紫草的提取工艺

第28卷,第4期光谱实室Vol. 28, No. 42011年7月Chinese Journal of spectroscopy LaboratoryJuly 20 1 1紫草的提取工艺喻录容韩宪忠①(重庆医科大学中医药学院重庆市沙坪坝区虎溪镇大学城中路401331)a(重庆市第三人民医院药剂科重庆市4000】4)摘要对紫草提取工艺中各参数进行了优化,为紫草工业化提取提供一定的参考;以左旋紫草素含量的测定为工艺指标,通过正交设计试验,对乙醇浓度,乙醇体积浸泡时间,及渗漉时间各因素进行了考察;紫草最佳提取工艺为:5倍量80%乙醇浸泡16h,再加10倍量80%的乙醇渗漉4h;适宜工艺为:5倍量80%乙醇浸泡12h,再加10倍量80%的乙醇惨漉4h;本工艺设计合理,工艺稳定,左旋紫草素提取率高质量可控,适宜于工业化生产关键询紫草;左旋紫草素;正交试验;提取工艺中图分类号:0657.7+2文献标识码:A文章编号:1004-8138(2011)04-2055-041引言紫草甘寒,凉血活血。近年来研究显示,紫草具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、调节机体免疫功能的活性,有明显的抗过敏作用。临床用于治疗过敏性疾病获得良效如过敏性紫癜、过敏性鼻炎。主要成分有紫草素、乙酰紫草素等。本文通过对紫草进行提取工艺的研究,为工业化大生产提供一种质量可控、工艺稳定的提取方法。2实验部分21试剂与药品左旋紫草素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110769-200405);95%乙醇[分析纯,重庆川东化工(集团)有限公司化学试剂厂];甲酸(分析纯,重庆北碚化学试剂厂);乙腈(色谱纯江苏汉邦科技有限公司)。实验用水为蒸馏水(自制)2.2实验仪器agilent110高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) agilent8453紫外分光光度计(美国安捷伦公司); Agilent色谱工作站(美国安捷伦公司);AL-204电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司);DJ2003电子天平(沈阳龙腾电子有限公司);KQ500B超声清洗仪器(昆山市超声仪器有限公司);渗漉柱(φ=90cm×700mm,重庆市渝北区科教玻璃仪器厂);渗漉柱(φ=70cm×50mm,重庆市渝北区科教玻璃仪器厂中国煤化工CNMHG①联系人,手机;(0)15683815103(0)13251403598;(0)13101327285;EmmJ403,connyurong4976@163.com作者简介:喻录容(1976-),女,重庆市人讲师硕士,主要从事天然产物研究工作收稿日期:2011-05-19;接受日期:2011-07-012056光谱实验室第28卷2.3药材处方所用紫草购自重庆仲景医药有限责任公司经重庆医科大学中药教研室林於副教授鉴定紫草为紫草科植物新疆紫草[ Arnebia euchroma(Ryle) Johnst.]的干燥根,质量符合《中国药典》2005年版一部紫草项下的有关各项规定。2.4实验方法紫草中主要含萘醌色素类物质难溶于水易溶于乙醇、石油醚、氯仿乙酸乙脂等有机溶剂1-4。参考文献[5-7],考虑到生产成本和实际生产情况,本文选择乙醇作为溶剂进行渗漉提取。经过预实验,选用乙醇浓度、乙醇用量浸泡时间渗漉时间4个因素每个因素3个水平,按L2(3)正交表进行试验,见表1表2。亵1因与水平水平因素A乙醇浓度(%B乙醇体积(倍)C浸泡时间(h)D渗漉时间(h)称取紫草粗粉9份,每份20g按表2安排试验,分别接收全部渗漉液渗漉液摇匀过滤,取漶液适量,用0.45m微孔滤膜过滤续滤液作为左旋紫草素含量测定的供试液。按上述建立方法测定并计算从药材中提取出左旋紫草素的含量。药材中左旋紫草素含量为0.04689%试验结果见表表2L(34)正交设计结果表因素结果实验号B左旋紫草素(%)0.036640.041000.036120.101000.08215085690.113760.114760.109140.109440.107230.112930.10901I0.033670.027380.027360.028560.0297900.037640.036340.008100.01087中国煤化工3结果与讨论CNMHG3.1结果分析从24节可以得知影响因素顺序为B>C>A>D,最佳条件为A2B2CD2。根据正交试验结第4期喻录容等:紫草的提取工艺2057果浸泡时间12h(C2)和16hC3)只相差3.46%。对方差分析中由于因素A的离差平方和最小,把其作为误差项,方差分析结果因素A、B、C、D对实验结果均无显著差异,可能是由于紫草本身质地比较疏松因此有效成分较易提取出来。结果见表3亵3方差分析表离差平方和均方方差来源自由度F值值(×10-5)×10-5)1.0>0.05ABc19.0>0.05D12.0差A10.025.0注;Faa1(,)=99.0;Fa(,=19.0考虑到节约成本和简化工艺,拟将提取工艺确定为A2BC2D2,并将拟定工艺与最佳工艺进行试验比较,结果见表44最佳工艺和拟定工艺试验结果试验条件序号左旋紫草素含量(%)04最佳工艺条件0.0433A2B2 C3D31230.0412平均0.0426拟用工艺条件A B.C2Dz0.0122平均0.0122拟用工艺比最佳工艺减少(%)试验结果显示,拟定工艺和最佳工艺各指标差异不大,左旋紫草素含量最佳工艺比拟定工艺略高,故为了节约成本缩短生产周期确定采用拟定工艺,即紫草粉碎成粗粉,用5倍量80%乙醇浸泡12h,再加10倍量80%的乙醇渗漉4h3.2验证试验按优化拟定工艺条件A2BC2D2重复实验3次结果见表5表5验证实验结果实验方案Az B2C2D实验号左旋紫草素含量(%0.04270.04200.0430平均含量(%)0.0426实验结果表明,所选工艺条件合理、可行,工艺稳定且重现性好结论紫草中有效成分含量测定方法《中国药典》以羟却V凵中国煤化工方法采用紫外可见分光光度法,测定其含量。但这样的含量测定显得比CNMHG中的主要有效成份的含量,本文参考文献[10-12],采用HPLC测定其中的主要有效成分左旋紫草素,且操作方便,定量准确,实用性强。因此,本实验选用HPLC测定提取液中左旋紫草素的含量。现代研究表明,紫草中所含羟基萘醌色素类物质具有较强抗过敏、抗炎作用,调节鼻黏膜血管2058光谱实验室第28卷收缩、舒张功能,以及改善局部血液循环的作用也具有明显的抗生育抗肿瘤杀菌抗病毒保肝和免疫调节等作用。根据药材所含主要活性成分的理化性质,并结合工业化生产实际要求,选用乙醇来进行提取如果选用其他有机溶剂提取不仅会增加成本,还有可能带入有害杂质加大了最终产品的毒副作用。通过正交试验,以左旋紫草素的含量为测定指标,优选出了紫草提取的最佳工艺条件,并据此制定出紫草的提取工艺:紫草粉碎成粗粉,用5倍量80%乙醇浸泡12h,再加10倍量80%的乙醇渗漉4h。本工艺设计合理,工艺稳定,左旋紫草素提取率高,质量可控,适宜于工业化生产参考文献[1]戴冰周新蓓尹爱武等新疆软紫草四种溶媒系统提取物紫草素含量测定及急性毒性的实验研究[]中国中医药科技,200513(3):168-169.[2]刘晓华易建勇紫草提取纯化工艺优选及稳定性研究[.中药材,2001,24(5):357-358.[3]杨晓笛,卢锋黄美充等中药紫草有效成分的提取[]汕头大学学报,2002,17(4):67-70.[4]乔秀文但建明曾宪佳等新疆紫草总萘醌色素的理化性质研究[门]广州食品工业科技,2004,20(2);70-7.[5]杨秀芳紫草提取工艺的优化[门陕西科技大学季报,2004,22(4):35-37[6]汪征明,利华强孙俊军正交试验优选复方紫草袖的制备工艺[]安徽医药,2005,9(8):571-572[7]严炎中徐雯宇曹国建正交试验优选紫草素的微波提取工艺[J].医药导报,2005,24(4)1327-328.[8]周俊伟正交试验法优选厚朴酚提取工艺[门陕西中医学院学报,2006,29(6):5960.[9]姚干,何亲玉,方积年黄芩总黄酮提取及纯化工艺的研究[门]中威药,2006,28(11)1568-1571[10]孟宪生沙明曹爱民等HPLC法测定紫草及其制剂紫金油中左旋紫草素的含量[门]中草药,200134(7)615-61611]伍毅HPLC法测定紫草油中左旋紫草素的含量[]中药新药与临床药理,2005,16(1)166-68[12]张善玉朴美兰李梅等高效液相色谱法测定紫草涂膜剂中紫草素的含量[门时珍国医国药,20,14(12):729-730Extraction Technology of Arnebia Euchroma(Royle)JohnstYU Lu- Rong HAN Xian-Zhong(Institute of Traditional Chinese Medicine, Chongging Medical University, Chongging 401331, P. R. China)a(Department of Pharmacy. The 3rd People' s Hos pita! in Chongqing. Chongging 400014, P. R. china)Abstract The each parameter of the extraction technology of Arnebia euchroma(Royle)Johnsoptimized, in order to provide the certain reference for industrialization extraction of arnebiaeuchroma(royle)Johnst., the various factors, including alcohol concentration, alcohol volume, soakintime and infiltration time, were investigated by the orthogonal design experiment with determinationof L-shikonin content as technology index. The optimal extration technology of Arnebia euchroma(Royle)Johnst was as follows: concentration alcohol of 80% for 5 times, soaking time of 16h andinfiltration time of 4h by 10 times 80% alcohol. The appropriate technology was as follows: soakingtime of 12h by 5 times 80% alcohol and infiltration tin vhnology is rational design, stable technology, high extYH中国煤化工0% alcohol.TheCNMHGn and controlleduality, and that suits to industrialization productionKey words Arnebia Euchroma( Royle)Johnst; L-shikonin; Orthogonal Test; ExtractionTechnology