兔肾脏DDAH活性测定方法的研究

目的建立日本大耳白家兔肾脏二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶(DDAH)活性的检测方法.方法空气栓塞处死正常日本大耳白家兔后,取出肾脏并制备匀浆,以非对称性二甲基精氨酸(ADMA)为底物,用UV-265型分光光度计在525 nm下测定生成L-胍氨酸(L-Cit)的量,不同条件下比较,筛选最适条件,并计算DDAH降解ADMA的酶促反应动力学参数.结果 DDAH降解ADMA的酶促反应动力学参数为Km=(0.28±0.10) mmol*L-1,Vm=(1.36±0.42) mmol*L-1*g-1*min-1.本实验选定的兔肾DDAH活性检测最适条件为:酶蛋白浓度12 g*L-1、缓冲液最适pH 7.4、ADMA终浓度2 mmol*L-1、反应时间30 min.结论本法简便易行,且以Km值作为确定酶促反应底物浓度的依据,有利于准确检测该酶活性.