铅和乙醇对雄性大鼠生殖系统的联合毒作用

286中国工业医学杂志2006年10月第19卷第5期 Chinese J Ind Med Oct2006,Vol.19No.5参考文献[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1991, 88(17): 7797-7801[1] Yoshida M, Watanabe L, Horie K, et al. Neurobehavioral changes[5]李国君,吴德生.中枢神经系统中一氧化氮和一氧化氮合酶研究进netallotl-null mice prenatally exposed to mercury vapor [J]. Toxi展[J]国外医学卫生学分册,1999,26(2):6568col Lett,2005,155(3):361-3686] Keys SA, Zmerman WF. Antioxidant activity of retinal glutathione[2 Yamada K, Sasaki Y, Masuda K, et al. Role of nitric oxide in learningand taurine in bovine photoreceptor cell mem-branes [J]. Exp Eye Resand memory processes [J ]. Nippon Yakurigaku Zasshi, 1998, 1111999,68:693-702(2):8796[7]杨兴斌,赵燕,海舂旭,等.硒、锌对索曼神经毒剂诱导大鼠过氧[3] Mittal CK, Harrell WB, Mehta CS, et al. Interaction of heavy metal化损伤的保护机制[J]中国临床康复,2004,9(8):1792-1793toxicants with brain constitutive nitric oxide synthase[J]. Mol Cell Bie[8]刘亚华,李积胜,闫蓓.牛磺酸锌对染铅大鼠海马NOS活性和hem,1995,149-150:263-265NOS蛋白及基因表达的影响[J]营养学报,2004,26(5)[4 Dawson TM, Bredt DS, Fotuhi M, et al. Nitric oxide synthase and net337-340ronal NADPH diaphorase are identical in brain and peripheral tissues铅和乙醇对雄性大鼠生殖系统的联合毒作用谭成森,靳翠红,刘秋芳,赵剑,蔡原中国医科大学公共卫生学院毒理教研室,辽宁沈阳110001)摘要:采用整体动物实验方法,观察铅和乙醇对大鼠精子数量和质量,以及血中性激素水平的联合作用。结果显示,精子计数联合组比铅和乙醇单独作用组显著减少;精子活动度分析联合组与其他各组比较显著下降。铅和乙醇单独作用均可使雄性大鼠血清睾酮〔T)升高,促黄体生成激素(LH)下降,联合作用使T降低,LH较单独作用组升高。提示铅和乙醇联合染毒对雄性大鼠生殖毒性影响可能具有增毒作用。关键词:铅;乙醇;精子;性激素中图分文献标识码:A文章编号:1002-221X200605-0286-02Study of collaborating effect of lead and ethanol on reproductive function in male ratsTANDepartment of Toxicology, College of Public Health, China Medical uninShenyang 1 10001, ChinaAbstract: Rats were used to observe the effect of lead and ethanol on the quantity and quality of sperms and the levels of sex hormones in the study. The results showed that sperm counts in lead or ethanol administrated group were all decreasedd withtrol rats, the sperm count in lead-ethanol collaborating exposure group was much lower than that of lead or ethanol group. The motilityof sperm in collaborating exposure group was also obviously decreased compared with lead or ethanol group. Additionally the sex hor-ones determination also revealed that lead or ethanol might induce a marked decline of serum testosterone(t)level and a definite in-crease of serum luteinizing hormone( LH level, whereas collaborating exposure of lead and ethanol showed some adverse effect on ser-um T and LH levels. It is suggested that the combining exposure of lead and ethanol might produce some additive effect in reproductionoxicity in male ratsKey words: Lead Ethanol Sperm Sex hormone铅对生殖系统的损伤,已由流行病学调査和动物实验广泛要试剂与仪器证实2]。乙醇对雄性生殖系统的损害近年来已引起人们的关醋酸镦分析纯沈阳试剂一厂)乙釀(分析纯沈阳市富康注。本研究采用整体动物实验方法,观察铅和乙醇联合作用对消毒药剂公司)睾配 testoterone)放射免疫分析试剂盒(天津大鼠精子数量和质量以及血中性激素水平的影响,初步探讨铅九鼎医学生物工程有限公司)黄体生成激素( lutenizing hor和乙醇对雄性生殖系统的联合毒作用及其可能机制mone LH)放射免疫分析试剂盒(天津九鼎医学生物工程有限公1材料与方法司)显微镱日本 LYMPUS)恒温水浴箱(HH42型常州国华1.1实验动物电器公司成年 Wistar雄性大鼠32只,体重180~200g,由中国医科中国煤化工50西安大学实验动物部提供,饲养1周后分组。动物室温度18-23℃CNMHG按体重随机分为4组:对相对湿度40%~70%,动物自由饮水、摄食。照组、醋酸铅组、乙醇组、联合组。乙醇组大鼠按2.16gkg给1.2予26%乙醇,经口灌胃染毒,连续8周,每周5d每天1次;醋作害:词摇(19:)男日1:5方向:生殖毒理主酸铅组大鼠自由饮水摄入5%醋酸铅,连续8周,毎周5d;联合组大鼠乙醇和醋酸铅染毒剂量、方式、时间与乙醇和醋酸铅*:通讯作者,教授,博士生导师中国工业医学杂志2006年10月第19卷第5期 Chinese J Ind Med Oct2006,Vol.19No.5287单独作用组相同;对照组与染铅组按lml/l00g蒸馏水灌胃,时玻璃棒沿着管壁轻轻剥离,1000/min离心10min,小心吸取间与其他各组相同血清,按试剂盒说明书应用放射免疫技术对血清睾酮、促黄体1.3.2睾丸及附睾脏器系数的测定睾丸系数=(睾丸质量生成素水平进行测定体重)×100%,附睾系数=(附睾质量/体重)×100%1.4数据处理1.3.3血清铅含量测定取肝素抗凝血0.1ml,加稀释液1.0用统计软件SⅣSSl0.0对各项指标的实验数据进行均值计算各ml,振荡混匀,原子吸收分光光度计石墨炉法测定组间进行单因素方差分析。其中血铅浓度用几何平均数表示。1.3.4精子检查大鼠处死后立即剪取一侧附睾尾称重后于2结果盛有2m生理盐水的小烧杯中剪碎用两层擦镜纸过滤制成精2.1动物体重与睾丸、附睾脏器系数及血铅浓度子悬液。取一滴悬液推片晾干,甲醇固定伊红染色蒸馏水冲如表1所示,体重、附睾脏器系数各实验组和对照组比较洗晾干后镜检。每只大鼠计数1000个精子记录畸形精子数并无统计学意义(P>0.05)染铅组和乙醇组的睾丸脏器系数与计算精子畸形率。将悬液置于37℃水浴中孵育20min后滴片光对照组比较,无统计学意义(P>0.05),但联合组的睾丸脏器镜下计数200个精子中的活精子数和各级活动精子数并计算活系数显著高于对照组(P<0.05)联合组与染铅组的血铅浓度精率。悬液经60℃水浴杀死精子用血球计数板计数精子再折显著高于对照组和乙醇组(P<0.05)联合组的血铅浓度与染算成精子数个)附睾(g铅组比较虽无统计学意义,但联合组均值明显高于染铅组1.3.5血清性激素的测定将采集的血液室温下静置1h,用表1动物睾丸、附睾系数及血铅浓度测定结果(x±s,G±s,n=8)组别体重(睪丸脏器系数(%)附睾脏器系数(%)血铅浓度(μmo/L)对照组338.80±26.0.885±0.1430.181±0.077058±0.003染铅组318.00±48,4±0.15811.610±0.178乙醇组289.80±54.1.064±0.125184±0.0220.065±0.003△联合组284.25±61.391.093±0.1540.174±0.02317.257±0.213与对照组比较,*P<0.05;与联合组比较,△P<0.05;表2同2.2精子质量与数量检查及血清性激素水平乙醇组和染铅组与对照组比较虽然未见显著性差异(P>0.05),如表2所示,各实验组与对照组比较,精子数、活精率均但均值有增大的趋势,而联合组与其他各组比较,显著降低(P显著降低(P<0.05),联合组与染铅组和乙醇组比较,其精子<0.05)血清LH染铅组和乙醇组与对照组比较显著降低(P数、活精率也显著降低(P<0.05)而各组之间的精子畸形率<0.05),亦显著低于联合组(P<0.05)比较,差异无统计学意义(P>0.05)血清睾酮浓度测定结果表2各组精子数量、质量及血清性激素水平检查结果(x±s,n=8)组别精子数(107/g)活精率(%)精子畸形率(%)T(ng/dILH mIU/mI对照组3.393±1.80490.00±6.365.6±4.0297.85±91.866.91±0.97染铅组5.9±4.95,33±0.29乙醇组2.082±0.296·△72.00±6.04*△5.5±3.423.00±109.83△5.42±0.47*△联合组1.637±0.39343.63±9.755.8±3.383.84±35.506.48±1.283讨论作用组比较亦显著升高。显示铅和乙醇的联合作用可能使睾丸本实验发现,联合组睾丸系数与对照组比较显著升高。染损伤加重, Leydig细胞受损,分泌T能力下降,引起垂体促性腺铅组、乙醇组和联合组精子计数与对照组比较显著减少,联合激素LH代偿性升高。T分泌减少可以引起精子的产生和发育障组与铅和乙醇单独作用组比较显著减少。联合组精子活动度较碍,使精子数目减少,活精率下降,这与本研究的结果一致。其他各组均显著下降。以上结果表明铅和乙醇对大鼠睾丸系数提示铅和乙醇对雄性大鼠的生殖内分泌的变化呈现明显的增毒及精子有比较明显的增毒作用。作用睾酮对于维持精子的发生和成熟是必需的,由睾丸的 Leydig参考文献细胞分泌,该细胞是LH作用的靶细胞,LH是控制T产生的主[1] Suzan a wadi, Ghayasuddin ahmad. Effects of lead on the male repro-要刺激因子。本研究中,血清T水平乙醇组和染铅组与对照组nd EnvironmentalH中国煤化工比较有増高的趋势,血清LH水平染铅组和乙醇组与对照组比较显著降低,与某些报道的结果相反3。这可能与睾丸中曲细精[2 ]LanceCNMHGKJ]. Arch Environ Health, 1975, 30: 396管受损使支持细胞分泌的雄激素结合蛋白(ABP)减少有关。nilances M. Effectiveness of blood-testis and blood-epididymic barriABP使曲细精管上皮结合的T减少,导致血清中T水平升高。血清T升高又负反馈于腺垂体,使血清LH水平降低。联合组T[4] Sokol rz. Reversibility of the toxic effects of lead on the male reproduc-浓度与其他雍撮显著降低,H水平联合组与铅和乙醇单独e axis [J]. Reproductive Toxicol, 1989, 3: 175