乙醇对胃乙醇脱氢酶活性变化的影响

临床消化病杂本2001年第13卷第4期乙醇对胃乙醇脱氢酶活性变化的影响R5 A中国医科大学第一临床附属医院消化内科(沈阳10001)王国祥程云友李军刘事荣犢萋目的:探讨乙醇对胃乙醇脱氢膨( Alcohol dehydrogenase,ADH活性变化的彩响。方法: Wistar大鼠52随机分成两组:模型组32只,对照组20只。用乙醇直接灌胃的方法建立大鼠模型;用酶组织细胞化学染色技术,观察胃DH活性变化,并用 LUZEX-F灰度图像分析仪进行半定量。结果:随砦乙醇灌注量的增加和灌注时间的延长,胃ADH活性进行性下降,与对照组有显著性差异(P<0.05);停止瘪注后1个月,胃ADH活性明显恢复,且与正常对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:乙醇导致胃ADH活性进行性下降从而降低了乙醇首过代谢,增加了乙醇对肝脏等器官的毒害作用关键调乙醇脱氢酶乙醇组织细胞化学胃Effect of Alcohol on Active Alteration of Gastric Alcohol DehydrogenaseWang Guo-xiang, Cheng Yun-you, LI Jun, et alDigestion Department of Internal Medicine, The First Armlliated Clinical Haspital, China Medical Uaiversity, Shenyangl1000lAbstract Purpose: Effect of alcohol on activity variety of gastric alcohol dehydrogenase( ADH)wasinvestigated. Methods: Fifty-two rats were divided into two groups in model one( 32/52)and control one(20/52), at random. Model one was made of directly perfusing alcohol into stomach. The activity varietiesof gastrobserved by the optical microscopy after gastric tissues were stained by enzyme histo-cytochemistry assay. The activity varieties were determined by LuzEx-F analysis instrument as a semimethod. Results: It was shown that the activities of gastric adh gradually decreased alongthlume of alcohol increased and the duration of perfusion prolonged. There were significant differences between model group and control one( P <0. 05). The activity of gastric ADH significantly recoveredone month after abstinence from alcohol. There were not significant differences between two groups(P>0. 05). Conclusion: Alcohol resulted in activity descending of gastric ADH, as a result of decreasing firatpass metabolism of gastric alcohol and increasing alcoholic poisonous roles in liver and other organsKey words Alcohol dehydrogenase Alcohol Enzyme histo-cytochemistry assay Stomach乙醇脱氢酶( Alcohol dehydrogenase,ADH)是参下,用平衡饲料喂养。与乙醇代谢的重要酶类之一(。它主要氧化乙醇成1.2实验方法乙醛,乙醛又在乙醛脱氢酶作用下生成乙酸最后分解1.2.1动物模型建立:实验动物随机分为两组,其中成二氧化碳和水。近年来,胃ADH在乙醇首过代谢对照组20只模型组32只。正常喂养1周后开始建( First pass metabolism,FPM)中的作用倍受人们瞩立模型。(1)模型组给予40%的乙醇(国产分析醇),8目认为胃ADH在乙醇FPM中起主要作用23。然g/(kgd),分3次灌胃;至第4周末将乙醇浓度升至而目前关于长期饮酒后的胃ADH活性变化的研究较50%,9g/(kgd,分3次灌胃;至第8周末,乙醇量升少,另外,胃ADH活性的变化与胃粘膜病理改变的关至10g/(kgd),分3次灌胃;至第12周末模型建立成系亦未确定,为此我们进行了相关的实验性研究功。(2)对照组给予相同体积的蒸馏水灌胃,日3次。两组均于开始灌胃后4周末、8周末、12周末分批处1对象和方法死模型组各8只,对照组各5只。两组余下的动物用平衡饲料判1个目后处研联酪后迅速切取新鲜胃1,1实验对象6周龄雄性wsar大鼠52只,体重体组织00±10g,由中国医科大学实验动物部提供,每笼8查。CNMHG只,分笼饲养。按昼夜时程,在室温及稳定湿度条件1.2.2胃组织病理学检查:胃组织行常规HE染色临床消化病杂志201年第13第4期159光镜下观察胃组织(主要是粘膜层)的病理改变。表2停止灌注乙醇后1个月模型组与对照组胃ADH灰度值1.23ADH酶组织化学检测方法1:(1)迅速把组织x±s)切成适当大小(约5×5×3mm),放入OCT包埋剂,用组别ADH(x±)干冰丙酮或液氮迅速冻结。(2)用 Cryostat(-1516周对照组129.09±11.7020℃)制成12m之冰冻切片。(3)用0.1MPBS(p型组130.01±9.104)稀释2%~4%的戊二醛固定1分钟。(4)用0.1与对照组相比P>005MPBs洗45分钟或过夜。(5)切片在下述孵育液中孵育,用NBT法为37℃,60分钟。乙醇四唑盐还原3讨论酶的孵育液:0.1MPBS(pH7.4)10m,NAD’60mg,45%乙醇3ml,NBT6ml,蒸馏水1ml,PMS3ADH是乙醇代谢通路上的重要酶类之一,它主mg。(6)用蒸馏水冲洗。(7)用甘油胶封固。(8)对照要氧化乙醇成乙醛,乙醛又在乙醛脱氢酶作用下生成实验:在孵育液中,不加乙醇或n丁醇而用蒸馏水代乙酸最后代谢成二氧化碳和水。目前已发现的ADH替。光镜下通过观察反应产物沉淀密度的变化来反映有7个基因型表现型分为5类。ADH主要为aBy、各组之间ADH的活性变化;并用 LUZXC-F灰度图像xx、0亚单位组成二聚体,分布广泛,主要分布于胃肠分析仪(日本产)测定ADH的灰度值进行指标量化。和肝脏内。胃ADH主要包括3类即I类、Ⅲ类Ⅳ类1.3统计学处理:结果经计算机SAS6.11统计软件ADH。在1985年, Julknmen等6发现静脉给予和进行方差分析和q检验。口服同等数量的乙醇后其血乙醇和乙酸水平是不同的。他们发现静脉给乙醇组的血乙醇水平明显高于口2结果服组的血乙醇水平;而且血乙酸即乙醇代谢产物的水平在口服给予乙醇者比静脉给予乙醇者明显升高。由21胃组织病理学改变光镜下模型组与对照组此推论:乙醇部分容量没有进入全身循环,而在胃肠道HE染色结果对比可见胃粘膜层细胞(包括主细胞和代谢这种部分乙醇在胃肠内的代谢叫乙醇首过代谢壁细胞)水肿变性;且48、12周末模型组主细胞和壁( First pass metabolism,FPM)细胞水肿变性逐渐加重。停止灌注乙醇后1月模型组乙醇FPM可调节机体对乙醇的生物利用度,缓胃粘膜层细胞(包括主细胞和壁细胞)恢复正常。解乙醇对肝脏、脑及机体其它器官的毒害作用。因此2.2胃组织ADH酶组织细胞化学染色结果胃FPM的研究引起了学术界相当大的关注。DpadADH主要定位于周粘膜层的壁细胞和主细胞,呈紫蓝等报道FPM在餐后比在禁食情况下大得多;FPM色。停止灌注乙醇前各模型组胃ADH活性明显低于在女性要比男性低。 Caballeria等3!报道胃切除病人对照组(P<001),并随乙醇灌注量的增加和灌注时比健康人低。近年来胃ADH在乙醇的FPM中作用间的延长4周8周12周胃粘膜层ADH的活性进行倍受人们瞩目认为胃ADH在乙醇的FM中起主要性下降(P<0.05)。停止灌注乙醇后1个月模型组胃作用t2S。粘膜ADH活性明显恢复(P>0.05)。酶组织细胞化在本实验中,我们应用酶组化方法研究长期灌注学染色 LUZEX-F灰度值结果见表1、2。乙醇后大鼠的胃ADH活性变化及停止灌注乙醇后的1停止灌注乙醇前攘型组与对照组胃粘胰ADH灰度值胃ADH活性改变,同时进行胃ADH的细胞定位,及x±)胃ADH活性变化与胃粘膜病理变化的关系。研究发现模型组的胃ADH活性较对照组的胃ADH活性明4周对照组5127110显下降并随乙醇灌注量的增加和灌注时间的延长呈模型组138,21±8.86进行性下降,而停止灌注乙醇后1月胃ADH活性恢8周对照组复正常。这与 watanabe9的报告一致。提示长期饮换型组15847±11.96酒会降12周对照组126.31±11.71从而增中国煤化工度,加重了乙糗型组8:17021:1.0。醇对机fCNMHGH反应产物主与对照组相比P<001,与前期相比P<0.05要沉淀于粘膜层的壁细胞和主细胞的胞浆中,说明了方数据临床消化病杂志2001年第13巷第4期胃ADH主要位于壁细胞和主细胞的胞浆中。995,216:216另外,我们对停止灌注乙醇前后大鼠的胃粘膜进3chle,FaM. Hemander-manozr,tra. Gasric origin行了同步HE染色,发现模型组4周、8周、12周末胃the first-pass metabolism of ethanol in humans: effect of gastrectomyGastroenterology, 1989, 97:1205枯膜层璧细胞和主细胞发生水肿变性,且随乙醇灌注4 Toshimitsu W,nkmr. Double staining procedure for histochem量的增加和灌注时间的延长其程度逐渐加重;而对照a localization of alcohol and aldehyde dehydrogenase activities in组和停止灌注乙醇后1个月的模型组胃粘膜均正常。mouse liver. Acta Histochem Cytochem, 1989, 22(3):402这一组织学结果提示长期饮酒引起胃粘膜ADH活性5kuhA,ErgwGold bery Genetic markers of alohol abuse.下降可能是由于壁细胞和主细胞水肿变性引起的。这Clinical Chimica ActH, 1997, 257: 1996 Jullunen RK, Pipadova C. Lieber CS与Tery提出的乙醇对胃粘膜损害机制相一致。ethanol: A gastrointestinal barrier Against the systemic toxicity of由于胃ADH在乙醇的FPM中起重要作用,胃粘thano Life sci, 1985, 37:56膜ADH活性下降导致FPM的下降,从而加大了慢性7wa C, Wormer TM, Julkunen RJ, et al. Effects of fasting and嗜酒者的乙醇生物利用度,加重了乙醇对肝脏等器官chronic acold consumption on the firan pam metabolism of ethand的负荷,加速了酒精性肝病等疾病的发生发展。因此Gastroenterology, 1987, 92:1169了解冒粘膜ADH活性变化诱导ADH的活性,将为8DdwC.FemM, Lieber Cs. Gastric metabolism of ethandbility in men and women. In: Biomedical酒精性肝病等疾病的预防和治疗提供新的途径and social aspects of alcohol and alcoholism, ed. Kuriyama K and Ishi鲁考文献1 Shih JY, Chin SL, Chew WW, et al. Human stomach alcohol and 9 WatAnabe M. Immunohistochemical lcalization of ADH in the stomaldehyde dehydrogenases: comparison ol expression pattern and activi-ach before and after abstinence of alcohol in aloobolics-using confocales in alimentary tract. Gastroenterology, 1997, 112: 766laser scanning microscopy. Kurume Med J. 1997, 44(4): 263.Hirokazu yokoyama, Enrique barona, Charles Lierber. Upstream 10 Terry L, Macmath MD. Aloobol and gastrointestinal bleeding. Emergon of its exMed Cin North Am, 1990, 8(4):859pression. Biochemical and Biophysical Research Communication(20010114收20010411修回)缺血性结肠炎8例诊治体会R55 B赢樊铁路医院(襄樊441003)田新社张慧松襄市第一人民医院赵文刚本组缺血性结肠炎8例,男5例,女3例,年龄58-73岁,平均62岁。其中高血压病4例次(下同),脑血栓后遗症1例冠心病1例,糖尿病3例,习惯性便秘2例慢性支气管炎、肺气肿2例。全部病例均有突发性腹痛。其中便血6例发热5例腹胀3例悉心、呕吐2例。纤维结肠镜检查结果:乙状结肠粘膜充血、水肿、糜烂3例结肠脾曲粘膜充血、水肿散在浅溃疡2例降结肠粘膜增厚、肠腔狭窄1例,乙状结肠粘膜充血、水肿、激疡1例,横结肠近牌曲处粘膜散在浅溃疡1例。病变肠段和粘膜主要表现为肠粘膜轻度弥漫性充血、水肿或散在片状充血、红森及意合期溃疡,血管网仍较模帼不清。病理检查结果:均为结肠粘膜非特异性炎症。后期复查可见枯膜下含铁血黄素沉着。根据临床表现纤维结肠镜检查和病理检查结果结合基础疾病并排除上消化道出血疡性结肠炎、结肠克隆氏病肠结核、大肠癌、慢性结肠炎等疾病而确定诊断。治疗:(1)扩管治疗:静脉点滴复方丹参、黄芪等,口服消心痛、肠溶阿斯匹林等7~14天。停用缩血管药物。(2)全身应用广谐抗生素,以预防和减轻肠道继发性细菌感染,减少细菌毒米产生,减轻内毒素血症。(3)下消化道出血明显者于结肠镜检查时给予凝血酶1000-2000u局部喷洒止血,另外口服凝血酶5000-100u,tid,口殿思密达等肠粘胰保护剂。结果:8例经纤维结肠镜检查、病理检查确诊为非坏疽型患者,全部痊意。缺血性结肠炎可分为坏疽型和非坏疽型两型。坏疽型为不可逆性肠管缺血、坏死,全身中毒症状重有腹膜炎体征,死亡率高应尽早剖腹手术,切除病变肠段(20001222收稿中国煤化工CNMHG