苜蓿总甙提取工艺的研究

苜蓿总甙提取工艺的研究魏晓玲’,孙海洲2,卢德勋2,白刚(1内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特010018:2内蒙古农牧业科学院,内蒙古呼和浩特010030;3内蒙古鄂尔多斯市三顷地种牛场,内蒙古鄂尔多斯014600)随着人们对苜蓿认识的不断深入,逐渐发现苜蓿中的一些生物活性成分,如苜蓿皂甙、苜蓿多糖摘要:笔者研究了苜蓿总甙的提取工艺,通苜蓿黄酮等,其中苜蓿皂甙因为具有溶血特性且味过乙醇浓度、固液比、提取次数、提取温度4苦,能够引起家畜臌气,被认为是苜蓿中的抗营养个单因素设定L(34)正交试验,确定苜蓿总因子。Lu等(1987)研究表明,添加2%和4%的苜甙最佳提取工艺:乙醇浓度70%、固液比1蓿皂甙可分别降低瘤胃原虫34%和66%。刘凯10、提取2次、提取温度80℃。等(1999报道,苜蓿皂甙能够明显促进试验大鼠关键词:苜蓿总甙;正交试验胆固醇的排泄,促使正常培养内皮细胞NO的释中图分类号:Q946文献标识码:A放。丛学滋等(1988)研究表明,苜蓿皂甙可使家兔文章顺序编号:1672-5190(2007)03-0028-02血清总胆固醇明显下降,降低主动脉壁中总胆固醇的沉积。因此,苜蓿皂甙作为一种生物活性成分具有潜在的开发价值12.3苜蓿总甙的提取方法:取苜蓿草样1000g,1材料与方法置于圆底烧瓶中,按照正交设计的条件进行回流1,1试验材料提取,正交试验设计方案见表2。提取后过滤,滤液111样品:苜蓿由内蒙古农牧业科学院草原研减压浓缩,浓缩液用等体积的石油醚、正丁醇分别究所试验基地提供。萃取3次,然后将正丁醇萃取液合并浓缩,在水浴1L2试剂:无水甲醇、无水乙醇、高氯酸、冰醋锅上蒸干恒重,用蒸镏水溶解,并定溶于50mL容酸、香兰素均为国产分析纯;齐墩果酸标品购自北量瓶备用。124标准曲线衷13仪器:78可见分光光度计、分液漏斗、1241溶液配制与旋转蒸发仪医用真空泵圆底烧瓶球形冷凝管①显色剂配制:取香兰素5g,加冰醋酸10等mL溶解摇匀。科12试验方法②对照品溶液配制:精确称取干燥至恒重的12样品制备:从茎的基部剪取苜蓿地上部分,齐墩果酸标准品545mg,置于5mL容量瓶中,加并于65℃烘箱中干燥后,放入小型粉碎机粉碎,入甲醇定容,摇匀备用。密封保存备用③样品溶液制备:将上述提取得到的苜蓿总l.22正交试验:采用L(34)正交表,水平设置见甙,称取50mg,用水溶解并定容于5mL容量瓶表1,通过正交试验筛选苜蓿总甙提取工艺。中,摇匀备用。7醴坦验的因素水平℃,%收稿日期:2007-01-25收稿日期:2007-04-1H中国煤化工作者简介:魏晚玲(1978—),女,在读硕士研究生CNMHGO(温度)D(乙醇浓度)主要研究方向为反鱼动物营养与调控通讯作者:孙海洲(1971—一),男,博士,研究员,主要研究方向为反刍动物营养。E-mail:sunhaizhou@china.com万第3期垂28试验矸宽表2正交试验方案及其结果℃,%表3方差分析因素变异来源离均差平方和自由度方差处理号A总甙总乙醇浓度20.32362011(固液比)(次数)(温度)(乙醇浓度)提取率提取温度002100l1l(l:10)l(60)固液比001514481(1:10)223456l(l:10)3134提取次数(误差)001020.0052(1:12)1注:Fos(2,2)=19000;Fm(2,2)=99.000。2(1:12)20.72根据正交试验结果,提取工艺优化条件为固液2(1:12)3l(60)l(70)l:16)190比1:10,提取次数2次,温度80℃,乙醇浓度70%。4.2303(1:16)23结语3(1:16)30.702571该试验仅作为苜蓿总甙提供工艺的初步探89TTTKKK3.8613.2912970l.410索,以期为后来的苜蓿总甙提取工艺的改进提供3.471参考。3.3093.4590.857参考文蔽0970.9900.553〔1〕刘凯,余书勤苜蓿皂甙对胆固醇排泄和内皮细胞释放10231.1631.157一氧化氮的影响[J〕.徐州医学院学报,1999,19(6)1.1031.1531.267442-444.0.2640.0660.2772〕丛学滋,秦孟根,王书安苜蓿总皂试的提取与分析[J注:苜蓿总甙提取工艺影响的主次顺序为乙醇浓度>提中药通报,1988,13(9):39取温度>固液比>提取次数。〔3〕贺玉薇王松柏王代军,等苜蓿皂甙提取工艺研究[草原与草坪,2005,11(5):27-291242标准曲线及回归方程〔4〕秦孟根,刘大跃,姜春根紫花苜蓿不同部位总皂甙含吸取对照品溶液40,50,60,70,80,90μ,水量测定[J中草药,1999,21(1):38-39浴挥干溶剂,加入显色剂02mL及高氯酸08(5)贺玉微,王松柏,许俊东,苜蓿天然成分的营养保健功mL,水浴70℃加热15mn,流水冷却后加入冰醋能及其开发前景[A第二届中国苜蓿发展大会论文酸5mL,摇匀,静置10min。以722型可见分光光集C北京:北京出版社,2003度计于545mm处测定吸收度,根据对照品浓度和6)LnCD, Jorgensen N A. Alfalfa saponins affect site and吸收值可得回归方程式:C=10.119A+1.5093,其中extent digestion in ruminants [J]Journal of NutritionR2=0.9995,A为吸光度,C(mg/100mL)为浓度。1987,117:919-9271.2.4.3样品含量测定吸取样品液100μL,按标准曲线制备项下方法操作,显色,于545m处测定吸收度,随行空白坦桑尼亚有49人死于裂谷热根据上述回归方程计算样品中总甙的总提取率。据报道:截至2007年4月9日,坦桑尼亚2结果与分析境内已有49人死于裂谷热病。这一统计数字试验设计采用L4(34)正交表,即四因素三水平是坦桑尼亚总理洛瓦萨9日在多多马省视察做9次试验,正交试验方案及其结果见表2。时公布的。由表3可知,乙醇浓度对总甙的提取率有显多多马省是坦桑尼亚的畜牧大省,饲养有著性影响(P<0.05),而提取温度、固液比、提取次300多万头(只)牛羊,但到目前仅有7万多头数均无显著影响(P>0.05),由表2可知,随着溶剂(只)注射了裂谷热疫苗用量的增加,总甙提取率下降,所以固液比选择1裂谷热是东非大裂谷地带雨季易流行的10;提取次数在二次浸提时达到最大值1163%V中国煤化工羊中传播,自所以浸提次数选择2次;随着温度的升高,总甙提CNMHG动物传播取率增加,因此提取温度选择80℃;乙醇浓度从给人。患者多出现急性腹泻、高烧、脑水肿,并70%增加到90%,但总甙提取率呈下降趋势,因伴随肝肾功能严重受损,有些病人还会因脑血此乙醇浓度选择70%为宜。管破裂出血而死亡。(本刊辑)2007年第3期