JB/T 9358-1999 液相色谱固定波长(254nm)紫外吸收检测器试验方法

ICs17.180.99中华人民共和国机械行业标准JBT9358-1999液相色谱固定波长(254nm紫外吸收检测器试验方法Test method for fixed wavelength(254nm)uV detector used in liquid chromatography1999-08-06发布20001-01实施T93s8-1999前言本标准是对ZBN52001-86液相色谱固定波长(254m)紫外吸收检器试验方法》的修订:修订时,对原标准作了编辑性修改,主要技术内容没有变化本标准自实施之日起,代替BN52001-86本标准的附录A是标准的附录。本标准的附录B是提示的附录本标准由北京分析仪器研充所提出并归口。本标准负责起草单位:北京分析仪器厂、北京分析仪器研充所、上海分析仪器厂、上海第三分析仪影厂、四川分析仪器厂、天津大学本标准主要起草人:诸兆烨、张心怡、吴军。本标准于1986年6月首次发布中华人民共和国机械行业标准液相色谱固定波长(254m)紫外吸收检测器试验方法代替ZBN52001-8Test method for fiNed wavelength(254nm)tv detector used in liquid hromatography1范囤本标准规定了液相色谐固定波长(254m)紫外吸收检测器的定义、试验氯件、试验方法、试验报告极限状态下的性能试验、运输、运输乙存基本环境试验等本标准适用于液相色谱仪专用的、固定破长(25m)紫外吸收检测器(以下简称检测器)。2引用标准下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文,本标准出版时,所示版本均为有效。所育标准都会被修订,使用本标准各方应探计使用下列标准最新版本的可能性。JB/9329199仪器仅表运输、运输贮存环境条件反试验方法本标准采用下列定义3.1吸光度 absorbance用入射光强度(1。)与光透过试样后的强度(I)之比的常用对数来表示32吸光度单位 absorbance unit(Au)它是吸光度的计量单位。当l,=0.1,时,吸光度A等于1AU33检测器量程 detector span用AUFS表示:它表示记录器某量程的满标所代表的吸光变值样品池内介质不流动3.5动态 dynamic样品池内充人溶剂,其流量为lml/aine3.6短期噪声shor- term noise每厘米池长中,平均每分钟内检测器信号随机变化的最大振幅。用N,表示,单位为AU/cm37实测短期噪声 measured short- term noise经池长折算的短期嗓声。用N,表示单位为AU23.8长期噪声long- term noise每厘米池长中,每10min内检测器信号随机变化的最大振幅。用N表示,单位为AU/m3.9課移 drift国家机工业局1999-08-06批准2000-01-01实施单方向变化的基线的平均斜宰,以1h用出吸光要计算。用D表示,单位为AUh310流量灵敏度aow- sensitity在检测器信号对流量变化的曲线中流量等于1ml/min时的斜率。用S表示,单位为AU· min/ml在检测器的线性范图内,流动相组成阶式变化时输出信号从10%变化到90%所经历的时间。单位3.12最小检测浓度 minimum detectable concentration相当于两倍静态实测短期噪声的被检测特定试样的浓度。单位为g/m3.13性范 linear range检信号与被检测试样浓度的线性度在95%条件下,最大线性浓度(C)与最小检浓虔(Cn)之4试验条件4.1试验环境8!环境温度:5℃-35b周压空气相对混度:不大于80c)供电电源:电压220±2,频率50H±0H;d)内不有易燃、易烟和强腐蚀性气体,并避免强烈机械振动和电磁干扰;c1室内应免空气对流和温度急剧变化;i不允许日光直接照射到正在漶试的检测器上42溶剂和试剂4.2.1必项采用新鲜的二次馏水(以下简称水)。在水中可添加2%的异两醇,以延长贮时间:4.22甲异丙、丙熙联苹和尿嘧啶等溶剂和试剂,一律不低于分析纯级。423制备标准样品的溶液可用称量法或体积法c溶质称釐的相对误差小于0.5%:释比不大于100倍:最小筱稀释量为0.5mc4.3输液系统c)流量范围:不低于0.3 2ml/min-6ml/min;b)流量煎复性:优于±1%c)最好能程序控制流量梯度和溶剂梯度4.4记录器或效据处理系统)相应时间:不大于0.5;b)走纸精度:优于±1%4.5校准用紫外分光光度计)波长范围:220hm-350hmb)光谱宽度:2m-8nm;c)吸光度的测量精度:优于=1%d)波长精度:优于±0.75rm5试验方法试验程序除5.1吸光度的校准必须先做以外,其它试验可根据具体情况灵活安排。5.1吸光度的校准(见图1)JB/工958-1999甲溶液—2%异丙醇的水溶液。乙溶液—丙和甲溶液的混合液,丙酮含量为0.1%-0.15%5.1.2在分光光度计上,以甲溶液为空白,测量254m波长处乙溶液的吸光度Aa51.3在输液系统和检测器之间连接一根不锈钢實(一般长200mm-300mm,内径为0.lmm-0.25mm)流量为6nl/min,按阶式变化分别把甲溶液和乙溶液输送到检测器,在记录仪上得到阶式信号A,单位为0平落液100图1吸光度射校准5.1.4计算校准值:A,=b…相对误差=AuAx100%(3)式中:b。—准分光光度计上测量池的试样液层变,cm:b;—坡测检测器流动池的试样液层厚度,cm52静态和动态下嗓声和移521在静态下测量时,先用空气和氮气冲洗样品池在动态下测量时,则用甲醇反复冲洗样品池及其连接管至除去其它溶剂可溶物和空气为止若有参比池则克人空气或氮气,以确保参比池洁净注:甲醇必须经过馏和过滤。522启动检测器,从制厂规定的稳定时间结束时起进行测量:记录检测器最灵敏档的基线.不少于lhe在此期间室温变化不得超过±2℃。523在动态下测量时,将输液系统连接粒度为5或10的ODs柱然后再接检测器。以流量lml/min的甲薛溶液泵人检测器重复5.2.2步骤记最它在动态时的基线,以测量检测器在动态下的噪声和漂移52.4计算524.1短期嗓声的计算如图2所示,数对平行线每一对相当于1min-lmn长度,以构成15mn内信号的包络e画平行线时应使两线距离最短。技吸光度单位测量各平行线间的纵向距离(Y,)按公式(4)计算便得到检测器的静态(或动态)短期噪声。∑ybJBT958-199(X:= 1/2min-Imin图2短期噪声的测量图例524.2长期噪声的计算如图3所示,标出15min短期噪声期间每段包络的中点。在这些中点两侧画一系列平行线每一对平行线相当于10min长度,选出最大的纵向距离,用池长除此距离便得到静态(或动态)下的长期嗓声图3静态(或动态)长期嗓声的测量图例524.3静态(或动态)漂移的计算如图4所示.在记录的基线上绘制纵向距离最短的一对平行线,该平行线斜率即为检测器在静态(或动态)下的基线的漂移。(6)图4漂移的测量图例53流量灵敏度531待检测器稳定后,以甲醇为溶剂(不接色谱柱),流量分别在0.5ml/min,1.Oml/min,2.Oml/min,30ml/min和40ml/min下进行测量,并选择适当的量程,得到如图5的记录。JBr9581999各流量保持时间根据基线稳定情况确定5.32计算根据图5的测量结果,绘制以流量为横坐标,检测器信号变化的绝对值为纵坐标的流量灵敏度曲线图。在1ml/min处画一切线(见图6)所得斜率即为该检测器的流量灵敏度。吸光度(AU)x10°时间(min)图5流量灵敏度的测量图例吸光度(AL)x10流量(ml/man)图6流量灵敏度计算图例54上升时间(见图7)5.4.1在输液系统和检测器之间串接一个定量管进样阀。定量管的容积至少要大于检测器从入口至出口总容积的三倍至五倍。542用甲醇作溶剂用联苯(2×10°g/ml-4x10g/m)或尿嗜啶(8×10°g/ml-10×10g/m)作为溶质54.3把流量调到加nl/min。544利用定量管进样,获得流动相组成的阶式变化,用记录器记录检测器的输出信号。545然后在3ml/min的流量下测量。如果所得时间缩短,则还应在更高的流量下反复试验直至数值变化趋于最小。在此条件下测量检测器的上升时间JB/Tr98s9-1999上升时闻(s)图7上升时间的测量5.5最小检测浓度和线性范围5.5.1选择适当物质溶于甲醇该物质在规定波长内为宽谱带。制备的一系列试样其最高浓度应超过线性范预期值的上限。按423的要求准确地、顺序地稀释溶液但最低浓度不得大于最小检测浓度注:试样用联苹、间三联苯或5.52依此将稀释的溶液充满样品池。在静态条件下测量其吸光度值5.5.3计算5531根据短期噪声求出该试样的最小检测浓度计算公式N,’=N,b:…C=2N,C/H(9)式中:C—试样的浓度,g/mlH—相应的记录器信号,AU5532根据所测数据,绘制应曲线,在外推响应线上任取一点R,作图求出R',由R'过原点连线交于卖际响应线,求出CC/C,即为检测器的线性范图。如图8所示注;在双对数您标纸上作图时,则应在R'点作外推响应线的干行线,恨据该线与响空曲线的文点求出Cs吸光度(AU)外推啊应实际响度图8线性范图计算图例迅BT9359-1996试验报告检测器性能试验的各项数据及其重要参数均按附录A的统一格式填写,并与相应的图谱成检测器成套特性的试验报告7极限工作状态下的性能试验71上限(下限)工作湿度试验将检测器置于试验室〔或箱)内,检测器处于工作状态。使试验塞升温(降温)至35℃(5℃).恒溫保持黏h,恒温精度±2℃,而后在此温度下检验检据器的工作特性72极限工作湿度试验好检测器置于试验室(或箱)内,并处于工作状态。先将室内温度调到3℃,保持l,并在l内使涅到80%保持黏h后,检验检测器的工作特性3对供电电源适应能力的试验7.3.1将交流供电电压由额定值220N连续调到198V,检验检,器的工作特性。再将交流供电电压由额定值230连续调到242V,检验检测器的工作特性73.2将供电电源的频率由额定值50H调到50.5Hx,检验检器的工作特世。再从额定伍50H调到抑9.5H、检验捡骢器的工作特性8运输、运输贮存基本环境试验按JB/T939进行。其中高温55℃,低温-40℃,跌落高度9其它9.1检测器在极限工作状态下以及经过运输、运输贮存基本环埃总以后,可以以粒测器在静态下的短期噪声、长期噪声和漂移作为该检测器的工作特性。9.2在下列条件下,需进行极限工作状态及运输、运输贮存基本环境的试验:a)试制的新产品;b)产品的设计、工艺或使用材料的改变影响产品的性能时;c)不经常生产的产品再次生产时;d)成批大量生产的产品进行定期抽查。93关于检测器特性的进一步说明见附录B。B/Tr858-1999附录A(标准的附录)LcTv检测醫试验报告衰AI型导/规格制透厂出厂维号出厂日期测试日期检测器的重要参致检西显示番灯的平均斯命灯的类狙耐压极限池的材料进口管检测器容积盘调节单光束双光裒光电器件类盟光路比樺品/参比=稳定时披术指稀试验数据t吸光度的饺谁e)-A,Asx 100%%2.上升时静态稳定性AU/h4动态稳定性5流量是度AU·min/ml6最小检测浓度7线性范国论备注附录B(提示的附录)关于检测器特性的进一步说明为了全面评价检测器除了测试方法中规定的各项主要性能外,还有一些反映检测器特性的参数,分述如下B1稳定时间:仪器从启动至正常工作所需的时间。B2波长:指通过样品池的最强光谱的中心波长。B3带宽:半峰高处的谱线宽度其中宽带磷光体的带宽取决于滤光片的带宽。B4池长:沿光轴方向测量流动池的长度。B5池容积:样品池光通过部分的容积B6检测器容积:从入口管接头至出口管接头之间的检测器的总容积ε入口管接头直接连接色谐柱出口管接头能连接另一只检测器的入口管接头B7参比池B7.1单光束检测器没有参比池B72双光束检测器有参比池。在此情况下,还应说明或标明如“参比一空气”。B73如果双光束检测器的样品光路与参比光路比不是1:1(即不对称的话)应予以说明eB8显示器:如果采用显示样品光度检测器光量的器件则需说明用何种显示器。B9灯类型:指用于检测器的光源类型。在使用低压汞灯时,应了解254m相对发光强度:B10灯的平均寿命:五盏以上灯连续工作的平均寿命,一般指亮度降低一半而不是指失效B11耐压极限:保证测量池不漏泄时的最大工作压力。B12热平衡装置:若有此装置可使溶剂流的温度同于检测池的温度。B13池的材料:指与流动相接触的材料。B14进口管:进口管接头包括连接检测泡全部管道的材料长度和内径eB15零点调节量:利用粗调和微调能改变检测器零点的调节量B16光点器件的类型B17滤光片:若有滤光片,需指出类型和半宽度。B18衰减精度:检测器各量程的最大测量误差。表B1Uv检测器的参考值参考值静态炬期确声05x10-15x10°静态长期嗓声0.5×10--1x104动态短期嗓声AU/cm动态长期嗓声1x104-5x10静态派移AU/h5x10-10x10动态漂移10-6x10流量灵教度最小检测浓度取决于所用的溶液线性范围(比值5x10·-10x10°上升时间检测器量程01-2.6253.7,280JB/T9358-1999表B1(完)位参考值池容积检测器容积参比物静态空气示器记录器读数毫伏)类型灯的平均寿命8500耐压极限1.5热平衡装置他的材料0Cr8N、122不锈钢、聚四氟乙烯,石英进口:材料、长熨口!Cl8Ni、12M2不锈钢,L100.40.1-0.3芩点调节量0.15AL老器件光电倍增管、光电二圾管大无,干涉滤光片