锟,任建敏,邹全明(第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆40038)聚乙二醇改性聚乳酸(PELA)是能在生物体内被水解或酶器国产),低温冷冻真空干燥器(国产)CT机(德国西门子公.解后吸收并排出体外的高分子聚合物。它具有无毒、靶向、缓司》雄性小型猪,体重为20 kf第三军医大学实验动物中心)。释性等优良性能,因此在载药方面显示出良好的应用前景。通1.2 方法过控制制造工艺可以将其制成不同直径大小的微球，从而产1.2.1 微球包裹泛影葡胺的制备方法参照文献[ 2.3 ]制生不同的定位效果1。本研究试采用与人在解剖结构上有较备低温真空干燥贮存备用。好可比性的小型猪为实验对象采用造影剂示踪法,从大体上1.2.2 微球的表征微球表面形态用AMRAY型扫描电子研究微球在动物胃肠道的靶向分布情况。显微镜照相观察粒径分布用WL-2激光粒度分析仪测定微球1材料和方法的粒径M.D用LeitzDiaplan-光学显微镜目测,计 算得数均粒径X即X=SX/n其中Xp为单个微球粒径;X 为数均粒径;n 为粒子数目(不少于150)结果平均粒径为6.4 pumo1.1材料1.2.3动物实验动物实验前禁食1do经口灌服20 ml液聚乙二醇改性聚乳酸PELA[ P( L-PEG2000X 95:5 )]:M,体石蜡油。全麻插胃管对照组灌服空微球( 20 g悬液实验组2000-23000 (本室合成)泛影葡胺(浓度为60% )聚乙烯醇灌服PELA包裹物悬液20g微球内含包裹的泛影葡胺约为10( PVA-1788 ) :中国石化总公司四川维尼纶厂生产。LeitzDiaplan-ml)。 于实验第7天禁食。经口灌服20 ml液体石蜡油。第8光学显微镜Wild MPS46、PHOTOAUTOMAT、Wild Leitz Wild天CT下观察活体及胃肠组织(离体》MPS52照相设备德国生产。AMRAY 型扫描电子显微镜。WL2激光粒度分析仪,TV 显微系统(重庆大学光电学院研制)可中国煤化工见/紫外分光光度计DU640(美国BECKMAN) ,低温高速离心TYHCNMHG服PELA包裹泛影葡胺的机(美国BECKMAN )高速乳化制作器T25B(美国)真空干燥实验组小型猪活体检查可见局部肠壁密度增强,胃肠组织离作者简介:曾韦镢1974- )男，贵州省贵阳市人硕士,医师主要从事病原体下胃壁及小肠粘膜出现致密影。提示微球包裹物沿胃、肠微生物的检测及预防等方面的研究。电话568753590壁沉积在小肠粘膜。收稿日期201-0606 修回日期2001-12-12(下转1419页)12期梁智勇等.应用AFLP法检测小鼠高、低转移性肝癌细胞株基因组的遗传差异结构的破坏严重,-般不从银染凝胶中回收DNA片(2)76- 80.段2。我们通过实践建立了一种简便的半玻板凝胶染[6] De Juan C ,Iniesta P ,Cruces J ,et al. DNA amplfication on chronosomne6p12 in non small cell lung cancer detected by arbitarily primed polymerase色法使银染凝胶DNA片段的回收成为可能。半玻板chain reatio[J] Int J Cancer ,1999 84( 4 ) 344 - 349.凝胶染色使待回收片段不受银离子破坏,并且连续点[7] Savelkoul P H M, Aarts HJ M, Hass J D, et al. Amplifedi fragment样使对回收片段的定位准确应用这-方法我们成功lengh polymophism analysis :the State of an Ar[ J]. J Clin Microbiol ,地回收了4条片段。由于从聚丙烯酰胺凝胶回收的产1999 37X 10)3 083-3 091.物量常很低,需要进行PCR再扩增才能进一步应用,[8] Lindsteda B Heira E , Vardunda T ,et al. A variation of the ampified -fragment length polymorphism( AFLP ) technique using three restriction en-我们将回收的4条片段再扩增均得到与目的片段大donucleases , and asessment of the enzyme combination Bgl-MfeI for小一致的产物。AFIP analysis of Salmonella enterica subsp. Enterica isolates[ J ] FEMS本实验对回收的4条片段进行克隆经筛选、鉴定Microbiol Lett 2000 ,189 1):19- 24.证实有1条回收片段克隆成功我们对其进行了测序。.[9]万春玲朱玉芳谭远德.AFLP标记在研究家蚕遗传多态性方面的应用J]生物技术, 19999 X5)4-9.通过GenBank用BLAST搜寻均未见同源性信息,我们[ 10] Allan B , Curtis C H. Carcinogenesis in mouse and human cells parallels目前还不能明确这条片段的价值,有可能是新的基因and paradoxe[ J]Carcngenesis 2000 21( 3)371 - 377序列,但还需要进一步验证才能明确。[11] Yamasaki H , 0mori Y ,Zaidan-Dagli M L , el al. Genetic and epigneticchanges of itellular conmunication genes during mulistageC J]. Cancer参考文献:Detect Prev , 1999 23(4)273 - 279.[12]张树辉,史景泉,魏泓.小鼠高低转移性肝癌微卫星不稳定性的研究J]第三军医大学学报,2000 22(1)64-67. .[ 1] Vos P ,Hogers R , Bleeker M ,et al. AFLP :a new technique for DNA fin-grpritin[ J] Nucleic Acids Res , 1995 ,23(21)4 407 - 4414.[ 13] Fukuda T ,Kido A , Kajino K ,et al . Cloning of dfreniall epressed gnes[2]金冬雁黎孟枫等译.分子克隆实验指南[ M].第2版.北京科学in highly and low mdastatic rat ostosaroms by a mndifiad cDNA-AFIP出版社1992.45- 60 325 - 33methoC[ J1 Biochen Bioplys Res Conmn , 1999 ,26K( 1)35-40.[3]肖翠英张思仲.PCR产物的克隆方法[J]中华医学遗传学杂志,[ 14] Majina S , Kajino K , FukudaT ,et al. A novel gene rising dbl quote ,left1997 ,14(3):161- 165.( low )Niban" upregulated in renal carcinogenesis : cloning by the cDNA-[4]况少青张宇舟陈竺.基因组扫描 遗传病相关基因定位的有利amplified fragment lengh polymorphism approaclC[ J]. Jpn J Cancer Res ,工具J].中华医学遗传学杂志,997 ,14(2)99- 103.2000,91(9)869-874.[5]赵勇丁金凤.寻找差异基因[ J].国外医学遗传学分册20000 23(编辑薛国文)(.上接1415页)特点但是这种方法需要分批处死动物不利于动态观察结果。而本实验首创的造影剂示踪法能够从大体上动态观测聚合物3讨论的靶向作用并具有一定的灵敏度 尤其它可活体观察的特点,使该方法可能在PELA的缓释实验中对连续动态观察具有应PELA具有无毒，可降解的优点,通过控制合成条件,PELA用价值。微球可以制成不同粒径的微球从而在机体组织内具有不同的关键词: PELA ;靶向实验靶向性利用PELA包裹抗原物质可制备口服疫苗这种高分子中图法分类号: R914文献标识码:B具有抗酸作用微球口服后,包裹物不受胃肠道消化酶及酸性的影响因此能够有效的运送抗原至粘膜部位,由于 PELA能够生物降解可以在粘膜局部保持抗原的缓慢释放,保证抗原的长效全程刺激免疫系统,而且实验还发现PELA抗原载体系统[1] Eldrdge J H , Stass J A , Meulbroek J A , et al . Biodegradable microspheres具有粘膜免疫佐剂效应。因此微球载体在疫苗免疫接种中呈ad vaccine delivery systen[J]. Mol Inmunol ,1991 28(3 ) 287.现出广泛的应用前景。[2] Lim D W ,Park T G.Serecomplex formation betwen enantioeerie PLA-PEC-PLA tiblock copolymers :characterization and use as protein-delivery本实验证明粒径在6 pm左右的PELA包裹物,口服一-周mecroparticulate carier[J]. J Polym Sci 2000 752):1 615-1 623.后,PELA 可在胃及肠道粘膜沉积下来具有良好的胃肠道靶向[3] Hans K , Kricheldorf H R , Better D , et al . Ploylactones 2 3 polymeriza-性。能够在CT下观察到明显的影像学改变,说明局部肠道对tion of racemic and meso D ,L-lactide with various catalysts stereo- chermical微球具有较好的捕获作用。在国内外的类似的研究中多采用aspects[J]. Ploymer ,1992 33(3)2 817- 2824.小型哺乳动物而本实验采用的小型猪其免疫系统和消化器[4] Eyles J E ,illiamson E D , Alpar H O , et al . Immumologcal reponses to官在解剖、组织、生理代谢等方面与人类极为相似的。通过对nasal delivery of free and encapsulated tetanus toxoid : studies on the efct大型哺乳动物的研究,尤其是粒径在6pum左右的微粒胃肠道of vehicle volumd[J]. Int J Phamm , 1999 ,189 1 ):75 -9.的靶向数据对聚合物的进一步 人体实验具有-定的参考价[5]张文彬贾文祥刘聪等.口服霍乱微球疫苗的制备极其靶向值。在类似的研究中聚合物的示踪方法多采用荧光放射性标中国煤化工-(1)31- 33.(编辑陈聪连)记法45]这种方法适用于局部、微观检测具有较高检出率等"TYHCNMH G .