乙醇提取苦瓜皂甙的工艺研究

112宁夏医学杂志2005年2月第27卷第2期 ingxia Med,feb.2005,va27n.2文章编号:1001-5949(2005)02-0112-03·实验研究乙醇提取苦瓜皂甙的工艺研究孙磊【摘要]目的采用乙醇提取苦瓜皂甙,确定最佳工艺。方法采用单因素和正交试验法优选提取苦瓜皂甙的最佳工艺,建立合理可靠的提取条件。结果最佳提取温度70℃、溶剂用量为苦瓜的9倍量,提取时间3小时、乙醇浓度60%。结论工艺可行、合理。关键词]苦瓜皂;乙醇;提取中图分类号R284.2文献标识码]A Study for technology of extracting balsamper glycoside with ethanol SUN Lei.(College of phamacy Harbin Uhiversity of commerce) [Abstract] Objective Adopr ethanol as the solevent to extract balsamper glycoside, and established the optimum process. Methods Single-factor and orthogonal design were used to choose the optimum extraction Process. So as to ensure the reasonable and reliable extracting condition. Results The optimum temperature is 70, the solvent is 9 times of the balsamper the extracting time is 3 hours, the concentration of the ethanol is 60%. Conclusion The process is available and reliable. [Key words] Balsamper slycoside; Ethanol Ertraction苦瓜系葫芦科苦瓜属植物的果实,又名凉瓜癞0.10、0.15、0.20、0.25、0.30ml分别置于具塞试管中,瓜含有苦瓜素甙F1、1、G、胡萝卜甾醇等活性成水浴挥去溶剂,加入新配制的5%香草醛-冰乙酸溶分,含苦瓜甙(为B-谷甾醇--D-葡萄糖甙和5、液0.2ml,高氯酸0.8ml。在60℃水浴中加热15分25、-豆二稀醇-3-葡萄糖甙的等分子混合物)、钟,流水冷却,加冰乙酸5ml,摇匀,在15min内于波长苦瓜蛋白、5-羟基色胺、多种氨基酸、果胶类胰岛548m处分别测吸光度,结果见表1另取无水乙醇素或称植物胰岛素(Plant insuliu)等。苦瓜性味苦随行空白对照(取0.35ml于具塞试管中,水浴挥去溶寒,具有消暑涤热、明目解毒之功效。药理研究表剂)。以吸光度(A)为纵坐标,人参皂甙Rg1浓度(C)明苦瓜具有降血糖、抗生育抗突变、抗菌、免疫调为横坐标绘制标准曲线。经统计处理,得线形回归节和抗HV等作用+5。关于苦瓜皂甙的药理作用方程为:Y=0.0022x+0.0135,r=0.9974的研究已取得了很大进展,但苦瓜皂甙提取工艺的表1人参皂甙Rg1标准品浓度与吸光度研究尚少见报道,本实验研究了用乙醇提取苦瓜皂体积(ml)0.000.050.100.150.200.250.30甙,并确定了最佳提取条件。浓度(m)02550751001251501材料与方法吸光度00.0740.1320.1830.2260.2790.3371.1一般资料:苦瓜(购自哈尔滨第一百货商场),人参皂甙Rg1标准品(中国药品生物制品检定所)。2.2苦瓜皂甙的测定:将苦瓜洗净、去籽、切片、烘1.2方法采用单因素和正交试验法优选提取苦瓜干、粉碎、脱脂、烘干,用乙醇回流提取。将提取液抽皂甙的最佳工艺。仪器为721分光光度计(上海第三滤、过滤,在60℃水浴中浓缩,然后用无水乙醇定容分析仪器厂),系列原装 PRECISA天平(瑞士公至10ml,过滤,取1ml滤液于具塞试管中,用无水乙司)。醇再定容至10ml,取0.2ml于具塞试管中,在60℃水1.3统计方法:通过正交实验表做方差分析得到结浴中挥去溶剂,加入新配制的5%香草醛-冰乙酸溶论。液0.2ml,高氯酸0.8ml。在60℃水浴中加热15分2结果钟,流水冷却,加冰乙酸5ml,摇匀,在15分钟内于波2.1标准曲线的制备:精密称取人参皂甙Rg1的标长548mm处测吸光度A(取无水乙醇0.35ml作空白准品2mg,加无水乙醇溶解定容至4ml,摇匀,作为对对照)。照品溶液。精密吸取上述对照品溶液0.05、2.3单因素的确定宁夏医学杂志2005年2月第27卷第2期 Ningxia Med Feb.2005,vol2.n.2113瓜粉末于4个提取瓶中,然后向其中分别加入料液用量、提取时间、误差为4因素,选取3个水平进行实比为1:7、1:8、1:9、1:10的80%的乙醇,在80℃水浴验。因素水平见表6,正交实验结果见表7。中回流提取3小时。测吸光度(见表2)。表6因素水平表2不同乙醇用量提取苦瓜皂甙的结果因素用量产量(g)得率%吸光度水平提取温度(℃)料液比(wv)提取时间(h)1:70.01030.520.240601:81:8230.01080.540.252123701:91:90.01230.620.285801:101:100.00950.480.223表71(3)正交试验设计及结果2.3.2不同乙醇浓度提取苦瓜皂甙:分别称取2g苦序号序号AB因素皂甙含量 C E (mg)瓜粉末于4个提取瓶中,然后分别向其中加入9倍的1110.5640%、60%、80%、95%的乙醇,在80℃的水浴中回流21214.746提取3小时,测吸光度(见表3)。342231231230123231312133313.485312.379表3不同乙醇浓度提取苦瓜皂甙的结果5223114.594浓度%产量(g)得率%吸光度62213.700.00850.430.20273211.19700890.00960.480.22483313.9190.00900.460.21393114.3510.00800.400.190K138.79534.14038.18439.51040.67443.26041.47539.64539.4681.53839.27639.782.3.3不同提取时间提取苦瓜皂甙:分别称取2g苦k12.9321.38012.7283.170瓜粉末于4个提取瓶中,然后分别向其中加入9倍的k213.55814.42013.82513.215.60%的乙醇,在80℃的水浴中分别回流提取2h、3h、k313.15613.84613.09213.261极差R0.6263.0401.0970.0914h、5h,吸光度结果见表4。优水平A2B2C2表4不同提取时间提取苦瓜皂甙的结果时间()产量(g)得率%吸光度将上述结果做方差分析,结果见表80.01260.630.290表8方差分析0.01270.640.29240.01230.620.285误差来源偏差平方和自由度50.01170.560.270方差比临界值显著性贡献 F%0.604246.46219.0003.315.64921203.76919.000862.3.4不同温度提取苦瓜皂甙:分别称取2g苦瓜ABT1.8742144.15419.00010粉末于4个提取瓶中,然后分别向其中加入9倍的误差Eo0.01020.005T18.137860%的乙醇,分别在50℃、60℃、70℃、80℃的水浴中回流提取3小时,测吸光度(见表5)°结果显示,乙醇的浓度对苦瓜皂甙吸光度的影表5不同温度提取苦瓜皂甙的结果响最小,可以视为误差列。其他3个因素,通过方差温度℃产量(g)得率%吸光度500.01140.570.265分析,对苦瓜皂甙含量均有非常显著的影响,并确定600.01170.590.270最佳提取工艺条件为:A2、B2、C2。700.01440.720.3303讨论800.01290.650.298本实验对苦瓜总皂甙的提取工艺进行了研究,通过单因素和正交实验确定了最佳提取工艺的条件2.4正交实验:根据单因素实验结果,选择影响苦为:提取温度70℃,乙醇用量为苦瓜的9倍量,提取瓜皂甙类化合物提取效果各因素中有意义的水平做时间为3小时,乙醇浓度为60%。通过对实验结果正交实验,对结果进行极差和方差分析,以确定最佳的分析确定了影响因素的主次:料液比→提取时间114宁夏医学杂志2005年2月第27卷第2期 Nirgxia Med,eb.200,v7.2醇作为提取溶剂,而不用甲醇,是考虑到它的安全1995.237-238.性,同时乙醇价廉,可以用于工业上大量的生产提3】江苏新医学院中药大辞典(上册)[M]上海:上海科技出版社1986,1281.取。4]孙宝莹.苦瓜皂鼠的药效学实验研究[J].河南中医药学刊参考文献]1994,9(6):19.[]姜毅.苦瓜皂降糖作用的临床观察[J]实用中西医结合杂志,[5]张旭忠苦瓜抗菌作用的研究中草药1995,26(10):5561996,9(3):179.[收稿日期]2004-11-15[责任编辑]杨自革[2]陈庆全实用临床草药[M].第2版.福建:暨南大学出版社,文章编号:1001-5949(2005)02-0114-01子宫体血管外皮肉瘤1例沈华关键词】子宫体;皮肉瘤【中图分类号】R713.42【文献标识码]B1病例资料广泛子宫全切术,术后剖开子宫,肌层呈均匀性增厚,切面呈患者女,38岁,孕6产4主因月经周期缩短,月经量增多灰白色海绵状改变,宫腔未见异常剖开后壁凸出肿物及左侧5年,加重20天,于2002年9月13日急诊入院。包裹卵巢及输卵管,内见脑浆样组织流出,剖开左侧骨盆漏斗患者既往月经周期规律,经量正常,痛经(-)。5年前无韧带,内有瘤栓形成。常规送病检,术后2天,术前病检结果明显诱因出现月经周期缩短,经期延长,经量较前明显增多。送检组织中血管弥漫增生,血管间充血,血管周围细胞紧密排经期伴下腹坠痛及腰骶部胀痛,曾在院外多次诊治,效果不列,整个组织呈息肉状,外皮有柱状或立方上皮被覆。考虑子佳。末次月经2002年8月23日,阴道流血至入院,量多未见宫血管外皮瘤。术后病理诊断:①子宫体血管外皮肉瘤,有坏烂肉样组织及水泡状物排出,近3天出现头晕眼花阴道大死,卵巢、输卵管、韧带及另送组织中均见侵犯转移,肌间淋巴量流血故急诊入院。既往体健无手术及外伤史无咳嗽咳管中有瘤栓;②宫颈黏膜慢性炎。痰,无明显消瘦及体重减轻,大小便正常。2讨论查体:B80/50mmHg,发育正常,营养中。重度贫血貌。血管外皮瘤是一种起源于血管外皮细胞的肿瘤,它的生妇科检查:外阴发育正常,婚产型。阴道内有暗红色血液,量物学行为可有良性,恶性之分,但其组织形态目前尚无定论多。宫颈肥大、光滑、质硬。宫体约孕3个月妊娠大小,凸凹本瘤较为少见,本瘤可发生于任何年龄组患者,男女性别的分不平,质硬,活动欠佳,触痛明显。于左侧附件区可触及约布无明显差异。本瘤可发生于身体的任何部位,但以下肢、腹4cm×3cm大小肿物囊性感,与子宫关系密切,右附件区未触膜后和头颈部为最常见。多见于深部肌肉深筋膜甚至累及及明显异常。骨膜,发生于子宫者罕见,临床未见报道过。该瘤的病程长短辅助检查:①B超:宫体前位,体积增大,轮廓不规则,宫不一,从数年至数十年,生长缓慢,临床上早期多表现为无痛壁回声不均匀。在后壁可见大小约5.2cm×3.3m实性包块,性肿块,随着病变的发展,周围脏器可因肿瘤体积的增大而产边界欠清,内回声不均匀可见片状液区回声。另在前壁近宫生压迫或浸润的症状;子宫肉瘤罕见,是一种恶性程度极高的颈处见2.4cm×2.2cm低回声包块,边界欠清。超声诊断:子女性生殖器官肿瘤,子宫肉瘤是来源于子宫肌层或肌层内的宫多发性实性包块(考虑子宫肌瘤);②血常规:GB79g/L其结缔组织或子宫内膜的结缔组织约占子宫恶性肿瘤的2%余各项值正常;③胸部X线片:未见异常。4%,好发于绝经后的妇女,子宫肉瘤最主要的突出症状,阴入院诊治:①子宫多发肌瘤;②失血性休克;③失血性贫道不规则流血,量或多或少,下腹部包块迅速增大,晚期肉瘤一血。入院后积极治疗休克,2小时后患者血压10070mmHg向周围组织浸润,并压迫周围组织或脏器,即引起下腹痛及腰一般情况好转,急行清宫术,术中探宫腔13cm感宫腔内平滑痛等,当压迫直肠、膀胱时即出现相关脏器被压迫的症状,癌刮出少许内膜组织送病检(本院无快速冰冻切片)。于入院第转移至腹膜或大网膜时可出现血性腹水,疾病后期,患者往往2天,患者阴道流血量又剧增,故急行全子宫切除术,术中见有恶液质、消瘦继发性贫血等全身衰竭现象子宫增大约3个月妊娠大小,质硬,于子宫后壁可见一约5cm本例患者就诊时最主要的症状是月经周期短,月经量增×3cm大小肿物凸出,似浆膜下肌瘤但与宫壁界限不清,质多和继发性贫血,无明显压迫症状。发病年龄,临床症状及体脆。左侧输卵管增粗约拇指状变短,伞端与该侧卵巢包裹形征完全与子宫肌瘤相似。该病例极少见,致使入院时诊断有成育端,增大约5cm×4cm×3cm。左侧骨盆漏斗韧带增粗,呈误,但术中发现有恶变倾向,故手术范围选择恰当,未延误治黑紫色,左侧主韧带增厚,肉眼观有恶变倾向。故行次疗。该瘤易转移至肺部,故应常规行肺部X线摄片,术后常规化疗。